动员人外周造血祖细胞定向诱导树突状细胞

目的 探讨由动员人外周造血祖细胞体外培养扩增获得的树突状细胞（DC）的生物学特性, 为临床应用肿瘤树突状细胞疫苗建立制备方法。方法 用CS-3000血细胞分离机分离预经干细胞动员的患者外周血单个核细胞（PBMC）,去除淋巴细胞和单核细胞,阴性选择得到外周造血祖细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4培养10~14 d成为树突状细胞,然后进行形态学检测、细胞表型和T细胞刺激能力分析。结果 由外周造血祖细胞来源的树突状细胞可以达到(0.5~1.0)×108数量级;高倍镜和电镜照片显示典型的树突状细胞形态和超微结构;流式细胞仪分析显示细胞高表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原和共刺激分子CD80、CD86;同种混合淋巴细胞反应显示细胞具有高效的刺激静止T淋巴细胞活化增殖的能力。结论 用血细胞分离机分离动员外周造血祖细胞体外定向诱导制备树突状细胞可以作为制备肿瘤疫苗的新途径。     

氩氦刀靶向治疗人肝癌SMMC7721细胞及H22肝癌荷瘤小鼠实验观察

[目的]探讨体内外氩氦刀靶向治疗对肝癌细胞灭活作用的影响因素及联合高渗盐水提高冷冻疗效的可行性。[方法]通过氩氦刀对体外培养的人肝癌SMMC7721细胞予不同速度（快冻或慢冻）、低温（-40℃以下或以上）和冻融周期（1个或2个周期）冷冻处理。H22肝癌荷瘤小鼠随机分为5组：Ⅰ组为根治冷冻组，Ⅱ组为姑息冷冻组，Ⅲ组为高渗盐水注射组．Ⅳ组为姑息冷冻联合高渗盐水治疗组，Ⅴ组为无治疗组。[结果]冷冻温度低于-40℃时，细胞死亡率可达100％。冷冻温度为-40℃～20℃时，细胞死亡不完全。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均能显著抑制肿瘤生长，抑瘤率分别为99．7％、83．6％、78．9％、99.3％；以上各组与Ⅴ组比较，差异均有显著性。Ⅰ组与Ⅳ组比较差异无显著性。[结论]快速冷冻、重复冻融、-40℃以下低温可完全杀灭人肝癌细胞。冷冻与高渗盐水联合治疗是一种有效的肝癌综合治疗模式。     

紫杉醇壳聚糖纳米微球的制备及体外释放性能

目的:优化试验条件,制备合适的壳聚糖纳米微球(CM),并负载紫杉醇(PTX),研究负载紫杉醇壳聚糖微球(PTX-CM)的体外释药性能。方法:采用离子凝聚法和透析法制备CM及PTX-CM,激光粒度分析仪测定微球粒径大小和分布,透射电镜观测微球形态学特征,并在磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)中对PTX-CM进行体外释药研究。结果:制备CM的最佳条件是壳聚糖(CTS)与多聚磷酸钠(TPP)投量比在3∶1~6∶1间。制备的PTX-CM形态规则均质,无粘连,平均粒径179.3 nm,包封率80.0%,载药量20.6%,在8 d内累积释药率接近80.0%。结论:PTX-CM性能良好,制备工艺简单,有望成为理想的紫杉醇缓释系统。     

左旋棉酚对人鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的探讨左旋棉酚对人鼻咽癌细胞株CNE2凋亡的影响及其机制。方法采用MTT实验检测左旋棉酚对CNE2细胞的增殖抑制作用,流式细胞术分析左旋棉酚诱导细胞凋亡及其对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,caspase-3分光光度法检测试剂盒测定caspase-3活性。结果≥10μmol／L左旋棉酚可显著抑制CNE2细胞增殖,并表现出剂量、时间依赖效应。左旋棉酚可调节CNE2细胞的细胞周期,使其主要被阻滞于G0／G1期,在诱导细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Bcl-2表达下降,而Bax表达则相对上调,caspase-3活性在24h达到高峰。结论左旋棉酚在体外可诱导鼻咽癌细胞CNE2凋亡,其机制可能与Bcl-2基因下调、Bax基因上调、caspase-3的激活有关。     

叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星偶联物对人胃癌SGC-7901细胞的靶向作用

目的制备一种能通过叶酸受体途径靶向治疗肿瘤的叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星偶联物。方法将葡聚糖、盐酸吡柔比星和叶酸按序化学合成,并进一步定量,采用体外细胞毒性实验(四甲基偶氮唑蓝法),观察游离盐酸吡柔比星、叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星、叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星+游离叶酸对于不同浓度人胃癌细胞株SGC-7901细胞的毒性作用。结果制备的叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星中,盐酸吡柔比星与叶酸物质的量比为3∶1,载药量3.1%,4 h组叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星半抑制浓度(Ic50)值与游离盐酸吡柔比星相比较低,显示出对SGC-7901细胞有一定的选择性;48 h组两种药物对SGC-7901细胞的Ic50值与4 h组相比均明显降低,叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星+叶酸的Ic50值与叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星相比较高。结论制备的叶酸-葡聚糖-盐酸吡柔比星对胃低分化腺癌SGC-7901细胞显示出一定的靶向作用,游离叶酸可竞争抑制其与细胞表面叶酸受体特异结合。     

