体外培养大鼠骨髓基质细胞生物学特性研究

目的:观察体外培养大鼠骨髓基质细胞生物学特性,为诱导骨髓基质细胞分化形成神经元及分化机制和移植治疗脑缺血大鼠的研究奠定基础.方法:取4周龄Wistar大鼠,全骨髓法体外培养骨髓基质细胞,利用倒置相差显微镜观察原代及不同传代细胞生长形态特点,并应用间接免疫荧光法鉴定原代及不同传代细胞表型.结果:培养的骨髓基质细胞第3代,细胞增殖能力已趋于稳定,骨髓基质细胞表面标志CD54、CD44阳性的细胞已占到95.18%、94.36%.造血干细胞表面标志CD14阳性的细胞已从原代的23.19%降低到2.37%.结论:传3代的细胞已适合于细胞诱导分化,可作为理想细胞移植治疗的细胞来源.     

刺五加注射液体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的机制研究

目的：研究核因子-κB(NF-κB)在刺五加诱导骨髓基质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的作用。方法：试验分对照组和刺五加诱导组。采用倒置显微镜观察细胞形态；免疫荧光检测MSCs表型、诱导后神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基p65核移位情况；Western blot法检测诱导组、对照组IκBα的表达。结果：刺五加诱导1 h，可见部分细胞体积缩小，立体感增强，胞体收缩成锥形或球形；诱导5 h，较多细胞成三角形或球形，细胞微丝收缩，伪足形成细长突起，局部交织成网，部分细胞脱落、死亡。诱导7 d，多数细胞成锥形、三角形、球形，交织成网，形成较典型的神经元样细胞。对照组5 h时细胞无明显形态变化，7 d时偶见锥形细胞。免疫荧光检测到诱导组诱导1 h时nestin表达即为强阳性，到第7天仍为阳性，而β-Ⅲ Tubulin在第1小时为弱阳性，3，5 h则为强阳性，并持续到7 d仍为阳性。神经细胞特异性烯醇化酶（NSE）在第3小时为弱阳性，第5，7天则为强阳性，未见胶质细胞标记蛋白GAFP的表达；对照组各标记蛋白表达均为阴性或可疑或弱阳性。对照组出现p65由胞浆向胞核移位，而诱导组p65信号主要仍在胞浆中表达。Western blot发现诱导前IκBα蛋白相对IA为1.0，诱导后刺五加组IκBα蛋白相对IA为0.455 6±0.100 8，较诱导前明显下降(P<0.01)。诱导后对照组IκBα蛋白相对IA为0.029 6±0.009 9，较诱导前及诱导组明显下降(P<0.01)。结论：刺五加可诱导MSCs分化为神经元样细胞。在此过程中，刺五加可以抑制NF-κB的活化。     

米诺环素对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区IκB-α、NF-κB p65表达的影响

目的观察米诺环素对脑缺血再灌注大鼠脑组织IκB-α、NF-κB表达的影响,探索米诺环素脑保护作用机制。方法 72只S-D大鼠,随机分为假手术组(NS组)、脑缺血再灌注模型组(IR组)、米诺环素治疗组(MT组),线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织IκB-α、NF-κB p65的表达。结果相应时间点MT组较IR组IκB-α阳性细胞区灰度值明显增高,NF-κB p65胞核内阳性数明显降低,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论米诺环素可以增加大鼠脑缺血再灌注后脑组织IκB-α表达,减少NF-κB的阳性表达,达到脑保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子联合诱导骨髓基质细胞分化形成神经球

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)联合诱导骨髓基质细胞(MSCs)能否分化形成神经球。方法采用全骨髓法培养MSCs,bFGF和EGF联合诱导MSCs,倒置显微镜下观察分化细胞的形态,免疫荧光法和免疫印迹法鉴定分化细胞。结果 bFGF和EGF联合应用,可有效地诱导MSCs形成神经球。此神经球能传代并分化成神经元样细胞。免疫荧光和免疫印迹法均证实神经球表达nestin蛋白,神经球分化的细胞表达神经元、胶质细胞和少突胶质细胞标志性蛋白。结论 bFGF和EGF联合应用,可有效地诱导MSCs形成神经球。此神经球能自我更新并分化为神经元、胶质细胞和少突胶质细胞。     

吸烟对多发性硬化病人病情进展影响

目的探讨吸烟对多发性硬化(MS)病人病情进展的影响。方法从2005-01～2010-12,随访三所医院364例临床诊断为MS的病人,分为吸烟组、戒烟组和非吸烟组,根据临床和磁共振成像(MRI)特点,比较各组转化为继发进展型MS的比例、脑实质分数(BPF)和T2高密度病灶体积变化。结果吸烟组与非吸烟组相比,扩展残疾状态量表评分(EDSS)和多发性硬化严重程度评分(MSSS)增加,从复发缓解型MS(RRMS)向继发进展型MS(SPMS)的转化较快,T2加权病灶体积增加,BPF减少。结论研究提示吸烟对MS进展有不利影响,吸烟可加速RRMS向SPMS的转化。