HPV16型E7抗原B细胞表位的预测与鉴定

目的分析人乳头瘤病毒16型(HPV16)早期蛋白E7的B细胞优势表位,并对其进行免疫原性鉴定。方法采用亲水性方案、柔韧性方案、抗原指数方案及表面可能性方案综合评估其B细胞优势表位,并运用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定。以合成肽免疫Balb/c小鼠,进行免疫效果评价。结果综合分析考虑HPV16 E714-21(P1),HPV16 E726-37(P2),HPV16 E744-51(P3)可能是B细胞优势表位,免疫小鼠后可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,但只有P1和P2产生的抗体与人宫颈癌组织上清液结合呈阳性反应。结论HPV16 E714-21和HPV16 E726-37具有较强的免疫原性,可能成为HPV感染肽疫苗的候选表位。     

HPV16E7_(11-20)配体抗肿瘤免疫的作用

目的比较HPV16型E7抗原CTL表位E711-20(YMLDLQPETT)与其修饰多肽配体APL(YLLDLQPE-VT)诱发特异CTL免疫应答的能力和抗肿瘤免疫治疗的作用。观察E711-20及其APL的小鼠TC-1细胞肿瘤免除率、存活时间与荷瘤小鼠的肿瘤体积变化,了解其预防和治疗效果。方法以E711-20及其修饰多肽配体(APL)免疫C57BL/6小鼠,测定免疫后小鼠脾淋巴细胞的增殖指数;用LDH释放试验检测免疫后小鼠脾淋巴细胞的CTL杀伤活性。结果脾细胞增殖实验中,3组增殖指数如下:IFA+APL组2.42±0.38,IFA+E711-20组1.68±0.32,IFA组1.07±0.22;CTL杀伤效应实验中,3组靶细胞溶破率(%)如下:IFA+APL组54.21±0.12,IFA+E711-20组62.33±0.46,IFA组0.88±0.07;IFA组肿瘤免除率为0,IFA+E711-20组肿瘤免除率为40%,IFA+APL组肿瘤免除率为80%;荷瘤小鼠中,对照组IFA肿瘤体积迅速增大,E711-20和APL组的肿瘤生长速度较慢。APL免疫诱导的小鼠脾淋巴细胞,其CTL杀伤活性和增殖能力强于E711-20;APL对TC-1肿瘤细胞的预防和治疗效果优于E711-20。结论 APL诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力和抗肿瘤效果优于E711-20,可能为针对HPV16E7抗原的肽疫苗分子设计提供理想的CTL表位。     

热休克蛋白110对人乳头瘤病毒16型E711-20配体的佐剂效应研究

目的 探讨热休克蛋白（HSP）110对人乳头瘤病毒（HPV）16型E711-20配体的免疫佐剂效应。方法 体外构建HSP 110与HPV 16型E711-20配体的复合物。将C57BL/6雌性6周龄小鼠15只随机分为3组：复合物组、配体组和磷酸盐缓冲液（PBS）组,每组5只,腹腔注射免疫复合物100 μg,肽10 μg,PBS 100 μl,2周后重复1次,第2次免疫2周后,分离脾细胞作为效应细胞。免疫小鼠后采用噻唑蓝法（MTT）判断脾淋巴细胞增殖活性,干扰素γ（IFN-γ）胞内染色法检测小鼠脾细胞中特异性细胞毒T淋巴细胞,并以标准51Cr释放实验检测特异性细胞毒T淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应。采用SPSS10.0软件进行t检验。结果 HSP110与HPV16型E711-20配体的复合物免疫小鼠后脾淋巴细胞增殖活性（增殖指数为1.87 ± 0.12）和CD8+ IFN-γ+ T细胞的频率（3.9%）显著高于配体组（分别为0.32 ± 0.071和0.4%）,差异均有统计学意义（P < 0.01）。配体的复合物对靶细胞的杀伤效应（效靶比为100 ∶ 1、50 ∶ 1、25 ∶ 1、12.5 ∶ 1时,杀伤率分别为54.7%、72.2%、61.5%、39.8%）显著高于配体组（分别为35.2%、49.3%、28.1%、17.4%）。结论 HSP110能增强HPV16型711-20配体的免疫效应,具有较好的免疫佐剂作用。     

2型糖尿病合并肺炎克雷白杆菌败血症脾脓肿一例

患者男性 ,4 7岁。因多饮、多食、多尿、消瘦 13年 ,畏寒、发热 12ｄ入院。 13年前被确诊为 2型糖尿病 ,用降糖片、胰岛素治疗后症状缓解。 6个月前出现双下肢水肿 ,12ｄ前出现畏寒、发热。为进一步诊治入我院。体检 :Ｔ 38 9℃ ,Ｐ88次 /ｍｉｎ ,Ｒ 2 0次 /ｍｉｎ ,ＢＰ 74 / 4 6ｍｍＨｇ(1ｍｍＨｇ =0 133ｋＰａ) ,神志清楚 ,消瘦 ,中度贫血貌 ,心率 88次 /ｍｉｎ ,律齐 ,双肺未见异常 ,腹软 ,肝脾未扪及 ,肝脾及双肾区无叩痛 ,移动性浊音阴性 ,双足水肿。查血象 :ＷＢＣ 8 2× 10 9/Ｌ ,中性0 195 ,淋巴 0 80 5 ,ＲＢＣ 2 86× 10 12…     

