cisAB亚型第6、7外显子及侧翼内含子序列分析

目的 研究汉族ABO血型系统cisAB亚型的分子遗传基础。方法 在标准血清学鉴定和PCR－SSP基因分型的基础上,对汉族cisAB亚型进行第6,7外显子及侧翼内含子DNA扩增,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果 血清学鉴定表明2例标本分别为A2B3和A3B,先证者的PCR－SSP基因分型肯定了其中的B和O1基因。DNA序列分析表明,其第6外显子有261G缺失／不缺失杂合;第7外显子与A1基因相比,有T467C杂合和C803G杂合,796位为正常C,表明其血型为罕见的cisAB亚型。结论 467T,796C和803C三处核苷酸的独特性决定了cisAB亚型的分子遗传基础。     

非亲缘脐血造血干细胞移植治疗儿童非霍奇金淋巴瘤1例报道

目的观察非亲缘异基因脐血造血干细胞移植治疗儿童非霍奇金淋巴瘤的临床效果。方法 1例5岁非霍奇金淋巴瘤（Ⅳ期）患儿接受了高剂量放化疗联合非亲缘异基因脐血造血干细胞移植的治疗。结果静脉输注脐血后无异常反应。白细胞植入时间为移植后17d,血小板植入时间为移植后25d。移植后出现Ⅰ度急性移植物抗宿主病（GVHD）,分别于24d、40d采集患者外周血,经短串联重复序列GeneScan方法分析判定供者造血干细胞在患者体内存活。患儿移植后43d出院,随访至2010年6月,已无病存活67个月,至今状况良好,无复发、无并发症、无慢性GVHD发生。结论大剂量化疗联合非亲缘异基因脐血造血干细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤儿童患者的移植效果较好,并发症较少。     

JK(a-b-)表型分子生物学研究进展

Kidd血型系统(JK,ISBT009)在临床输血中具有重要的意义,其血型抗原为尿素转运蛋白。JK(a-b-)表型为Kidd系统罕见的表型,其红细胞上缺乏相应的抗原,但能够在2mol/l尿素溶液中相当长的时间内不溶解,此表型在研究尿素转运中具有重要的价值。本文就JK(a-b-)表型的分子机理、临床及其诊断等作一综述。     

丙型肝炎病毒抗体阴性献血人群中丙型肝炎病毒核心抗原检测的研究

目的观察丙型肝炎病毒(HCV)抗体阴性献血人群HCV核心抗原的流行情况,初步评估经HCV抗体检测后输血传播HCV的潜在风险. 方法 抗HCV抗体和HCV核心抗原检测采用ELISA试剂盒,丙氨酸氨基转移酶检测采用速率法,HCV RNA检测采用实时荧光PCR检测试剂盒. 结果在抗HCV检测阴性的1 758份无偿献血者标本中,HCV核心抗原检测有3份阳性,阳性率为0.17%;HCV核心抗原阳性的3份样本HCV RNA检测为阴性. 结论结果提示抗HCV检测后,经血液传播HCV的潜在风险已经很低.     

HLA-A新等位基因HLA-A*2468的核苷酸序列分析

人类白细胞抗原(HIA)系统是目前所知最为复杂的人类遗传多态性系统,其复合体定位于6号染色体的短臂上,包括多个基因座位,每一个座位上有多个等位基因,目前发现的HLA等位基因已超过2799个[1].     

血小板冻干再水化的形态结构与凋亡

目的 探讨冷冻干燥法对血小板的细胞形态、超微结构和细胞凋亡的影响.方法 以新鲜血小板为对照,以保存30 d后再水化的冻干血小板为实验对象,分别在倒置相差显微镜和透射电镜下观察血小板的细胞形态和超微结构,用流式细胞仪(FCM)检测血小板凋亡率,并以1×103U/L凝血酶为诱导剂检测再水化血小板的聚集活性.结果 与新鲜血小板相比,冻干再水化后的血小板在形态上为圆盘状,未见有明显的细胞聚集,仅细胞透光性相对较弱;超微结构上也无明显变化,其内部基本结构清晰可辨,细胞膜、细胞器及分泌颗粒的包膜保持完整.新鲜血小板的细胞早期凋亡率为(0.44±0.19)%,显著低于冻干血小板的细胞凋亡率(3.25±1.68)%(P<0.05).冻干再水化血小板的最大聚集率为(93.28±2.3)%.结论 冻干再水化的血小板形态结构完整,细胞内超微结构完好,为本实验室成功建立血小板冻干保存方法提供了依据.     

