核小体诱导BALB/c小鼠产生狼疮肾的研究

目的 了解核小体在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法 用蔗糖连续密度梯度离心法从新鲜鸡血红细胞中提取核小体,皮下免疫BALB/c小鼠,采集小鼠血清和肾脏标本。ELISA方法检测其IgG型dsDNA抗体和ANA抗体水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积情况;组织病理观察小鼠肾脏损伤情况。结果 核小体免疫后14d,BALB/c小鼠血清中开始出现IgG型dsDNA抗体和ANA抗体,其滴度随时间延长逐渐升高;核小体免疫后35d,小鼠肾脏出现大量IgG型免疫复合物沉积,光镜观察显示有明显肾脏损伤。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论 核小体可以诱导正常小鼠产生SLE样征候群,提示核小体参与SLE的发病。     

静脉应用核小体H2B表位肽防治小鼠实验性系统性红斑狼疮的研究

目的 探讨静脉途径应用基于核小体的表位肽防治系统性红斑狼疮(SLE)的可行性。方法 以凋亡细胞诱导的SLE样症状小鼠为模型，用核小体表位肽H2B14-28静脉途径诱导小鼠免疫耐受，观察实验小鼠自身抗体产生情况以及SLE样临床症状改善情况。结果用表位肽H2B14-28诱导免疫耐受以后，可显著降低实验小鼠抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNP抗体和抗心磷脂(ACL)抗体的产生，同时显著改善小鼠蛋白尿、白细胞低下、肾脏免疫复合物沉积程度和病理损伤程度。结论 静脉途径应用核小体表位肽H2B14-28可有效阻止实验性SLE病变的形成，基于核小体表位肽的肽疫苗的研究有可能为SLE的防治开辟一条全新的思路和途径。     

APL提高H2-D~b限制性天然CTL表位HPV-16E7_(49-57)免疫效应

HPV-16E7_(49-57)是H2-D~b限制性免疫显性CTL表位,是治疗HPV-16相关病变的理想靶标,研制HPV-16多肽疫苗可以参考表位为基础.但天然表位HPV-16E7_(49-57),的肿瘤免疫效果并不理想.对表位进行氨基酸置换修饰,筛选出免疫原性强的修饰多肽配体(APL),对构建HPV-16多肽疫苗有重要的意义.     

β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白在皮肤基底细胞癌中的表达和意义

目的：探讨皮肤基底细胞癌（basal cell carcinoma,BCC）中β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白的表达与BCC发生发展的关系。方法：采用免疫组化方法检测BCC组织切片中β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果：48例BCC标本中β-catenin蛋白的异常表达率为91.67%,Bcl-2、Bax蛋白的表达率分别为89.58%、62.5%,且Bcl-2与Bax蛋白的表达呈负相关。结论：β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白的异常表达在BCC的发生、发展中起重要作用。     

HLA-A*0201/HPV-18E77-15五聚体的构建及其初步应用

目的构建人乳头状瘤病毒18型（HPV-18）特异性HLA-A2肽五聚体，为HPV-18型抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的检测提供直接、有效的方法，并将其初步应用于宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL的检测。方法构建含有HLA-A2-BSP和β2M基因的原核表达载体，并进行表达、复性、鉴定及纯化。再将特异性短肽与HLA-A2-BSP和β2M在体外进行耦合，该复合物经纯化浓缩后进行生物素化。生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体，此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成五聚体。运用所构建的五聚体，通过流式细胞仪检测宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL，并与正常对照组进行比较分析。结果所构建的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体的表达高效而且稳定，纯度达90％以上。HPV-18阳性宫颈癌患者体内抗原特异性CTL计数明显高于对照组（P〈0．05）。结论在五聚体复合物的构建中，高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体是构建成功的基础。所构建的MHC I类分子五聚体和传统的四聚体相比，作为体内、外HPV-18E7抗原特异性CTL检测的有效工具，具有一定优势。     

巨大尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒型别检测

目的 探讨巨大尖锐湿疣患者皮损人乳头瘤病毒（HPV）-DNA型别。方法 收集门诊2007年1月至2010年1月巨大尖锐湿疣患者67例,凯普导流杂交基因芯片技术对疣体行HPV-DNA分型检测。结果 67例巨大尖锐湿疣患者中63例检测出HPV-DNA,阳性率为94.02%。HPV-DNA阳性者中检出低危型HPV 84例次（占60.87%）,高危型HPV 54例次（占39.13%）。HPV亚型仍以低危型HPV6、11为主,但高危型HPV16、18偏高。结论 巨大尖锐湿疣感染高危型HPV16、18偏高。     

