酵母双杂交技术筛选与克隆白细胞中与NS5ATP7蛋白结合的蛋白编码基因

目的 应用酵母双杂交体系寻找与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A反式激活蛋白7(human gene 5 transactivated by nonstructural protein 5A of hepatitis C virus,NS5ATP7)相互作用的白细胞蛋白,以探讨SN5ATP7的生物功能。方法 应用酵母双杂交系统3,构建NS5ATP7诱饵质粒,转化酵母AH109,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基(SD／-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒。DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果 筛选出15个与NS5ATP7特异性相互作用的克隆,其中包括人类RhoGDF分裂抑制剂α、人类细胞色素b558a亚单位、人类MLL(MLL)基因外显子、人类S100钙结合蛋白A9(钙粒蛋白B)、人类移动抑制因子相关蛋白14变体E(S100A9)、人类金属硫蛋白2A、人类染色体序列及人类cDNA序列等,1个是未知功能基因。结论 初步克隆了NSSATP7与白细胞结合蛋白基因,根据所克隆到的基因,对以后研究NS5ATP7的功能有一定的提示作用;为以后研究这些能与NS5ATP7相互作用的基因在白细胞中的生理功能奠定了基础。     

抑制剂增强碳青霉烯类灭活法对革兰阴性杆菌碳青霉烯酶初步分类的评价

目的评价抑制剂增强碳青霉烯类灭活法(ieCIM)对革兰阴性杆菌碳青霉烯酶检测及初步分类的可靠性。方法分别以他唑巴坦和乙二胺四乙酸作为碳青霉烯酶抑制剂,对CIM进行改良。选取临床分离的198株肠杆菌科细菌和35株非发酵菌,采用ieCIM检测碳青霉烯酶并进行初步分类,以PCR方法检测碳青霉烯酶基因作对比。结果 198株肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因阳性101株,CIM检测阳性99株;碳青霉烯酶基因阴性97株,CIM检测均阴性。35株非发酵菌中碳青霉烯酶基因阳性25株,CIM检测阳性24株;碳青霉烯酶基因阴性10株,CIM检测均阴性。使用ieCIM初步分类碳青霉烯酶,87株产A类酶菌株中检出85株(97.7%),25株产B类酶菌株中检出22株(88.0%),12株产D类酶菌株和2株同时产A、B类酶菌株全部检出,ieCIM检测敏感性为96%,特异性100%。结论 ieCIM与基因检测结果一致性高,适合临床微生物常规工作中对碳青霉烯酶的检测及初步分类。     

丙型肝炎病毒NS5A蛋白的反式激活作用研究

0引言 丙型肝炎病毒(HCV)是一种单股正链RNA病毒,编码一种多蛋白分子,在病毒和宿主细胞蛋白酶的共同裂解作用下,至少裂解为3种结构蛋白(C、E1和E2)和6种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[1,2].NS5 A是非结构蛋白的一种,哺乳动物细胞表达的NS5A蛋白以两种形式存在,分子量分别为56 kD和58 kD.HCV NS5A是HCV基因组编码的一种最为重要的具有多种生物学活性的非结构蛋白质[3-5],是HCV基因组编码的一种具有反式激活作用等多种生物学活性的非结构蛋白质.其基因序列的变异,决定部分HCV病毒株对于IFN-α治疗的疗效应答.HCV NS5A蛋白还具有结合双链RNA激酶(PKR)的生物学活性,对于HCV感染的靶细胞的细胞周期与细胞凋亡的分子生物学调节机制密切相关[6].     

透明质酸敷料治疗颜面再发性皮炎的疗效观察

我院采用透明质酸敷料（商品名益肤,南京天纵易康生物科技有限公司）治疗颜面再发性皮炎,发现其对该病有良好的治疗效果,现报告如下。     

2种生化检测系统电解质结果比对分析研究

目的 :探讨贝克曼C-800全自动生化分析仪和越华MI921电解质分析仪血清电解质检测结果的可比性。方法:选择2014年1月至2014年3月符合纳入标准的病例,分别采用贝克曼C-800全自动生化分析仪和越华MI921电解质分析仪对血清中钾、钠、氯的含量进行检测,并将结果进行比对分析。结果:贝克曼C-800全自动生化分析仪与越华MI921电解质分析仪的钾、钠、氯检测结果比对分析所得到的回归方程分别为:y=0.967x+0.123、y=0.994x+0.975、y=0.811x+19.42;2种电解质检测系统的钾、钠、氯的相关系数(r)分别为0.990、0.976、0.952。结论 :贝克曼C-800全自动生化分析仪和越华MI921电解质分析仪的钾、钠、氯检测结果具有良好的相关性。     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒对MDM4信号转导的影响

0 引言Shvarts et al 报告了一种与 p53蛋白结合蛋白的新基因,命名为 MDMX,与 MDM2蛋白在一级结构上具有同源性,特别是在 p53蛋白结合域更是如此.另外,MDM2羧基末端的金属结合域在 MDMX 分子中也是高度保守的.MDMX 蛋白又称为 MDM4,是 p53的一种结合蛋白,是 p53蛋白的负调节因子.近年来的研究结果表明,乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)的感染对感染的肝细胞的信号转导产生显著影响,部分是通过对 MDM4/MDMX 的调节来实现的.     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因8的克隆化研究

目的 丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白5A(NS5A)是一种具有显著反式激活作用的病毒蛋白质。为了探索HCV NS5A病毒蛋白反式激活作用的新的靶基因，我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术对于转染和未转染的肝母细胞瘤细胞系HepG2进行分析。研究结果将有助于阐明HCV感染相关疾病的发病机制。方法 以HCV NSSA表达质粒peDNA3．1(-)-NSSA转染HepG2细胞，以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照，提取mRNA并进行SSH分析。对于所获基因片段序列分析表明，其中之一为新型基因片段，与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性，利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对，进行电子拼接。根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列，确定新型基因序列。结果 结果从HepG2细胞提取总RNA，多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列，测序证实，命名为NSSATP8在GenBank中注册，注册号为．AF529369.NSSATP8基因的编码序列全长为1449(nt)，编码产物由483个氨基酸残基(aa)组成。结论 HCV NS5A反式激活新型靶基因NSSATP8筛选与克隆，进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础。     

打造"精品杂志"铸就辉煌未来

目前,《实用肝脏病杂志》经过多项学术指标及同行专家评议推荐,被中华人民共和国科学技术部中国科学技术信息研究所正式收录为“中国科技论文统计源期刊”(中国科技核心期刊),这是《实用肝脏病杂志》发展史上一个重要的里程碑,可喜可贺!从《实用肝脏病杂志》创刊到现在,已历经十载有余。在过去艰难的岁月中,《实用肝脏病杂志》的创刊、发展和进步,得到了全国各地著名肝病学家的大力支持和关爱。无论是耆耆老者,还是莘莘学子,他们怀着对肝病事业的热爱,挑灯夜战,为我们写下了一篇又一篇重要的文献,使《实用肝脏病杂志》逐步得到了同行的认可,…     

低密度脂蛋白受体的研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)受体的研究,主要集中在CD81分子和低密度脂蛋白受体(loW density li-poprotein-receptor,LDL-R)两种穿膜蛋白分子[1]。最近的研究表明,LDL-R可能是HCV感染肝细胞的受体候选分子[2]。 一、HCV与血清脂蛋白的结合 1992年Thomssen等[3]发现了含有HCV RNA的病毒颗粒