Foxo1-KLF2-S1P1在MG患者胸腺组织的表达

目的 通过探讨Foxo1-KLF2-S1P1在MG患者胸腺的表达,分析其对胸腺T细胞输出的影响。方法 取MG患者及对照组胸腺组织,提取总RNA,通过荧光定量RT-PCR检测Foxo1、KLF2、S1P1及CD62L、CCR7、CD69的表达;制作胸腺组织切片,通过免疫组化了解Foxo1、S1P1、CD62L、CD69、CCR7在胸腺组织的分布与表达。结果 免疫组化显示Foxo1、S1P1、CCR7在MG患者及对照组胸腺都有表达,主要分布在髓质区,MG患者胸腺组织髓质区扩大,Foxo1、S1P1、CCR7表达显著高于对照组;荧光定量PCR结果显示MG胸腺组织Foxo1、KLF2、S1P1、CCR7、CD69的m RNA的水平表达显著增高(分别是5.36±0.728、1.43±2.71、6.1±1.033、5.0±0.932、4.97±1.112,与对照组相比P<0.05)。结论 MG患者Foxo1-KLF2-S1P1高表达可能是MG患者胸腺细胞的异常输出的原因。     

医学微生物学实验教学中开展自主综合性实验的探讨

医学微生物学实验是医学微生物学课程的重要组成部分。为提高学生对医学微生物学实验的学习兴趣,在实验教学中开展自主综合性实验的实验模式,有助于培养学生的动手能力、分析问题和解决问题的能力,为今后学习和工作奠定良好的基础。     

儿童重症肌无力患者胸腺细胞异常增生相关因素分析

目的探讨儿童重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者胸腺细胞异常增生的机制。方法取单纯胸腺增生型MG患者胸腺组织,经病理组织切片、苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色,观察患者胸腺组织的结构和分子表达特点;通过提取胸腺组织RNA和基因芯片检查,分析与胸腺异常增生相关的细胞因子、膜分子及信号通路表达。结果 MG患者胸腺细胞显著增生,CD3分子呈强阳性表达,HLA-DR分子在髓质表达更明显。多种细胞因子、膜分子和信号分子表达存在异常,其中BCL2、CCL22、CCL25、CCL3、CCR7、CCR9在儿童MG患者胸腺显著增高;而CCL2、CSF3、CSF3R、CX3CL1、CXCL9、IL-1R、IFNGR2则显著降低。结论儿童MG患者胸腺细胞异常增生与IL-1R、IL-6、IFNGR2、CCL25、CCR9等细胞因子及其受体的异常表达及信号分子BCL2的异常表达有关。     

MG患者胸腺移植BALB／c nu／nu裸鼠模型的建立及其功能研究

目的:通过建立MG患者胸腺移植BALB/c裸鼠动物模型,探讨MG患者胸腺对脐血干细胞分化的影响.方法:将4 mm3无菌切除的MG患者胸腺和非自身免疫病正常胸腺组织行BALB/c裸鼠左肾包膜下移植,2周后给BALB/c裸鼠静脉输入脐血单个核细胞.胸腺移植60天后通过免疫组化试验检测CD3分子的表达,利用流式细胞仪检测BALB/c裸鼠外周血中人源T细胞、B细胞、NK细胞、调节性T细胞数量.结果:胸腺移植60天,移植的胸腺组织在BALB/c裸鼠肾包膜下存活,组织结构清晰,免疫组化显示移植块中的胸腺细胞表达CD3分子;流式细胞分析显示CD3+、CD4+、CD19+、CD161+细胞以及CD3+CD56+、CD4+CD25+细胞百分率在MG胸腺、正常胸腺和脐血MNC联合移植组明显高于对照组,正常组CD3+、CD19+比例增加更明显,MG组CD4+细胞比例高于先心组.结论:胸腺组织块植入BALB/c裸鼠肾被膜下,能有效存活,并参与脐血细胞在体内的分化;移植的MG胸腺与正常胸腺在脐血细胞中的作用存在差异.MG患者胸腺、脐血干细胞联合移植建立的人胸腺-裸鼠动物模型可作为MG胸腺功能研究、免疫细胞分化成熟研究的工具.     

重症肌无力患者胸腺组织CMTM8、CKLF1及相关趋化因子的表达

目的:比较重症肌无力(MG)患者与非自身免疫对照组胸腺组织CMTM8、CKLF1、相关趋化因子及受体的表达,为揭示MG胸腺异常及其发生机制提供理论依据.方法:用基因芯片筛选差异表达的趋化因子基因,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR方法分别检测正常胸腺和MG胸腺中CMTM8 mRNA的表达,用免疫组织化学方法对CKLF1蛋白的表达和分布进行检测.结果:增生型MG 胸腺组织中CMTM8 mRNA的表达明显高于正常人胸腺(2-△△Ct=8.3),差异有统计学意义;CKLF1蛋白在正常胸腺、MG胸腺中的均有广泛的表达,阳性细胞主要为胸腺基质细胞;CXCR6、CCL2、CCL8、 CX3CL1、CXCL10和CCR1在 MG患者胸腺表达水平显著低于对照组;CCL22、CCL3、CXCL12、CCR5、CCR7和CCR9基因在MG患者胸腺表达水平显著高于对照组.结论:CMTM8及多种趋化因子基因在增生型MG胸腺的表达明显高于对照组胸腺,可能在MG患者T细胞异常发育的某些阶段起重要作用.     

