大肠癌生物学行为的初步研究——有关酶组织化学与超微结构的观察

大肠癌中以高分化腺癌与乳头状腺癌的预后较好而印戒细胞癌的恶性程度最高,为此,我们对不同类型大肠癌细胞作了组织化学与超微结构的初步观察,期望对上述类型癌细胞恶性程度不同的原因作进一步了解。     

THE FURTHER STUDY ON BIOLOGICAL BEHAVIOR OF COLORECTAL ADENOCARCINOMA:THE EXTRACELLULAR PROTEOGLYCAN DEGRADED BY ARYLSULFATASE B

The fresh tissues were obtained from 64 colorectal adenocarcinoma (43 well-differentiated and moderately-differentiated adenocarcinoma, 12 poorly- differentiated adenocarcinoma and 9 mutinous cell carcinoma including signet ring cell carcinoma) during surgical operation. The resected edge of each specimen was used for control group. The arylsulfatase B was studied by histochentical staining in different types of colorectal adenocarcinoma, among which 19 cases were investigated by electronhistochemical staining so as to observe the Ruthenium Red granules alteration which represented the extracellular proteoglycan changes and ultrastructure of cancer cells.The results showed that the mutinous cell carcinoma was of the most Intensive arylsulfatase B activity and has a lot of secretory granules with various electron densities in the cytoplasm. The Ruthenium Red granules close to the cancer cell disappeared, a part of remainders changed into the lowered electron density and indistinct shape. In contrast, the     

肝癌及癌旁肝组织的高尔基体差异蛋白质分析

目的 筛选并鉴定肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组中差异表达的蛋白质,从高尔基体层面解释肝癌的发生和发展机制,为早期诊断和抗癌药物的研发提供线索.方法 应用亚细胞比较蛋白质组学研究方法,比较分析肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组.收集肝癌患者手术切除的癌组织和癌旁肝组织标本,蔗糖密度梯度离心法分离高尔基体.建立并优化两种组织高尔基体的双向电泳方法,用PD-Quest软件分析差异表达的蛋白质点,然后用质谱仪获取相应蛋白点的肽质指纹图谱,联网到Swiss-Prot蛋白质组数据库鉴定获得的差异蛋白质点,最后用Western blot验证双向电泳结果.蛋白质相对表达量的比较采用配对t检验.结果 获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱.与癌旁肝组织相比,肝癌高尔基体蛋白质组有包括膜联蛋白5在内的27个蛋白质位点表达上调,包括染色体修饰蛋白2b在内的20个蛋白质位点表达下调,初步鉴定出了其中17个蛋白质,并用Western blot从蛋白质水平上验证了双向凝胶电泳结果.结论 肝癌及癌旁肝组织高尔基体蛋白质组具有不同的蛋白质位点,这些差异表达的蛋白质涉及到细胞的能量代谢、肿瘤的侵袭和转移,细胞周期调控等方面,为进一步阐释高尔基体在肿瘤的发生和发展中所起的作用提供了有价值的信息.     

水解酶在大肠癌中的表达与预后的关系探讨

采用酶组织化学法及电镜技术，探讨β－半乳糖苷酶和芳香硫酸脂酶在５０例不同病理类型大肠癌中的表达与预后的关系。结果显示印戒细胞癌和粘液腺癌两种水解酶的阳性率较管状腺癌和乳头状腺癌高（Ｐ＜０．０１），而前两者的５年生存率则较后两者低（Ｐ＜０．０１）。印戒细胞癌和粘液腺癌的超微结构特点是粗面内质网较多，易见高尔基复合体，分泌颗粒多，表明癌细胞的分泌系统发育较成熟，分泌功能较强，能分泌较多水解酶到细胞外间质，水解破坏癌周间质，癌细胞容易发生浸润和转移，故预后差。     

51例胃肠道间质瘤的临床和病理研究

目的:研究胃肠道间质瘤(GISTs)临床和病理形态特点及免疫组织化学在诊断中的价值,讨论肿瘤的组织来源、治疗和预后.方法:对51例GISTs进行光镜观察,用SP免疫组织化学方法检测CD117(c-kit)、CD34、波形蛋白、actin、s-100等抗原标记物在肿瘤中的表达情况.结果:51例GISTs,其中40例以梭形细胞为主;17例伴有上皮样细胞,4例单纯由上皮样细胞组成.免疫组织化学显示肿瘤组织中抗原标记物表达阳性率分别为CD117 95.0%(48/51),CD34 80.0%(41/51).结论:GISTs是消化道最常见的间叶性肿瘤,光镜形态与真性肌源性和神经源性肿瘤极为相似,免疫标记物配合使用可对其做作出正确诊断,GISTs可能起源于多潜能的间质干细胞.     

