用CD133免疫磁珠分离脐血内皮祖细胞的实验研究

目的：从脐血中分离、培养血管内皮祖细胞,研究内皮祖细胞的生长特性和诱导分化条件。 方法： 应用MACS磁球抗体标记法纯化脐血中的CD133+细胞，通过流式细胞仪、免疫细胞化学、免疫荧光等技术及形态学（光镜、电镜）观察研究内皮祖细胞；将细胞接种于添加（或未添加）VEGF、bFGF、干细胞因子（SCF）的含20％胎牛血清（FBS）的IMDM培养基中,观察内皮祖细胞的生长特性。 结果： 分离新鲜脐血所得CD133阳性细胞占单个核细胞的(1.41±1.14)%,经流式细胞仪鉴定CD133+细胞纯度为75%-85%；将分离细胞接种于纤维连接蛋白包被的24孔板内，培养1-2 h即有细胞贴壁，7-10 d可见贴壁细胞呈铺路石样排列；14 d后细胞出现小圆形、梭形等多样性变化，可见毛细血管管腔样结构，电镜观察可见胞浆内典型的Weibel-Palade小体；在VEGF、bFGF、SCF存在条件下,检测贴壁细胞培养14 d后细胞表面抗原表达情况：与培养开始时相比，祖细胞标志CD133和CD34阳性率呈明显下降趋势，分别由(77.0±3.3)%和(93.1±4.7)%降至(1.6±2.2)%和(37.4±4.9)%，P<0.05，内皮细胞特异性标志Flk-1表达明显增加，由(22.3±3.3)%增至(94.3±4.1)%，P<0.05，同时vWF抗原呈强阳性表达，阳性率为(77.9±3.3)%。 结论： 根据细胞表面特异性分子标志（CD133+/CD34+/Flk-1+）可以从脐血中分离出EPCs，EPCs可在体外一定的诱导因子作用下，培养7-10 d分化为成熟内皮细胞。     

高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸

目的 建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法.方法 通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光（激发波长280 nm,发射波长340 nm）检测氨基酸浓度.用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH值6.00～6.25）和甲醇（46%）混合液（加入四氢呋喃2%）作流动相,流速为1 ml/min.结果 在0.1～40.0 μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数（r）均值为0.999 2,日内和日间变异系数（CV）分别为2.41%～5.23%、3.51%～6.48%,平均回收率为90.13%～98.47%.结论 本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定.     

秩边穴临床应用的体会

秩边穴是足太阳膀胱經的腧穴。在我国最早的針灸典籍《甲乙經》中就已有了較詳細的記載:“腰痛骶寒,俛仰急难,阴痛下重,不得小便,秩边主之。”以后历代医籍也多有記述,如《銅人     

温经活血法治疗小儿风湿热

<正> 风湿热是小儿时期较常见的结缔组织病,属祖国医学的“痹证”范畴,是由风、寒、湿邪侵袭人体,流注经络,致气血不和而成。我院徐仲才教授用温药治疗此病有丰富经验,今将早年在他指导下治疗的一些病例及个人临诊体会,介绍如下。     

癎症治验1例

张姓,女,6岁。住院号:6321。1964年4月24日入院。患儿于1961年秋发高热之后,出现惊厥。此后,于1962年春季复发1次。至同年7月以后,发作次数增多,每周发1次。至某医院治疗,诊断为“癫痫”。服药片(药名不详)后,发作渐止。1963年春,惊厥又发,症情逐渐加重,服西药后效果不明显。近1个半月来,发作更频,隔3天发1次,发时神识昏迷,四肢抽搐,二目窜视,面色发青,口吐白沫,每次约持续3～5分钟,醒后和正常人一样,惟精神比较委软。发作以夜间为多。经我科门诊以“痫症”收入病房。体检:除右眼轻度外斜、面部皮肤上有黄白色虫斑外,无特殊体征发现。检验:血色素10.8克,红血球     