利用基因芯片分析碱性成纤维细胞生长因子诱导脐血干细胞CD34+与CD133+细胞基因表达的差异*

背景：迄今为止,人们利用基因芯片对碱性成纤维细胞生长因子诱导CD34+和CD133+干细胞分化后细胞生物学性状、功能调控、基因变化及其表达差异等方面的认识尚不足,有待深入研究。 目的：利用基因芯片比较脐血CD34+和CD133+细胞基因表达的差异,并探讨碱性成纤维细胞生长因子体外诱导脐血CD34+和CD133+造血干/祖细胞分化的基因表达变化,及其对碱性成纤维细胞生长因子反应性差异。 方法：利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD34+和CD133+干/祖细胞,经含碱性成纤维细胞生长因子、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10~15 d,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEArray®芯片和GEArray表达分析软件进行芯片数据分析。流式细胞仪检测CD34+和CD133+造血干细胞回收率。碱性成纤维细胞生长因子诱导前后CD34+、CD133+细胞形态变化。变性琼脂糖凝胶电泳测定RNA浓度和纯度。基因芯片检测结果。 结果与结论：①对20份脐血分别进行CD34+和CD133+细胞分选,分选CD34+细胞纯度为(77.52±5.06)%,回收率为(2.74±1.59)%;CD133+细胞纯度为(79.16±3.37)%,回收率为(1.12±0.94)%。②新分选出的CD34+细胞呈球形,经碱性成纤维细胞生长因子培养15 d后,多数细胞形态未发现显著变化,部分细胞出现贴壁生长,可见突起和梭形细胞。CD133+细胞呈球形,经碱性成纤维细胞生长因子培养15 d后,细胞明显扩增,由圆球形变为不规则形,部分细胞出现贴壁生长。③CD34+干细胞培养前后总RNA提取质量分别为2 236 ng和1 796 ng;CD133+干细胞培养前后总RNA提取质量分别为2 518 ng和2 191 ng。④在所检测的263个干细胞相关基因中,脐血CD133+细胞与CD34+细胞基因表达差异2倍以上的基因有10种,其中5种基因表达前者高于后者,5种基因表达前者低于后者;碱性成纤维细胞生长因子诱导培养后,CD133+细胞有32种基因表达显著高于CD34+细胞,在检测的263个基因中,未见低于CD34+细胞的基因。证实脐血中新分离的CD133+细胞和CD34+细胞基因表达仅有少数基因存在差异;CD133+细胞对碱性成纤维细胞生长因子的反应性显著强于CD34+细胞,表现为细胞周期调节、信号转导和分化等基因表达增强。     

人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠细胞免疫功能的影响

背景：T细胞在抗感染、抗肿瘤和免疫调节等中起重要作用,但T细胞分化发育机制尚未完全阐明。 目的：观察人胸腺、人脐血联合移植后裸鼠体内T细胞分布及免疫功能的重建。 方法：Balb/c nu/nu裸鼠30 只,随机分为2组：实验组肾被膜下移植胸腺组织,2周后将新鲜分离的脐血CD34+细胞悬液经小鼠静脉输入,对照组不经胸腺移植直接给予CD34+细胞移植,两组小鼠饲养至60 d时检测免疫功能。 结果与结论：人胸腺在裸鼠肾被膜下存活并且表达CD3、HLA-DR分子,胸腺与CD34+细胞联合移植组小鼠脾脏可见点块状分布的CD3+细胞。实验组CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞及CD4+CD25+细胞比例均显著高于对照组。实验组裸鼠对移植人胃癌BGC823细胞有排斥作用,而对照组没有。结果显示胸腺和CD34+细胞联合移植能使裸鼠获得T细胞介导的细胞免疫功能,具有抗肿瘤能力。     

人脐静脉内皮细胞分离鉴定及其膜分子的表达

背景：肿瘤微环境作用于血管内皮细胞,影响其膜表面分子的表达,与肿瘤的生长、转移及免疫逃逸作用相关,但迄今相关机制尚不完全清楚。目的：分析肿瘤微环境下血管内皮细胞的膜表面分子表达量变化。方法：原代分离培养人脐静脉内皮细胞,采用不同肿瘤培养上清,用不同时间进行诱导。记录培养血管内皮细胞形态;利用免疫组织化学方法,鉴别Ⅷ因子相关抗原;荧光实时定量PCR法测定其膜表面分子mRNA表达量。结果与结论：肝癌smmc7721细胞培养上清处理后,内皮细胞抗原提呈会随着时间延长减弱,黏附白细胞能力随着时间延长而变化。胃癌SGC7901细胞培养上清处理后内皮细胞后,抗原提呈能力无明显变化;黏附能力有关分子中,CD31和细胞间黏附分子1表达降低,CD62E表达增高。说明肿瘤微环境可能通过上述黏附分子和抗原提呈分子表达的变化影响血管内皮细胞的相应功能。     

脐血浆神经营养活性蛋白成分对CD34＋细胞增殖分化的影响

背景：迄今为止,人们对于脐血浆中是否存在活性成分及其对于神经发育及神经损伤修复的作用认识尚不足,有待深入研究。目的：检测脐血浆生物活性成分,观察其在神经发育及神经损伤修复中的作用。方法：采用抗体芯片技术对脐血浆和健康青年女性静脉血浆活性成分进行对比分析,采用免疫磁珠从脐血中分选出CD34＋细胞,经体外培养计数观察CD34＋细胞增殖能力,通过免疫组化法观察细胞分化情况。结果与结论：脐血浆中有31种蛋白分子的含量显著高于静脉血浆,其中具有促进神经再生和神经修复潜能的活性蛋白10种,包括FGF4、Frizzled-3、IL-3、RAGE、CRIM-1、Neuritin、Neuropilin-2、Neurturin、SFRP-3、Tomoregulin-1;在CD34＋细胞培养液中加入脐血浆能显著促进细胞增殖,促进细胞向神经细胞分化。