ApoG2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬的最低浓度探讨

目的:探究不同浓度棉酚衍生物ApoG2对乳腺癌细胞株MDA-MB231诱导自噬的最低浓度,寻找抗肿瘤效应的最适合浓度。方法:CCK8法检测细胞的增殖活性;透射电镜下观察细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期阻滞情况;细胞免疫荧光法检测各组细胞LC3-II荧光强度;RT-PCR及Western blot法检测细胞自噬蛋白LC3-I及LC3-II表达强度。结果:CCK8法示ApoG2对乳腺癌MDA-MB231细胞呈浓度、时间依赖性抑制增殖且各组间差异存在统计学意义;透射电镜下发现ApoG2可诱导凋亡及自噬;流式细胞仪检测发现ApoG2诱导凋亡呈浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期且10μmol/L浓度组最明显;细胞免疫荧光法发现10μmol/L组细胞LC3-II荧光最弱;RT-PCR及Western blot法示细胞自噬蛋白LC3-I表达各组间无明显差异,LC3-II在10μmol/L浓度组表达量最弱,80μmol/L浓度组表达量最强。结论:10μmol/L为ApoG2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬最低浓度,也是抑制自噬,促进凋亡的抗肿瘤最适浓度。     

内皮抑素联合阿霉素治疗鼠H22肝癌移植瘤研究

目的:研究内皮抑素联合阿霉素对鼠H22肝癌移植瘤血管生成及肿瘤生长的抑制作用.方法:将H22肝癌细胞接种到40只小鼠的背部皮下,肿瘤直径约1cm时随机分成4组;对照组,隔日尾静脉、腹腔注射生理盐水;联合用药组,隔日尾静脉推注内皮抑素+腹腔注射阿霉素;内皮抑素组,隔日尾静脉推注内皮抑素;阿霉素组,隔日腹腔注射阿霉素.比较各组的抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线,检测血浆VEGF浓度、肿瘤组织MVD表达,观察小鼠生存期.结果:联合用药组小鼠肿瘤体积明显小于其他各组(P<0.05),血浆VEGF水平及瘤组织中MVD表达较其他各组明显减低(P<0.05),生存时间较其他各组延长(P<0.05);但内皮抑素组VEGF水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:内皮抑素联合阿霉素抗肿瘤作用优于内皮抑素或阿霉素单药治疗,并可使小鼠生存期延长.     

ApoG2诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的观察

目的:研究新型棉酚衍生物ApoG2在体外应用对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的影响。方法:CCK-8检测增殖抑制率;Hoechst 33258染色、吖啶橙(AO)染色、透射电镜观察细胞凋亡与自噬形态学变化;FCM检测凋亡率与自噬荧光强度;蛋白质印迹法检测Bcl-2和Beclin1蛋白表达情况。结果:CCK-8法结果显示,不同浓度的ApoG2作用于CNE-2细胞24、48和72h后,均可见对细胞具有生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性。72h的IC50值为23.61μmol/L。Hoechst33258染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的核固缩和碎裂等凋亡现象;AO染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的亮红色酸性自噬泡。透射电镜可观察到细胞体内大空泡及膜性双层结构增多。FCM检测显示,对照组和ApoG2组凋亡率分别(3.83±0.23)%和(20.06±2.10)%,差异有统计学意义,F=176.823,P=0.000。FCM检测显示,对照组和ApoG2组自噬荧光强度分别为(1.05±0.54)%和(26.91±7.65)%,差异有统计学意义,F=34.019,P=0.004。蛋白质印迹法显示,Bcl-2蛋白表达下调差异有统计学意义,F=68.909,P=0.001;Beclin1蛋白表达上调差异亦有统计学意义,F=497.906,P=0.000。结论:ApoG2在体外可以抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖并诱导细胞凋亡与自噬。     

盐酸洛拉曲克壳聚糖纳米粒的制备及其特性研究

目的:以壳聚糖为载体材料,盐酸洛拉曲克为模型药物,优化实验条件,制备较为理想的壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性及体外抑瘤效应.方法:采用离子交联法制备负载洛拉曲克的壳聚糖纳米粒(NLTX-CS NPs),扫描电镜观察其形态学特征,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径大小及分布,在磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)中对NLTX-CS NPs进行体外缓释研究,通过MTT法测定NLTX-CS NPs对鼻咽癌细胞株的增殖抑制率.结果:壳聚糖/盐酸洛拉曲克的质量比为6∶1的载药纳米粒为类圆形,粒径分布较为均匀,平均粒径为232 nm,载药率为(19.17 ± 0.35)%,包封率为(63.56 ± 0.25)%,体外对CNE-1细胞株的增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性.结论:NLTX-CS NPs制备工艺简单,在体外显示了其较好的缓释性能,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期较短的缺点.