Na+/H+交换抑制剂HMA抑制低氧刺激的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:观察低氧培养对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响,以及Na /H 交换抑制剂HMA对此增殖效应的抑制作用。方法:实验于2004-12/2005-06在第四军医大学病理生理学教研室完成。健康SD大鼠2只,分离培养肺动脉平滑肌细胞,选择3～6代生长良好的细胞在常氧(O2的体积分数为0.21)或低氧(O2的体积分数为0.02)条件下培养,并分别给予0.3,1,3和10μmol/L等不同浓度的HMA(n=8),采用噻唑蓝比色实验和测定细胞总蛋白含量的方法观察细胞增殖情况,同时光镜观察细胞形态并测定培养液上清乳酸脱氢酶活力以反映药物的非特异性细胞毒作用。结果:实验所用细胞样本均进入结果分析。①体积分数为0.02氧浓度较体积分数为0.05氧浓度下培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞生长曲线抬高,低氧刺激24h增殖达到高峰。②体积分数为0.05血清培养使此增殖效应更为显著[噻唑蓝光吸收值无血清常氧组(0.238±0.011),无血清低氧组(0.280±0.009),体积分数为0.05血清常氧组(0.313±0.013),体积分数为0.05血清低氧组(0.389±0.011)]。③HMA可以抑制增殖,显著降低噻唑蓝吸光度值[对照组(0.391±0.011),0.3μmol/L组(0.377±0.010),1μmol/L组(0.328±0.012),3μmol/L组(0.289±0.006),10μmol/L组(0.246±0.007)]。④细胞总蛋白含量也显著降低[对照组、0.3μmol/L组、1μmol/L组、3μmol/L组、10μmol/L组分别为(193.30±8.51),(177.63±8.71),(166.84±9.48),(155.72±10.46)和(135.13±10.30)μmol/L]。⑤各浓度处理组细胞形态无改变,培养液上清乳酸脱氢酶活力也无明显变化[对照组、0.3μmol/L组、1μmol/L组、3μmol/L组、10μmol/L组分别为(212.23±8.44),(208.80±6.37),(209.79±7.12),(208.77±7.33),(215.42±7.81)U/L],细胞无明显损伤。结论:0.3～10μmol/L浓度的Na /H 交换抑制剂HMA可以有效抑制低氧刺激的大鼠肺动脉平滑肌增殖,此作用不是非特异的细胞毒作用所致。     

VEGF和PCNA在慢性低氧性肺动脉及高压大鼠主动脉、肺动脉平滑肌细胞中表达

目的研究慢性低氧性肺动脉高压(PAH)发生过程中,血管内皮生长因子(VEGF)及细胞核增殖抗原(PCNA)在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达。方法利用低压缺氧舱建立大鼠缺氧性肺动脉高压模型。实验分为3组即正常氧组、缺氧2wk组和缺氧3wk组。用免疫组化染色和图像分析,检测主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞中VEGF及PCNA的表达量。结果VEGF在正常氧组大鼠的主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌内均有表达;缺氧组大鼠肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞内VEGF的表达明显增强并随着缺氧时间的延长而增加;主动脉平滑肌内VEGF的表达量无明显变化。PCNA在正常氧组大鼠的主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌内均有微弱表达;但缺氧时只有肺小动脉平滑肌内其表达量增加;主动脉、肺动脉主干平滑肌内PCNA的表达量无明显差别。结论在缺氧性肺动脉高压的发生过程中,VEGF在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达量具有差异性,提示其可能在肺动脉高压形成过程中起重要作用。     

