医学昆虫蜚蠊化学组分及药用价值研究现状

医学昆虫蜚蠊（blatta）,俗名蟑螂（cockroach）,古称费蠊、蠊、石姜、负盘、滑虫、茶婆虫、香娘子等,属节肢动物门、昆虫纲、蜚蠊目。在距今3.5亿年前的石炭世纪前期化石中就有蜚蠊出现,说明它是古老的昆虫类群之一,演化史上称之为＂蜚蠊时代＂。早在1960年,Princis就曾报道蜚蠊在世界范围内约有5000种,中国约有250种左右,分为8科20属。     

血吸虫生殖产卵相关基因pcDNA3／Sj SDISPDNA在小鼠体内的组织分布及整合的观察

目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组喷柱pcDNA3／SjSDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12b、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后纯化基因组DNA进行PCR扩增,结果经琼脂糖凝胶电泳分析。结果注射后12h,在血液、心、肝、脾、肺、肾及注射鄂位肌肉中可检测到pcDNA3／Sj SDISP,至第1w,仍可在部分小鼠中检测到,至第3w不再检出。未发现生殖产卵相关基因pcDNA3／Sj SDISP整合入小鼠基因组中。结论肌注pcDNA3／Sj SDISP后,可在组织中广泛分布,但并未持续存在体内。未发现与宿主细胞基因组整合的直接证据     

品管圈在降低患者跌倒发生率中的应用

目的应用品管圈（QCC）方法,降低患者跌倒发生率,提高患者满意度。方法成立QCC小组,采用对本病区现状进行调查,目标设定,原因分析,对策实施,效果确认等措施。结果住院患者的跌倒发生率由实施QCC前33％降到1％。结论通过QCC的实施降低患者跌倒的发生率,守护了患者的安全,提高了患者的满意度。     

调胃健脾丸最大给药量的实验研究

目的:进行调胃健脾丸的最大给药量实验,为其用药安全性提供理论依据。方法:SPF级昆明小鼠40只,雌雄各半,随机分为两组,实验组予以最大浓度的调胃健脾丸混悬液灌胃,24h内3次,灌胃容积为每次0.4m L/10g,对照组灌胃等容量的蒸馏水,连续14d。观察并记录小鼠的体质量、摄食量、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应等。结果:14d内无动物死亡,未见毒性反应,肉眼观察心、肝、脾、胃、肺、肾、大肠、小肠等组织脏器的外观、形态、质地、颜色等无异常变化。调胃健脾丸的最大给药量为69.36g(生药)/kg,为成人临床每天用药量的231.2倍。结论:调胃健脾丸的安全性较好。     

日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,攻击感染后６Ｗ计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数结果 用构建的ｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠成虫发育,肝组织减卵率为５９．３￣６５．０％,肠组织减卵率为５７．６￣６２．１％,粪便减卵率为８６．５％。结论Ｓｊ３１ＢＩＮ可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。     

结肠癌患者手术前后血浆miR-21表达水平变化及其临床意义

目的 探讨结肠癌患者手术前后血浆miR-21表达水平变化及其临床意义。方法 实时荧光定量聚合酶链反应法（real-time quantitative PCR, qRT-PCR）检测结肠癌患者与健康对照组血浆中miR-21 的表达情况,以及与临床病理参数的关系;另外检测结肠癌患者手术前一周、手术后一周和术后一月血浆中miR-21的表达水平变化。 结果 40例结肠癌患者手术前血浆中miR-21表达水平较对照组差异具有统计学意义（P<0.05）;并与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移及远处转移有关（P <0.05）,而与年龄和性别无相关性（P>0.05）;与术前相比,术后一周和一月血浆中miR-21的表达明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 结肠癌患者血浆中miR-21的表达情况,可作为结肠癌潜在的生物标志物,有望成为一种新的有效辅助诊断结肠癌及判断预后的方法。     

Sj-UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及筛选

目的构建和鉴定日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）紫外线（UV）-照射致弱尾蚴单链抗体（single chain Fv,ScFv）表达文库,并以此作为高通量的库源筛选出针对有潜在保护力的Sj尾蚴66-68 kDa抗原（Schistosoma japonicum cercariae antigen 66-68kDa,SCA66-68kDa）的单链抗体。方法选择最佳紫外灯照射条件,构建UV-致弱尾蚴小鼠模型,通过其血清被动转移实验证实其是否具有抗血吸虫攻击感染的保护效果;随后提取该小鼠脾脏mRNA,利用噬菌体展示技术构建UV-照射致弱尾蚴单链抗体库,并从库容量、多样性等方面进行鉴定;运用直接菌落挖集法以SjSCA66-68kDa筛选该抗体库,获得阳性克隆进行蛋白表达,再与SCA进行反应,验证其与SjSCA66-68kDa反应的特异性。结果构建UV-致弱尾蚴动物模型中的血清转移至小鼠体内得到42.5%的减虫率,显著高于日本血吸虫感染血清转移组的减虫率（28.0%）;日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库的库容量测定为1.9×108,重组率为100%;运用抗原直接菌落挖集法筛选共获得6个SCA66-68kDa阳性克隆,经SDS-PAGE、Western-blot分析结果显示可溶性ScFv获得了正确表达,且与相应抗原SjSCA66-68kDa特异性结合,证实成功获得了特异性抗SjSCA66-68kDa单链抗体。结论成功构建了高效日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库,从该库筛选共获得6个阳性克隆,均能诱导表达SjSCA66-68kDa特异性可溶性单链抗体。     

