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11.
肝癌及癌旁肝组织的高尔基体差异蛋白质分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 筛选并鉴定肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组中差异表达的蛋白质,从高尔基体层面解释肝癌的发生和发展机制,为早期诊断和抗癌药物的研发提供线索.方法 应用亚细胞比较蛋白质组学研究方法,比较分析肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组.收集肝癌患者手术切除的癌组织和癌旁肝组织标本,蔗糖密度梯度离心法分离高尔基体.建立并优化两种组织高尔基体的双向电泳方法,用PD-Quest软件分析差异表达的蛋白质点,然后用质谱仪获取相应蛋白点的肽质指纹图谱,联网到Swiss-Prot蛋白质组数据库鉴定获得的差异蛋白质点,最后用Western blot验证双向电泳结果.蛋白质相对表达量的比较采用配对t检验.结果 获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱.与癌旁肝组织相比,肝癌高尔基体蛋白质组有包括膜联蛋白5在内的27个蛋白质位点表达上调,包括染色体修饰蛋白2b在内的20个蛋白质位点表达下调,初步鉴定出了其中17个蛋白质,并用Western blot从蛋白质水平上验证了双向凝胶电泳结果.结论 肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组具有不同的蛋白质位点,这些差异表达的蛋白质涉及到细胞的能量代谢、肿瘤的侵袭和转移,细胞周期调控等方面,为进一步阐释高尔基体在肿瘤的发生和发展中所起的作用提供了有价值的信息.  相似文献   
12.
目的:探讨应用反义脱氧寡核苷酸(ASODN)体外抑制粘蛋白MUC2对人胃癌细胞株SGC7901侵袭活性的影响。方法:采用人工合成MUC2ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入胃癌细胞株SGC7901中,应用免疫组化及Boyden小室体外侵袭实验比较转染前后癌细胞侵袭能力的改变。结果:转染MUC2ASODN后,癌细胞穿膜细胞相对百分率较处理前明显下降;免疫组化S-P法染色提示转染MUC2ASODN后,SGC7901细胞的组织蛋白酶D及基质金属蛋白酶2表达水平明显降低。结论:使用人工合成MUC2ASODN能有效抑制胃癌细胞侵袭能力。  相似文献   
13.
卢玉娟  罗祎  杨雅莹  易永芬 《肿瘤》2012,32(11):899-906
目的:检测高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)、E-cadherin和α-catenin在不同卵巢上皮肿瘤组织和不同转移能力的卵巢癌细胞中的表达。方法:运用免疫组织化学法检测46例卵巢上皮恶性肿瘤(其中有大网膜或淋巴结转移者27例)、15例卵巢上皮交界性肿瘤及12例卵巢上皮良性肿瘤组织中GMⅡ、E-cadherin和α-catenin的表达情况。体外培养卵巢癌A2780、SKOV-3和HO-8910细胞,分别应用RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测GMⅡ、E-cadherin和α-catenin mRNA和蛋白的表达情况。结果:在卵巢上皮恶性肿瘤中GMⅡ的阳性表达率(87%)和E-cadherin、α-catenin的异常表达率(80%和72%)明显高于卵巢上皮交界性肿瘤(60%、20%和40%)和卵巢上皮良性肿瘤(42%、0%和17%),且有转移患者肿瘤组织中的阳性表达率和异常表达率明显高于无转移者(P<0.05)。A2780、SKOV-3和HO-8910细胞中GMⅡ荧光表达强度逐渐增强,E-cadherin和α-catenin荧光表达强度逐渐减弱。在A2780、SKOV-3、HO-8910中,GMⅡmRNA和蛋白表达水平逐渐增加,而E-cadherin和α-catenin mRNA及蛋白表达水平则逐渐减弱,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GMⅡ、E-cadherin和α-catenin可能在卵巢癌的恶性进展中发挥重要作用,GMⅡ有望成为卵巢癌预后的标志和治疗靶点。  相似文献   
14.