高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ、E-cadherin和α-catenin在卵巢上皮肿瘤组织和不同转移能力的卵巢癌细胞中的表达

目的:检测高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)、E-cadherin和α-catenin在不同卵巢上皮肿瘤组织和不同转移能力的卵巢癌细胞中的表达。方法:运用免疫组织化学法检测46例卵巢上皮恶性肿瘤(其中有大网膜或淋巴结转移者27例)、15例卵巢上皮交界性肿瘤及12例卵巢上皮良性肿瘤组织中GMⅡ、E-cadherin和α-catenin的表达情况。体外培养卵巢癌A2780、SKOV-3和HO-8910细胞,分别应用RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测GMⅡ、E-cadherin和α-catenin mRNA和蛋白的表达情况。结果:在卵巢上皮恶性肿瘤中GMⅡ的阳性表达率(87%)和E-cadherin、α-catenin的异常表达率(80%和72%)明显高于卵巢上皮交界性肿瘤(60%、20%和40%)和卵巢上皮良性肿瘤(42%、0%和17%),且有转移患者肿瘤组织中的阳性表达率和异常表达率明显高于无转移者(P<0.05)。A2780、SKOV-3和HO-8910细胞中GMⅡ荧光表达强度逐渐增强,E-cadherin和α-catenin荧光表达强度逐渐减弱。在A2780、SKOV-3、HO-8910中,GMⅡmRNA和蛋白表达水平逐渐增加,而E-cadherin和α-catenin mRNA及蛋白表达水平则逐渐减弱,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GMⅡ、E-cadherin和α-catenin可能在卵巢癌的恶性进展中发挥重要作用,GMⅡ有望成为卵巢癌预后的标志和治疗靶点。     

RNA干扰maspin基因对胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响

目的:探讨转染maspin特异性短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)重组质粒对胃癌细胞株MKN-28凋亡的影响.方法:设计并合成针对maspin基因的shRNA,并将其与真核表达载体pGenesil-1.1连接,构建重组质粒pGenesil-maspin.应用RT-PCR和Western 印迹法检测转染重组质粒后MKN-28细胞中maspin、bcl-2和bax mRNA及蛋白的表达变化,应用FCM法检测转染重组质粒对MKN-28细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响.结果:成功构建maspin特异性shRNA重组质粒pGenesil-maspin1、pGenesil-maspin2及pGenesil-HK(阴性对照); pGenesil-maspin成功转染后可明显下调胃癌细胞MKN-28中 maspin和bax mRNA及蛋白的表达水平(P<0.01),并上调bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01);重组质粒转染后,MKN-28细胞的细胞周期呈现G0/G1期细胞减少(P<0.01),细胞凋亡率下降(P<0.01).结论:外源性maspin shRNA转染MKN-28细胞后能下调maspin的表达,抑制胃癌细胞的凋亡,且使细胞周期分布发生改变;其分子机制可能与上调bcl-2和下调bax的表达有关.     

过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对胃癌细胞株BGC-823增殖的影响

目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌细胞株BGC-823增殖活性的影响。方法构建真核表达载体EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine2000转染至人胃癌细胞株BGC-823,筛选稳定细胞株,用免疫荧光观察转染效率。用RT-PCR法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2 mRNA的表达,用Western blot法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2蛋白表达的变化,用MTT法及流式细胞仪检测过表达GMⅡ后对细胞增殖活性的影响。结果 GMⅡ真核表达质粒构建成功并成功转染,MTT结果示过表达GMⅡ后胃癌细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比较,GMⅡ过表达组胃癌细胞G1期细胞明显减少,S期细胞比例明显增加。转染后胃癌细胞GMⅡmRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且可明显上调胃癌细胞BGC-823中c-myc的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对bcl-2的调节作用不明显。结论过表达GMⅡ能促进胃癌细胞增殖,可能与上调c-myc的表达有关。