表柔比星壳聚糖微球联合微波消融治疗小鼠肝移植瘤

背景:原发性肝癌的手术切除率较低,肝癌的局部治疗成为重要手段.经皮微波消融治疗能达到原位灭活的目的,但不能彻底杀灭瘤细胞.缓释剂型化疗药物可形成局部较高药物浓度及发挥较持久作用,目前已多被应用于原发性肝癌的治疗.目的:观察负载表柔比星的壳聚糖微球联合微波消融局部治疗荷肝癌小鼠皮下移植瘤的效果.方法:采用W/O型乳化-固化法制各表柔比星-壳聚糖微球,扫描电镜观察壳聚糖微球的表面形态,粒径大小.紫外分光光度计分析载药微球的包封率、载药量及药物累积释放率.将24只H22皮下肝癌荷瘤小鼠分成4组,各组皮下肝癌肿瘤分给予以下治疗:单纯微波治疗;微波治疗后第2天给予瘤内注射生理盐水;微波治疗后给予瘤内注射表柔比星;微波治疗后联合瘤内注射载药微球,监测荷瘤小鼠肿瘤体积变化并计算抑瘤率.结果与结论:壳聚糖微球平均粒径约为105 μm,粒径大小较一致,包封率约为80%,载药率约为11%,2周的累积缓释率为84%.微波联合瘤内注射生理盐水、表柔比星、载药微球的抑瘤率分别为8%,20%,47%.表明壳聚糖微球是一种有效的表柔比星局部缓释剂型,联合微波消融治疗有较强的抑瘤作用.     

基因法体外净化自体造血干细胞移植物

高剂量的放、化疗联合自体造血干细胞移植治疗恶性肿瘤失败的主要原因是疾病的复发,目前认为,肿瘤细胞随着移植物再次输入人体是导致复发的重要因素。本文概述了用基因方法(genetic method)在体外净化自体造血干细胞移植物的一些新进展。     

ApoG2诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的观察

目的:研究新型棉酚衍生物ApoG2在体外应用对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的影响。方法:CCK-8检测增殖抑制率;Hoechst 33258染色、吖啶橙(AO)染色、透射电镜观察细胞凋亡与自噬形态学变化;FCM检测凋亡率与自噬荧光强度;蛋白质印迹法检测Bcl-2和Beclin1蛋白表达情况。结果:CCK-8法结果显示,不同浓度的ApoG2作用于CNE-2细胞24、48和72h后,均可见对细胞具有生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性。72h的IC50值为23.61μmol/L。Hoechst33258染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的核固缩和碎裂等凋亡现象;AO染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的亮红色酸性自噬泡。透射电镜可观察到细胞体内大空泡及膜性双层结构增多。FCM检测显示,对照组和ApoG2组凋亡率分别(3.83±0.23)%和(20.06±2.10)%,差异有统计学意义,F=176.823,P=0.000。FCM检测显示,对照组和ApoG2组自噬荧光强度分别为(1.05±0.54)%和(26.91±7.65)%,差异有统计学意义,F=34.019,P=0.004。蛋白质印迹法显示,Bcl-2蛋白表达下调差异有统计学意义,F=68.909,P=0.001;Beclin1蛋白表达上调差异亦有统计学意义,F=497.906,P=0.000。结论:ApoG2在体外可以抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖并诱导细胞凋亡与自噬。     

射频消融术联合肝动脉化疗栓塞及西妥昔单抗治疗结直肠癌肝转移的疗效评价

目的 探究射频消融术(RFA)联合肝动脉栓塞化疗术(TACE)及西妥昔单抗(cetuximab)治疗结直肠癌肝转移的临床疗效.方法 回顾性分析2010年1月-2014年1月49例结直肠癌肝转移患者,分为治疗组(RFA+TACE+cetuximab)23例和对照组(TACE+cetuximab)26例,观察两组患者治疗后实体瘤疗效、1年总生存率(OS)、1年无进展生存率(PFS)及不良反应的情况.结果 治疗组的完全缓解率达到73.9％(17/23),明显优于对照组的26.9％(7/26),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组及对照组的OS差异无统计学意义(P＞0.05);但治疗组的1年PFS为52.2％,优于对照组的23.1％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对于无法手术的结直肠癌肝转移患者,RFA联合TACE及西妥昔单抗治疗的近期疗效及1年PFS优于单纯TACE联合西妥昔单抗治疗,具有肿瘤完全坏死率高、肝内复发率低的优点.     

盐酸洛拉曲克壳聚糖纳米粒的制备及其特性研究

目的:以壳聚糖为载体材料,盐酸洛拉曲克为模型药物,优化实验条件,制备较为理想的壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性及体外抑瘤效应.方法:采用离子交联法制备负载洛拉曲克的壳聚糖纳米粒(NLTX-CS NPs),扫描电镜观察其形态学特征,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径大小及分布,在磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)中对NLTX-CS NPs进行体外缓释研究,通过MTT法测定NLTX-CS NPs对鼻咽癌细胞株的增殖抑制率.结果:壳聚糖/盐酸洛拉曲克的质量比为6∶1的载药纳米粒为类圆形,粒径分布较为均匀,平均粒径为232 nm,载药率为(19.17 ± 0.35)%,包封率为(63.56 ± 0.25)%,体外对CNE-1细胞株的增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性.结论:NLTX-CS NPs制备工艺简单,在体外显示了其较好的缓释性能,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期较短的缺点.