心房钠尿肽对肺泡Ⅱ型上皮细胞的保护作用

目的：探讨心房钠尿肽(ANP)对脂多糖（LPS）引起肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)损伤的治疗作用。方法：分离培养AT-Ⅱ，以LPS复制大鼠AT-Ⅱ损伤模型，分别给予10-6、10-7、10-8 mol/L等不同剂量的ANP进行治疗，通过观察4 h、12 h、24 h等时点细胞培养上清液中LDH、MDA、AKP、总磷脂(TPL)水平及细胞培养上清液的表面张力(ST)变化，研究ANP对LPS引起的AT-Ⅱ损伤的治疗作用。结果：在不同剂量、不同时点条件下，各ANP组细胞培养上清液LDH、AKP活性及MDA含量均明显低于LPS组，呈明显的剂量依赖性和时间依赖性，以高剂量组(10-6)和12 h时点疗效最佳。以12 h时点为例，细胞培养上清液中AKP活性为：control(43.5±10.4) U/L,LPS (98.1±16.4) U/L,LPS+ANP(10-6) (46.4±10.5) U/L，LPS+ANP(10-7) (60.7±9.5) U/L，LPS+ANP(10-8) (91.3±13.9) U/L。LPS组细胞培养上清液中TPL含量明显低于对照组、ST水平明显高于对照组，不同剂量、不同时点的各ANP组细胞培养上清液中TPL含量均不同程度地高于对应的LPS组，各ANP组细胞培养上清液中的ST水平均低于对应的LPS组。结论：ANP可显著减轻LPS引起的AT-Ⅱ损伤, 促进肺表面活性物质(PS)的合成、分泌，且该作用有明显的剂量依赖性和时间依赖性。     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织P53表达增高

目的观察P53在低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达。方法采用减压低氧方法复制大鼠慢性低氧性肺动脉高压模型;取肺组织,常规SABC免疫组化法染色和Hoechst染色,观察P53表达的变化及细胞凋亡变化。结果P53在慢性肺动脉高压大鼠肺小动脉壁中有少量表达,其中低氧3周组>低氧2周组>正常组。Hoechst染色显示肺组织凋亡细胞增加,其变化趋势与P53的表达变化趋势相同。结论在慢性低氧性肺动脉高压形成过程中,肺小动脉壁发生了增殖和凋亡,程度随低氧时间的延长而增加,同时P53表达增多,提示P53参与了慢性低氧性肺动脉高压肺小血管重建的调控。     

胰岛素减轻脂多糖致小鼠急性肺损伤

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是多种凶素引起的以急性肺损伤(ALI)为特征的疾病,目前尚缺乏特异有效的治疗方法.胰岛素是人体内调节糖、蛋白质、脂肪代谢和贮存的激素,且可以抑制炎性介质与氧自由基的释放.     

血管紧张素Ⅱ在正常和高血压条件下上调心肌细胞中基质金属酶蛋白-2和组织金属酶蛋白抑制物-1的表达

目的：研究在正常和高血压条件下血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对心肌细胞中基质金属酶蛋白-2（MMP-2）和组织金属酶蛋白抑制物-1（TIMP-1）表达的影响,观察其对氧化应激的影响。方法：AngⅡ预处理体外培养的原代心肌细胞,利用试剂盒检测细胞中丙二醛水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和超氧化物歧化酶（SOD）活力的变化;同时利用实时定量PCR（qRT—PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测细胞中MMP-2和TIMP-1基因信使核糖核苷酸（mRNA）和蛋白的表达变化。建立大鼠高血压模型,检测模型大鼠及缬沙坦治疗大鼠心肌组织中丙二醛、GPx和SOD酶活力的变化,并运用qRT—PCR和Western blot方法分析心肌组织中MMP-2和吖MP-1基因mRNA和蛋白的表达变化。结果：AngⅡ预处理能显著提高心肌细胞中氧化应激水平,同时AngⅡ预处理上调心肌细胞中MMP-2和T1MP-1基因表达。在高血压大鼠中,心肌组织的氧化应激水平明显高于假手术组,而经AngⅡ受体阻断剂缬沙坦处理后氧化应激水平则下降。并且,缬沙坦治疗也能降低高血压大鼠心肌组织中MMP-2和TIMP-1基因表达。结论：AngⅡ可同时上调氧化应激并调控MMP-2基因和TIMP-1基因在心肌细胞中的表达,但其具体机制还不完全清楚,仍需进一步探讨。