PCR—SSCP技术快速检测结核分枝杆菌三种基因突变

聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是快速检测基因突变的重要方式之一[1].应用此法对辽宁省90例涂阳患者痰标本分离结核分枝杆菌进行rpoB、rpsL、56例katG基因突变检测,与传统耐药结果比较分析,寻找结核分枝杆菌耐药性与基因突变的关系.     

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变

目的应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变，建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照，对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、ITS和embB的寡核苷酸探针，通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物。结果18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中，59株为耐RFP株，rpoB基因突变率为93．2％，最常见的突变位点为531位和526位密码子，33株为耐SM株，rpsL基因突变率为75．8％，均为43位密码子AAD AGG突变，ITS基因突变率为9．1％，均为513位A→C突变，rpsL和ITS基因总突变率为84．8％；43株为耐EMB株，embB基因突变率为58．1％，均为306位密码子突变。结论应用PCR一寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变，检测其耐药性。     

小鼠肺、肝、脾组织病理学变化对结核DNA疫苗保护效力的评价作用

目的 评价结核分支杆菌MPT64、ESAT6 DNA疫苗的保护效力和细胞因子的增强作用。方法 将BALB/C小鼠随机分为14组,分别用KSAT6(25μg) MPT64(25μg)(A组),KSAT6(100μg) IFN-γ／(100／μg)(B组),KSAT6(75μg) MPT64(25μg)(C组),KS—AT6(100μg) IL-12(100μg)(D组),MPT64(100μg) IL-12(100μg)(E组),ESAT6(25μg) MPT64(75μg)(F组),MPT64(100μg)(G组),PvaXl载体质粒(100μg)(H组),ESAT6(100μg)(I组),ESAT6(100μg) MPT64(100μg)(J组),ESAT6(50μg) MPT64(50μg)(K组),MPT64(100μg) IFN-γ(100μg)(L组),卡介苗(M组),生理盐水(N组)免疫小鼠。每组各6只小鼠免疫8周后以结核分支杆菌H37Rv小鼠尾静脉攻击小鼠。攻击4周后,观察肺、肝、脾组织的病理改变。结果 结核分支杆菌攻击后,肺组织病理改变为：以渗出性反应为主的病变有N组,表现为肺泡壁毛细血管充血,肺泡腔内充满渗出液;以增殖性反应为主的病变为M、J组,表现为较多淋巴细胞、泡沫样细胞、上皮样细胞、郎罕细胞组成的结核肉芽肿,并可见肺泡壁组织增生增厚;其余均为增殖性与渗出性反应的混合性病变(A、B、C、D、E、G、H、I、K、L组)。各组均未出现干酪性坏死。肝脏病变主要表现为充血,汇管区淋巴细胞聚集,与上皮样细胞组成结节,各组间差别不大,M、J组病变较其他组略轻。脾脏改变：脾小体增生,融合,各组间差别不大,M、J组反应较其他组稍强。结论 结核分支杆菌MPT64和ESAT6DNA疫苗能增加机体抵抗力,与IL-12、IFN-7分别合用及两种疫苗不同剂量合用有不同程度的保护效果,以MPT64 100μg ESAT6100μg合用效果最接近于卡介苗,IFN7及IL-12对结核DNA疫苗的保护效果具有一定程度的增强作用。     

科研过程质量评估体系探讨

评估是科研管理工作的一项重要内容。目前,医学院校对课题的立项和结题后的成果评估相对较为成熟,而对科研课题的实施过程缺乏系统量化、可操作性强的质量评估体系,科研过程质量评估工作仍处于自由状态眼1演。因此,建立科学的、可操作性强的科研过程质量评估体系,对实现科研过程的管理、控制、考核、督导等动态和目标管理都是非常有意义的。1评估指标体系的原则1.1科学性评估指标体系的科学性主要反映在适度性和合理性两个方面。适度性就是要对评估因素进行筛选,去粗取精,避免过多过乱,或者过于简单。合理性就是要把握明确导向和排除主观差…     

不同剂量结核病DNA疫苗及细胞因子联合免疫的研究

目的：评价结核分枝杆菌MPT64（简称M64）和ESAT6（简称E6）DNA疫苗不同剂量联合免疫、与细胞因子联合免疫的保护效力，以及Ag85A（简称85A）和Ag5B（简称85B）DNA疫苗的保护效力。方法：将C57BL／6小鼠随机分为14组免疫：①生理盐水；②载体pVAX1 100μg；③卡介苗；④M64100μg＋E6100μg；⑤M6450μg＋E650μg；⑥M6475μg＋E625μg；⑦M6425μg＋E675μg；⑧M6425μg＋E625μg；⑨M64100μg＋IFN-γ 100μg；⑩E6100μg＋IFN-γ100μg；（11）M64100μg＋IL-12 100μg；（12）E6100μg＋IL-12 100μg；（13）85A100μg；逼（14）5B100μg。用ELISA法检测血清抗体，结核分枝杆菌通过尾静脉攻击小鼠，动态观察小鼠体重变化；攻击4周后，取肺、肝和脾观察病理改变、称重量、做菌落计数。结果：不同剂量的M64和E6DNA联合免疫、85A和85BDNA分别免疫均能诱导小鼠产生特异性抗体，但M64或E6与IFN-γ或IL-12质粒DNA共同免疫后特异性抗体水平与对照组无显著性差异；各组血清抗体亚型IgG2a均无显著升高，IgG2b均显著高于IgGI。第2、3A、8、9、11、12组在感染后4周体重明显增加，而第1、14、5、6组体重下降；第3、11、9、7组的肺菌落指数较少。第10、13组肺肉眼未见明显病变；第2～4、7、9～13组肺组织主要为不同程度的增殖性反应，第1、6、8、14组肺组织为增殖性反应与渗出性反应并存，第5组为渗出性反应。结论：DNA免疫的量需100μg才能诱导产生强的保护效力；M64和E6DNA各100μg混合免疫、85ADNA疫苗的保护效力与卡介苗相当；b164和E6DNA与IFN-γ或IL-12质粒DNA共同免疫后，明显增强其保护效力。