日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白重组抗原的制备及其诊断价值的研究

目的 探讨重组日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(rSjSDISP)用于血吸虫病的诊断价值。方法 利用经原核表达并纯化的rSjSDISP, 建立基于重组抗原的快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA),检测血吸虫感染不同时期的兔血清、健康人血清、寄生虫病患者血清(其中包括血吸虫病患者血清、肝吸虫病患者血清、肺吸虫病患者血清),比较rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA两者的早期诊断价值及对rSjSDISP F-ELISA诊断方法的诊断效能做出评价;并与SEA-IHA法和SEA F-ELISA法平行检测血吸虫病疫区335份待测人血清比较3者的敏感性和特异性。结果 成功构建pET32a/rSjSDISP重组质粒,当IPTG终浓度为0.1 mmol/L,28 ℃诱导6 h时SjSDISP重组蛋白表达量达到最大。rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA可区别出血吸虫感染28 d后的兔血清,两者检测结果差异无统计学意义;rSjSDISP F-ELISA敏感度为94.4,特异度为93.0,Youden指数为0.88。在诊断335份血吸虫病疫区现场血清中,该方法与SEA-IHA 、SEA F-ELISA具有相似的敏感性和特异性(P>0.05)。结论 rSjSDISP重组抗原可作为一种成分均一的优势诊断抗原,替代成分复杂的虫卵可溶性抗原(SEA)用于血吸虫病的诊断。rSjSDISP F-ELISA方法操作简便、快速,抗原制备易于标化,稳定性强,在血吸虫病诊断上具有较大的应用潜能。     

日本血吸虫pVAX1/SjRPS4?CB多价疫苗免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响

摘要 目的 观察血吸虫pVAX1/SjRPS4?CB多价疫苗诱导免疫对小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小的影响。 方法 55只昆明小鼠随机分成5组。PBS对照组、pVAX1空质粒组、pVAX1/SjRPS4单价疫苗组、pVAX1/SjCB单价疫苗组、pVAX1/SjRPS4?CB多价疫苗组,每组小鼠在左后腿股四头肌肌注100μg相应质粒（PBS组注射100μLPBS）。每隔2W加强免疫一次,共三次。末次免疫后2W经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴。感染后第6W剖杀小鼠,取出肝脏,常规染色,光镜下进行组织学观察及单个虫卵肉芽肿大小的测量。 结果 与对照组相比,pVAX1SjRPS4?CB多价疫苗组虫卵肉芽肿平均周长和面积明显减小（p＜0.05）。形态学上小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围仅有少量的嗜酸性粒细胞聚集,很少见到胶原纤维。 结论 pVAX1/SjRPS4?CB多价疫苗具有明显抑制肝脏虫卵肉芽肿的效果。     

金纳米棒免疫传感器检测不同感染周期日本血吸虫循环抗原的研究

目的 利用金硫共价键成功构建固相金纳米棒免疫传感器,检测不同感染周期的日本血吸虫循环抗原,并分析宿主体内抗体的消长变化。方法 晶种生长法制备金纳米棒溶液,与表面带有巯基基团的ITO玻片以金硫共价键组装成固相金纳米棒免疫传感器。聚4-苯乙烯磺酸钠(PSS)和聚丙烯胺盐酸盐(PAH)修饰固相金纳米棒免疫传感器表面,并结合日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原26-28 kDa单链抗体(SIEA26-28kDaSjscFv),检测日本血吸虫不同感染周期兔血清循环抗原。结果 固相金纳米棒免疫传感器分别与1~8周的感染血清反应,并设立阴性血清对照组;结果显示,表面等离子共振吸收峰峰值分别呈现出17 nm,52 nm,28 nm,11 nm,13 nm,23 nm,45 nm,43 nm的位移,阴性对照组未出现位移;同时,根据传感器表面等离子共振波峰对不同感染周期血清反应后的位移变化推断抗体在宿主体内呈现出先上升,后下降,再上升的变化规律。结论 通过对固相金纳米棒免疫传感器的研究,证明其能够通过表面等离子共振波峰的移动来检测日本血吸虫感染血清循环抗原;同时,对抗原抗体在宿主内的变化提供了数据支撑。固相金纳米棒免疫传感器的高特异性、灵敏度为日本血吸虫病的诊断及抗原抗体的研究提供了新的手段。