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131.
目的?探索脾虚状态下外泌体促肝癌转移的机制。方法?使用随机数字表法将C57BL/6小鼠随机分为4组:正常对照组、脾虚组、肝癌组、脾虚肝癌组,每组10只,正常对照组腹腔注射生理盐水,脾虚组腹腔注射利血平,肝癌组采用肝癌原位移植术,脾虚肝癌组采用腹腔注射利血平加肝癌原位移植术。利血平腹腔注射共持续21天,确定脾虚模型建立后再行肝癌原位移植术,术后14天取材。基于模型血浆提取小鼠外泌体并使用电镜、颗粒分析及纳米流式鉴定。以外泌体为变量使用划痕实验、Transwell迁移与侵袭实验、尾静脉肺转移裸鼠模型验证脾虚状态下外泌体促肝癌转移的表型。随后对肝癌组和脾虚肝癌组外泌体进行miRNA测序鉴定差异miRNAs,并分析miRNAs靶向的mRNAs的通路富集结果。结果?与肝癌组比较,脾虚肝癌组小鼠的脾虚积分更高(P<0.0001)及肿瘤体积更大。电镜、颗粒分析及纳米流式结果成功鉴定外泌体。划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验结果表明脾虚肝癌组外泌体在体外促进了肝癌细胞的转移能力(P<0.0001)。尾静脉肺转移裸鼠模型的活体成像结果表明脾虚肝癌组外泌体在体内促进了肝癌细胞的转移能力。外泌体miRNA测序结果表明15个miRNAs在脾虚肝癌组差异表达,其中9个上调(miR-183-3p,miR-1247-5p,miR-543-3p,miR-495-3p,miR-466i-5p,miR-540-5p,miR-125b-5p,miR-214-3p,miR-499-5p),6个下调(miR-6516-5p,miR-450a-3p,let-7g-3p,miR-103-5p,miR-5129-3p,miR-301b-3p)。差异表达miRNAs靶向的mRNAs富集的通路与转移相关(Wnt signaling pathway)。结论?脾虚内环境来源的状态下外泌体通过miRNA-mRNA轴促进肝癌转移。 相似文献