目的:探讨多药耐药蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶Pi(GST—π)和肺耐药蛋白(LRP)在胃癌中的表达及意义。方法:应用免疫组化S—P法,检测MRP、GST—π和LRP在90例胃癌及30例正常胃黏膜中的表达。结果:MRP、GST—π及LRP在胃癌中的阳性表达率分别为92.2%、99.0%和93.3%,均显著高于其在正常胃黏膜中的表达(P<0.05),且MRP、GST—π和LRP在高、中分化腺癌中的表达显著高于在低分化腺癌和黏液癌中的表达(P<0.05)。但它们的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移无关。结论:MRP、GST—π和LRP在胃癌中高表达,在胃癌的原发性耐药中起重要作用。这可能是胃癌化疗效果差、死亡率高的重要原因之一。  相似文献   
15.
采用酶组织化学法及电镜技术,探讨β-半乳糖苷酶和芳香硫酸脂酶在50例不同病理类型大肠癌中的表达与预后的关系。结果显示印戒细胞癌和粘液腺癌两种水解酶的阳性率较管状腺癌和乳头状腺癌高(P<0.01),而前两者的5年生存率则较后两者低(P<0.01)。印戒细胞癌和粘液腺癌的超微结构特点是粗面内质网较多,易见高尔基复合体,分泌颗粒多,表明癌细胞的分泌系统发育较成熟,分泌功能较强,能分泌较多水解酶到细胞外间质,水解破坏癌周间质,癌细胞容易发生浸润和转移,故预后差。  相似文献   
16.
杨雅莹  易永芬 《肿瘤》2012,32(6):402-407
目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi a-mannosidase Ⅱ,GM Ⅱ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响.方法:为沉默GM Ⅱ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照质粒表达载体.应用LipofectAMINE2000将质粒转染入BGC-823细胞.分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后GM Ⅱ mRNA和蛋白表达的变化,选出沉默效果最佳的质粒.应用Transwell侵袭实验和划痕损伤实验分别检测GM Ⅱ基因沉默对人胃癌细胞BGC-823侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Nco-1303沉默GM Ⅱ基因的效果最好.转染pGPU6/GFP/Neo-1303组穿透小室基质的细胞数明显少于空白对照组和转染阴性对照组(P<0.05).无血清培养液培养24 h后,转染pGPU6/GFP/Neo-1303组细胞的迁移能力较空白对照组和转染阴性对照组明显降低(P<0.05).结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌BGC-823细胞中GMⅡmRNA和蛋白的表达,从而抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力.GM Ⅱ可能成为胃癌治疗的新靶点之一.  相似文献   
17.
18.
目的运用外源性RNA干扰技术,敲低MDA-MB-231乳腺癌细胞中软骨同源蛋白1(CART1)基因的表达,研究CART1基因沉默后对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法采用人工合成的针对CART1基因的siRNA,用转染试剂RNAi MAX将CART1-siRNA转染MDA-MB-231细胞。实时定量PCR检测转染后CART1 mRNA水平,Western blot法检测转染后CART1蛋白水平,TranswellTM侵袭实验检测MDA-MB-231细胞侵袭、CCK-8法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 CART1-siRNA能有效沉默CART1在MDA-MB-231细胞中的表达,CART1沉默后MDA-MB-231细胞侵袭和增殖能力明显下降,S期细胞的比率增高而G2/M细胞比率减少。结论下调MDA-MB-231细胞CART1的表达,可降低其侵袭和增殖能力、诱导S期阻滞。  相似文献   
19.
51例胃肠道间质瘤的临床和病理研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究胃肠道间质瘤(GISTs)临床和病理形态特点及免疫组织化学在诊断中的价值,讨论肿瘤的组织来源、治疗和预后.方法:对51例GISTs进行光镜观察,用SP免疫组织化学方法检测CD117(c-kit)、CD34、波形蛋白、actin、s-100等抗原标记物在肿瘤中的表达情况.结果:51例GISTs,其中40例以梭形细胞为主;17例伴有上皮样细胞,4例单纯由上皮样细胞组成.免疫组织化学显示肿瘤组织中抗原标记物表达阳性率分别为CD117 95.0%(48/51),CD34 80.0%(41/51).结论:GISTs是消化道最常见的间叶性肿瘤,光镜形态与真性肌源性和神经源性肿瘤极为相似,免疫标记物配合使用可对其做作出正确诊断,GISTs可能起源于多潜能的间质干细胞.  相似文献   
20.
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