复发性外阴尖锐湿疣HPV的检测及型别分析

采用聚合酶链反应（PCR）方法结合核酸斑点杂交技术,对45例外阴复发性尖锐湿疣（RCA）进行HPV DNA的检测及分型。结果45例RCA中HPV DNA阳性40例,HPV检出率为88.8%。健康对照组各型均阴性,差异有极显著性（P〈0.001）。40例RCA中低危型HPV6、11分别为27.5%、22.5%;高危型HPV16、18未检出;高危型HPV33为5%。其中HPV6、11、16、18、33多重型别感染的病程大于7个月以上较单一型感染的检出率明显升高（85.7%vs14.2%,P〈0.001）。RCA多重型别感染与对照初发CA多重型别感染检出率比较差异有显著性（45%vs11.1%,P〈0.05）。温州地区复发性尖锐湿疣以多重型别混合感染为主,且与临床病程迁延,病情复发存在着一定的相关性。     

外周血T淋巴细胞亚群及Th17指标与梅毒的关系探究

目的:探究外周血T淋巴细胞亚群及Th17指标与梅毒的关系。方法:选取2014年2月至2015年12月于本院进行诊治的63例梅毒患者为观察组,63名同龄健康体检者为对照组,然后将两组的外周血T淋巴细胞亚群指标及血清Th17指标进行分别检测与比较,并比较观察组中不同分期与TRUST滴度梅毒患者的上述指标检测结果,另采用Logistic分析外周血T淋巴细胞亚群及Th17指标与梅毒的关系。结果:观察组的NK细胞均低于对照组,其他外周血T淋巴细胞亚群指标及血清Th17指标均高于对照组,且观察组中不同分期及TRUST滴度梅毒患者的上述指标检测结果也存在明显差异;采用Logistic分析显示,外周血T淋巴细胞亚群及Th17指标均与梅毒有密切的关系,P均0.05。结论:外周血T淋巴细胞亚群及Th17指标均与梅毒有密切的关系,因此对梅毒患者进行上述指标的检测价值较高。     

宫颈癌患者外周血HPV16抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞的检测及意义

目的:初步探讨人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌患者细胞免疫状况,了解其外周血抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞的水平.方法:采取免疫荧光标染重组MHC Ⅰ类分子-肽五聚体技术,运用流式细胞术定量检测患者和正常人外周血CD8~+细胞毒性T细胞、记忆性细胞毒性T细胞、活化细胞毒性T细胞及HPV16抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞.结果:宫颈癌患者CD8~+细胞毒性T细胞计数、记忆性细胞毒性T细胞计数、体内抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞计数和对照组比较差异无统计学意义,但活化细胞毒性T细胞计数低于对照组(P=0.322),体外经抗原肽刺激后抗原特异性CD8~+细胞毒性T细胞计数高于对照组(P=0.0068).结论:HPV16 阳性宫颈癌患者外周血中活化细胞毒性T细胞数目减少,表明患者细胞免疫功能受到一定的影响,通过抗原表位有效的诱导是提高患者的特异性细胞免疫功能的重要途径,运用五聚体技术检测宫颈癌患者抗原特异性细胞毒性T细胞,可初步反映患者特异性细胞免疫状态并有利于进行复发和预后分析.     

HPV18E7抗原T细胞表位的鉴定及CD4+T淋巴细胞的免疫反应

目的 初步鉴定人乳头瘤病毒(HPV)18型E7抗原的辅助T淋巴细胞(Th)表位及CD4+T淋巴细胞的免疫反应.方法 以免疫磁珠进一步分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)中的CD4+T淋巴细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用之前实验中已获得的3个HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位刺激外周血CD4+T淋巴细胞,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测CD4+T淋巴细胞增殖活性.ELISA方法分析表位刺激CD4+T淋巴细胞分泌的细胞因子.结果 多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激CD4+T淋巴细胞后能够有效诱导CD4+T淋巴细胞增殖,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),多肽P1 (HPV18 E780-94)刺激CD4+T淋巴细胞分泌IFN-γ,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位.