实验动物学发展概况与展望

目的 总结军内外实验动物学的发展历程,探讨我军实验动物学发展中存在的问题,提出我军未来实验动物学的发展战略与建议.方法 通过对国内外实验动物学的有关文献进行回顾性调查与描述性分析,结合我军实验动物学的发展实际,提出我军实验动物学未来发展的战略思考与建议.结果 我军实验动物学取得了长足发展,生产设施及动物实验条件得到极大提高,人才体系基本建成,但与国内外实验动物学发展水平比较,仍存在实验动物质量不均一、动物实验操作标准化程度不高、军事特殊医学动物模型研制基础差、战略性实验动物资源储备不足等问题.结论 军队实验动物学发展应走军民结合的道路,建立资源共享机制和人才共培养体系,同时建立军队科研人员实验动物专业培训的长效机制,以特殊军事医学动物模型研究和实验动物战略性资源储备为重点,使实验动物学真正成为军事医学的基础性、应用保障性学科.     

人工饲养恒河猴、食蟹猴的繁殖性能初报

目的 探索北京地区人工饲养恒河猴与食蟹猴的繁殖性能,为温带地区猕猴的人工饲养和繁殖方式提供借鉴.方法 对军事医学科学院实验动物中心饲养的317只恒河猴繁殖群(30只雄猴,287只雌猴)和78只食蟹猴繁殖群(8只雄猴,70只雌猴)近两年的繁殖性状进行观察和统计分析.结果 恒河猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为60.73%、54.45%和96.89%.食蟹猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为79.86%、56.12%和75.00%.结论 食蟹猴和恒河猴可以成功的在温带地区饲养和繁殖,但人工饲养食蟹猴的妊娠率与产仔率较恒河猴高,而仔猴成活率则低于恒河猴.     

比格犬一种新雌激素β受体可变剪切体的克隆及鉴定

目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序表明其中一种为新的可变剪切体,目前此可变剪切体尚未见报道。结论得到了雌激素β受体的一种新的可变剪切体,有助于研究雌激素β受体可变剪切体的功能及其在生殖调控过程中的作用。     

关节镜下清理术联合玻璃酸钠及三氧治疗膝骨性关节炎的临床观察

目的观察关节镜清理术联合玻璃酸钠和三氧治疗膝骨性关节炎的疗效。方法膝骨性关节炎患者46例随机分为对照组25例和治疗组21例,对照组行关节镜清理术治疗,治疗组为关节镜清理术加玻璃酸钠和三氧注射治疗。结果两组治疗后1周和3个月,按照膝关节视觉模拟疼痛评分法（VAS）和膝关节功能评分法（WOMAC）评估疗效,治疗组优于对照组（P〈0．05）。结论关节镜清理术联合玻璃酸钠和三氧治疗膝骨性关节炎疗效好于单纯行关节清理术。     

Mamu-B＊ 007：03及其剪切异构体Mamu-B＊ 007：03-sv1基因的表达与细胞内定位

目的 Mamu-B＊007：03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B＊007：03基因的表达情况进行比较。方法分别构建Mamu-B＊007：03-sv1-myc-pEGFPN3和Mamu-B＊007：03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。利用Western-blot免疫印迹实验检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。结果 Mamu-B＊007：03-sv1和Mamu-B＊007：03基因均能在293T细胞内正常表达。Mamu-B＊007：03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B＊007：03基因在细胞膜上表达,Mamu-B＊007：03-sv1基因在细胞内表达。结论 Mamu-B＊007：03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B＊007：03基因有明显差异,其功能有待于进一步探索。     

产肠毒素大肠杆菌快速检测方法的建立和评价

目的 利用环介导等温扩增（LAMP）技术,建立产肠毒素大肠杆菌（ETEC）的快速、便捷、敏感、特异的检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行评价,为实验动物检测和细菌性腹泻的诊断提供技术支持。方法 根据GenBank公布的产肠毒素大肠杆菌的LT毒素基因序列（S60731.1）设计外引物和内引物进行LAMP扩增,对LAMP特异性和敏感性与PCR方法做比较。结果 建立的LAMP方法检测限为100pg,灵敏度是PCR的10倍以上并具有较高的特异性,利用该方法对27份猴腹泻样品进行LAMP和PCR方法检测, LAMP（60min内）检测结果与PCR符合率为100%,而LAMP（90分钟内）检测敏感性高于PCR。结论 建立了一种用于检测肠毒性大肠杆菌（ETEC）的LAMP检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,方便快捷,适合于ETEC临床快速检测。     

封闭群比格犬遗传标志微卫星引物的筛选

目的筛选出有效的微卫星引物,利用微卫星遗传标志对封闭群内比格犬的个体遗传情况进行分析。方法从文献中筛选杂合度在0．4～0．8的微卫星引物24对,对本场英系比格犬封闭群中随机筛选出的12只比格犬的混合基因组进行了扩增。结果24对引物中,有7对微卫星引物的扩增结果具有较好的多态性和重复性。利用这7对引物,对8只玛斯公司美系比格犬的混合基因组进行了扩增,结果与本场英系比格犬的扩增结果具有明显的差异。又利用这7对引物对随机筛选出的6只比格犬的个体遗传情况进行了分析,其中3只比格犬表现出明显的差异。结论作者筛选的7对微卫星引物可以对本场比格犬种群的个体遗传情况进行初步分析。     

黑线仓鼠及其白化突变系血液生理生化值的测定与分析

目的 测定黑线仓鼠及其白化突变系的血液生理生化参数,比较两者的差异,为医学实验研究提供参考.方法 用眼球取血的方法采集动物全血,分别制备抗凝血和血清,应用全自动生化分析仪和全自动血细胞分析仪进行测定.用SPSS10.0软件包对测定结果进行分析.结果 测定了黑线仓鼠及其白化突变系的血液生理生化正常值范围,并与其它动物的数据进行了比较.结论 确定了黑线仓鼠与其白化突变系的血液生理生化正常值范围,两者在多项指标上存在差异.而且,黑线仓鼠及其白化突变系的血小板计数均高于小鼠,约高出3倍,这一差异可能有利于两者作为血液凝集实验模型的研究.     

我国实验动物福利发展战略与十二五生命科技发展需求及对策的探讨

实验动物福利越来越受到社会各方面的重视.欧美等发达国家已经建立起了一套比较完善的实验动物福利法规体系,而我国还没有专门的实验动物福利立法,与国外发达国家相比存在较大差距,但是不断出现的与实验动物福利有关的经贸技术壁垒以及十二五发展的需要使得实验动物福利成为我国目前亟待解决的战略问题.     

利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究

目的利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础。方法利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。结果成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白。结论利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。