KIR3 DL1启动子区域 CpG 岛甲基化对抗原表达的影响

目的：探索KIR3DL1启动子区域CpG岛甲基化对抗原表达的影响。方法选择抗原高表达KIR3DL1倡01502和低表达KIR3DL1倡005样本,分别测定启动子区域碱基序列和启动子区CpG岛甲基化程度。对携带有KIR3DL1倡01502、KIR3DL1倡005的NK细胞分别采用5-aza进行去甲基化处理,利用流式细胞仪检测KIR3DL1抗原。结果 KIR3DL1倡01502和KIR3DL1倡005启动子区域－65和－269位存在碱基差异,这导致它们的启动子区域有两个不同的CpG岛。 KIR3DL1倡01502启动子区CpG岛高度甲基化,去甲基化后相应的细胞表面抗原表达显著增加。而携带KIR3DL1倡005的细胞去甲基化处理后,抗原表达没有明显变化。结论 KIR3DL1倡01502启动子区域CpG岛甲基化影响抗原的表达,但是不同抗原表达模式的KIR3DL1等位基因可能存在不同的调控机制。     

ABO血型新等位基因O61的分子生物学研究

本研究探讨ABO新等位基因O61的分子机制。利用单克隆抗体检测标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测标本血清中的ABO抗体。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增ABO基因的第5至7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子。1例B表型标本采用基因组单链抽提技术分离杂合基因型标本的2条单体型,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析。结果表明,在417例标本中发现3个标本743位碱基发生突变,其中2例表型为O型,1例为B型。2例O型直接测序分析显示,6和7外显子有261G缺失及743G/C杂合。1例B型直接测序结果为261G/缺失及297A/G、526C/G、743G/C、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A杂合。采用基因组单链抽提技术将B型标本的两条单体型进行分离,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析,结果显示,2条链分别为B101和突变的O型。将突变的新O型基因提交血型抗原基因突变数据库,被正式命名为O61。结论:ABO基因7号外显子743GC为1个新的突变点,发现1个ABO新等位基因O61。     

一种新的B3变异型相关的B糖基转移酶基因M142T突变研究

目的 研究中国人个体ABO血型系统中具有混合外观凝集特征的B3变异型的分子遗传背景.方法 血型血清学方法鉴定2例ABO血型疑难样本的红细胞表型,应用连续凝集方法和13个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点检测法,排除外源性或内源性DNA嵌合的可能.对ABO基因第6、7外显子和部分内含子进行聚合酶链反应和DNA序列分析,并进一步通过克隆测序法鉴定2个样本的ABO基因单倍型.结果 2个无关个体红细胞与抗-B和抗-AB发生混合外观凝集,连续凝集法和STR检测排除了样本的外源性DNA污染和内源性遗传嵌合子,根据血清学特征确定这2个个体红细胞均为A183血型.单倍型序列分析发现2个样本为A1B杂合子,其中B等位基因与B101相比,差异仅在第7外显子的425T>C错义突变,导致B糖基转移酶多肽链M142T替换.结论 在中国人群中发现一种新的可能导致B3变异型的ABO等位基因.     

基于免疫分选的T淋巴细胞亚群嵌合性定量分析

目的:建立基于免疫分选的T淋巴细胞亚群嵌合性定量分析的方法。方法:以淋巴细胞不同比例混合制备14组人工嵌合体血样,以免疫磁珠阳性选择法获取CD4+和CD8+T细胞亚群,分选后的细胞再进行16位点的短串重复序列(STR)多态性分析。结果:分选后T细胞亚群提取的DNA量能满足STR检测要求,当嵌合体中受体比例≥10%时,16个STR位点均能检出受体和供体特异性等位基因,按照STR峰面积计算的受体比例与理论值相符;当受体比例≤1%时,仅有部分位点能检出受体特异性等位基因,实测嵌合率与理论值存在差异。结论:建立了基于免疫分选的T细胞亚群嵌合性定量分析方法,可用于造血干细胞移植术后嵌合体监测。