浅谈小儿惊风的证治

惊风是小儿时期常见的紧急证侯,来势凶猛,变化迅速。在许多疾病的过程中,凡见症有频繁抽搐和意识不清的,都统称为惊风。该证在古代儿科中属四大要证(痧、痘、惊、疳)之一,虽排列第三,但在内容上却为四大要证中最复杂者,所以很有必要从理论与实践上加以研讨。古代医家对惊风的认识一、惊风名称的来源:一般都认为首创于北宋钱乙。实际上,早在宋初王怀隐《太平圣惠方》(公元992年)中就有急、慢惊风的记载:“夫小儿急惊风者,由气血不和,夙有实热,为风邪所乘,干于心络之所致     

慢性应激刺激致高血压大鼠下丘脑肾上腺髓质素和降钙素受体样受体基因表达改变

为探讨慢性应激刺激致高血压过程中肾上腺髓质素及其特异性受体组件降钙素受体样受体在下丘脑的动态变化。将48只大鼠分为对照组(18只)和应激组(30只),应激组给予噪声或噪声加足底电击刺激,分别在刺激开始后的第1、5、10和第15天,以及停止刺激后的第5和第10天,处死动物,分离下丘脑,抽提总RNA,用逆转录聚合酶链反应检测肾上腺髓质素和降钙素受体样受体基因表达变化。结果发现,与对照组比较,肾上腺髓质素mRNA表达在应激刺激10天内逐渐上调(第5天0.92±0.04比0.99±0.05,P<0.05;第10天1.26±0.04比0,92±0.04,P<0.01);而后表达下调,在应激刺激第15天仍高于对照组(1.00±0.04比0.92±0.04,P<0.05);应激刺激结束后第5天表达弱高于对照组,但无统计学差异。降钙素受体样受体mRNA表达和肾上腺髓质素mRNA表达趋势大致相同。实验结果说明,下丘脑中肾上腺髓质素及降钙素受体样受体mRNA表达在一定程度上与慢性应激所致血压升高变化过程一致,提示其可能参与应激致高血压过程。     

NR3亚单位的研究进展

NMDA受体属于配体门控阳离子通道。传统NMDA受体主要由NR1亚单位和不同的NR2亚单位组成。NR1是形成NMDA受体的基本亚单位,NR2为调节亚单位。NR1亚单位上有甘氨酸结合位点,NR2亚单位上有谷氨酸结合位点。     

高效液相色谱-荧光检测法快速测定脊髓和脑内氨基酸

目的建立快速测定脊髓和脑内氨基酸浓度的方法。方法通过邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生、反相高效液相色谱结合荧光(激发波长280nm,发射波长340nm)检测氨基酸浓度。用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.00~6.25)和甲醇(46%)混合液(加入四氢呋喃2%)作流动相,流速为1ml/min。结果在0.1~40.0μmol/L范围内,氨基酸浓度与相对峰面积之间的相关系数(r)均值为0.9992,日内和日间变异系数(CV)分别为2.41%~5.23%、3.51%~6.48%,平均回收率为90.13%~98.47%。结论本法灵敏度高、快速、简便易行,可用于脊髓和脑内氨基酸测定。     

P2X2和P2X4受体在新生和成年大鼠延髓的表达

目的研究嘌呤能受体（purinergic receptors,P2）家族中P2X不同亚型在新生和成年SD大鼠延髓的表达。方法成年SD大鼠（6-8w）和新生SD大鼠（1-5d）,各6只,雌雄不计,取延髓。应用免疫组织化学的方法和图像分析技术,比较P2X2和P2X4受体在新生和成年SD大鼠延髓的表达。结果P2X2和P2X4嘌呤受体的阳性神经元和阳性纤维在新生鼠和成年鼠的延髓都有广泛表达,主要分布在孤束核、Ⅻ颅神经核和延髓腹外侧区,延髓其他区域为散在的分布。成年鼠和新生鼠的P2X2受体均比P2X4受体表达水平高。在新生鼠延髓,P2X2和P2X4的表达水平均比成年鼠低。结论P2X2和P2X4阳性神经元和阳性纤维广泛分布在大鼠延髓,为ATP对心血管活动、呼吸活动和痛觉等的调节作用提供了结合位点,也有利于实验中P2X受体亚型阻断剂的选择。随着动物发育成熟,P2X2和P2X4表达水平均增加。