掌跖角化牙周病综合征一例及组织蛋白酶C基因突变检测

目的 探讨掌跖角化牙周病综合征患者组织蛋白酶C基因（CTSC）突变的特点。 方法 收集1例掌跖角化牙周病综合征患者的临床资料,采集患者及其父母的外周静脉血各2 ml,同时取100例健康人的静脉血2 ml作为对照。以提取的DNA作为模板,用成对的外显子特异性引物对患者的CTSC基因的全部7个外显子进行PCR扩增后直接测序,检测患者CTSC基因的突变情况。 结果 患者的CTSC基因存在复合型杂合突变,外显子6内第824位碱基C被T置换（c.824C > T）,此突变导致CTSC基因第275位氨基酸密码子由ACC替换为ATC,其编码的氨基酸由苏氨酸替换为异亮氨酸（p.T275I）;外显子7内第1040位碱基A被G置换（c.1040A ＞ G）,导致CTSC基因第347位氨基酸密码子由TAT替换为TGT,其编码的氨基酸由酪氨酸变为半胱氨酸（p.Y347C）。其中c.824C > T突变是CTSC基因的新突变位点。患者父亲和母亲分别为c.824C > T和c.1040A ＞ G杂合突变。100例健康对照中未发现CTSC基因c.824C > T和c.1040A ＞ G突变。 结论 CTSC基因突变是导致掌跖角化牙周病综合征临床表型的致病原因,c.824C > T突变扩大了CTSC基因的突变谱,为掌跖角化牙周病综合征的基因诊断提供了依据。     

HPV16E749-57及其修饰肽对小鼠肿瘤生长特性和转移规律的影响

目的:探讨人乳头瘤病毒16型E7抗原表位E749-57及其修饰肽是否能够在体诱导特异性细胞毒性T细胞杀伤效应,以及是否具有相应的治疗作用.方法:以HPV16E749-57及其修饰肽免疫荷瘤小鼠,研究小鼠肿瘤的生长特性和转移规律.结果:经修饰肽和原有表位HPV16E749-57免疫的荷瘤小鼠,瘤细胞的转移率显著降低,平均存活时间明显延长.结论:修饰肽具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性,并且能够起到一定的治疗作用.     

HPV18E7抗原HLA-A2限制性CTL表位的初步筛选

目的:初步筛选人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为表位免疫原性鉴定提供靶肽.方法:采用超基序、多项式和量化基序方案相结合的方法,对靶抗原HPV18E7的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位进行预测,并应用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定.结果:分别预测出5条、1条和6条九肽表位,综合三种预测方案确定其中1条为候选合成表位,合成肽的纯度大于95%,经质谱分析合成肽的分子量测定值与理论值相符.结论:超基序、多项式和量化基序方案联合应用提高预测效率,避免了在研究HPV18E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,为后继的抗原表位的免疫原性的鉴定奠定了实验基础.     

HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位预测及其合成

目的：预测、合成、纯化及鉴定人乳头瘤病毒E7抗原的HLA－A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位,为表位抗原特异性鉴定和临床研究提供靶肽。方法：采用超模体、多项式和量化模体方案相结合的方法,对靶抗原HPV16E7的HLA－A2限制性细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位进行预测,并运用固相合成法合成多肽,经RP－HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定。结果：分别预测出了16个、10个和3个九肽表位,确定其中5个九肽为候选合成表位,各合成肽的纯度都在95％以上。经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论：超模体、多项式和量化模体方案联合应用可提高预测效率,避免了在研究E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,可用于后续实验研究。     

Foxpl及Ki-67在皮肤基底细胞癌的表达

目的：检测皮肤基底细胞癌（BCC）组织中Foxpl和Ki一67蛋白的表达。方法：采用免疫组化方法检测BCC组织石蜡切片中Foxpl和Ki-67蛋白的表达。结果：40例BCC标本中Foxpl蛋白的表达率为82．5％,Ki-67蛋白的表达率为75％,均显著高于对照组（均P〈O．01）。结论：Foxpl和Ki-67可能参与BCC的发生和发展。     

伴皮肤鳞状细胞癌的角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征一例GJB2基因突变研究并文献复习

目的 以GJB2基因为候选基因,研究1例伴有皮肤鳞状细胞癌的角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征患者的分子病因。 方法 收集1例伴有皮肤鳞状细胞癌的角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征患者临床资料,提取患者及其父母的外周血DNA,用PCR扩增GJB2基因的第2外显子后直接测序,检测患者GJB2基因的突变情况。 结果 患者GJB2基因中核苷酸序列外显子2第148位碱基由G突变为A（c.148G > A）,此突变导致GJB2基因第50位氨基酸密码子由GAC替换为AAC,其编码的连接蛋白Cx26第50位天冬氨酸转换成天冬酰胺（p.Asp50Asn ）。此外,GJB2基因外显子2第79位碱基由G突变为A（c.79G > A）,突变导致连接蛋白Cx26第27位的缬氨酸转换成异亮氨酸（p.Val27Ile）。患者的父母未检测到GJB2基因突变位点。文献检索发现国外已有13例角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征伴皮肤黏膜鳞状细胞癌的病例报道,经过基因测序确诊的7例患者均为GJB2基因c.148G > A突变。结论 GJB2基因突变可能是导致本例角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征临床表型的致病原因,c.148G > A突变位置可能与皮肤鳞状细胞癌发生有关。