转染和干扰Runx2基因对K7M2细胞的影响

 目的探讨干扰和转染Runx2基因后对K7M2骨肉瘤细胞体外生物学活性的影响。方法分别将阴性对照质粒、携带Runx2和siRNA Runx2的质粒转染到K7M2细胞中。应用Western blot检测转染和干扰Runx2基因对其蛋白表达的影响,并检测细胞体外的增殖能力(MTT )、侵袭性、迁移性和黏附性的变化,并应用流式细胞仪（FCM）检测相应细胞的凋亡率和细胞周期分布的变化。结果与空白对照组比,转染Runx2和siRunx2组的K7M2细胞中Runx2蛋白表达分别明显增强和减弱,而阴性对照质粒组没有明显改变。转染siRunx2组的细胞,MTT结果显示增殖能力明显下降,迁移性、侵袭性和增殖指数（PI）也明显下降,与空白对照组比差异有统计学意义（P<0.05）,黏附性和凋亡率却没有明显变化。转染Runx2组K7M2的细胞增殖能力、迁移性、侵袭性和PI明显增高,与空白对照组比差异有统计学意义（P<0.05）,黏附性和凋亡率没有明显变化。阴性对照组和空白对照组比上述指标没有明显改变。结论Runx2可以促进K7M2细胞增殖,增强细胞的侵袭、迁移能力,其机制可能是和改变细胞周期的分布,使细胞更快的进入G₂/M期有关。     

强肝胶囊联合核苷(酸)类抗病毒药物对乙型肝炎抗肝纤维化患者的疗效

目的 观察比较核苷(酸)类抗病毒药物单用和联合强肝胶囊两种方法对乙型肝炎抗肝纤维化的疗效.方法 将66例乙型肝炎并有肝纤维化的患者随机分为两组,35例单用组单独接受核苷(酸)类似物抗病毒治疗,31例联合组接受药物抗病毒治疗的同时联合强肝胶囊治疗.于治疗前后分别检测肝功能,HBV DNA,血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、层黏蛋白(LN)等.结果 两组在肝功能改善和病毒载量变化无显著差异,肝纤维化血清学指标都得到了一定程度的改善,且联合组52 w肝纤维化血清学指标改善较单独抗病毒组改善更显著(P＜0.05).结论 强肝胶囊有可以改善肝纤维化的作用,联合抗病毒药物可以明显减轻肝纤维化程度.     

鼠双微粒体-2基因沉默对人肝癌HepG2细胞移植瘤生长的抑制作用

目的 构建鼠双微粒体-2基因(MDM2)靶向小分子干扰RNA (siRNA)质粒,研究其对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其在肝癌基因治疗中的可行性.方法 构建MDM2的siRNA真核表达载体pSilencer-siRNA-MDM2 (siMDM2),建立裸鼠荷瘤模型,分别给予阴性对照质粒和siMDM2质粒处理.监测肿瘤生长变化,RT-PCR、Western blot方法检测MDM2及p53 mRNA和蛋白的表达变化.正态分布数据的组间比较用单因素方差分析及LSD检验.结果 裸鼠体内实验结果显示,转染siMDM2-1和siMDM2-2组与对照组相比,肿瘤增长受到明显抑制,抑瘤率分别为60.6％和54.6％.RT-PCR和Westem blot结果示MDM2的mRNA和蛋白质表达下调,而p53的mRNA和蛋白质表达上调.与空白组比较,转染siMDM2-1和siMDM2-2组的MDM2mRNA表达分别下调62.8％和61.5％,MDM2蛋白表达分别下调60.7％和59.5％;p53 mRNA表达分别上调47.1％和45.6％,p53蛋白表达分别上调45.9％和44.3％,差异均具有统计学意义(F值分别为75.099、47.860、17.676和235.770,P值均＜0.01).结论 siRNA沉默MDM2基因能抑制人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,可能与其在体内有效下调MDM2和上调p53的mRNA及蛋白质表达有关.     

大豆异黄酮对培养大鼠心肌细胞动作电位的影响

观察大豆异黄酮(soybean isotlavone，S．I．)对培养的Wistar大鼠心室肌细胞自发性搏动及动作电位的影响。将0．78—6．25μg／ml S．I分别加入到培养4—8d的Wistar大鼠心室肌细胞的培养瓶中，依次记录加药前、后心肌细胞群落的自发性搏动及动作电位参数的变化。结果：大豆异黄酮可剂量依赖性的抑制培养的大鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位参数，该作用可被Ca^2 80μg／ml与肾上腺素10μg／ml所反转。结论：大豆异黄酮具有钙通道阻滞作用。     

RNA干扰沉默mdm2治疗骨肉瘤的实验研究

目的 观察靶向mdm2的小干扰RNA(siRNA)对骨肉瘤生长的影响.方法 构建PGCsilencerTM-mdm2 siRNA,转染至骨肉瘤细胞U2OS.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测siRNA对mdm2的沉默效果,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测siRNA对细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测诱导细胞凋亡的情况.通过裸鼠移植瘤模型观察siRNA对骨肉瘤体内治疗效果.结果 成功构建simdm2质粒.在转染simdm2的U20S细胞中,simdm2-1组和simdm2-2组的mdm2 mRNA表达量分别下降至空白对照组的35.6%和42.1%(P<0.05),mdm2蛋白表达分别降低至空白对照组的34.0%和47.2%(P<0.05),而且增殖能力显著降低,发生明显凋亡,simdm2-1组和simdm2-2组的细胞凋亡率分别为29.9%和20.9%.阴性对照组和空白对照组的差异无统计学意义.裸鼠移植瘤实验结果显示,simdm2转染组的肿瘤受到抑制,而且mdm2基因和蛋白表达明显下调.结论 simdm2能有效的抑制骨肉瘤生长,并抑制mdm2基因和蛋白的表达.     

siRNA抑制人膀胱癌T24细胞株VEGF 的表达及细胞增殖

目的探讨siRNA（small interfering RNA）对T24人膀胱癌细胞株VEGF基因表达的抑制及癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法体外构建两个针对VEGF基因的siVEGF的重组质粒，转染124细胞；应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定VEGF基因的表达，并用MTT法和流式细胞仪检测siVEGF对细胞的增殖抑制率和凋亡的影响。结果构建的两个siVEGF重组质粒分别使VEGF基因表达下调到空白组的21．02％和30．13％；control siRNA组的VEGF基因表达与空白组无明显差异。转染siVEGF后T24细胞生长受到抑制，并发生细胞凋亡，凋亡率分别为45．5％和35．9％。结论siVEGF可以有效抑制124细胞株中VEGF的表达，从而抑制细胞增殖，并诱导细胞凋亡。     

siRNA抑制人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达及细胞增殖

 目的 研究siRNA MDM2对人前列腺癌细胞PC3的MDM2表达和细胞增殖的作用。 方法 构建PGCsilencer^TM MDM2 siRNA,并转染入PC3细胞,分别用RT-PCR和 Western blot检测siMDM2对PC3细胞MDM2基因和蛋白表达的抑制作用;用MTT法检测siMDM2对PC3增殖抑制的作用,用流式细胞术检测siMDM2对PC3细胞凋亡的影响。 结果 PT-PCR和Western blot结果显示siMDM2能显著抑制PC3细胞MDM2基因和蛋白的表达,抑制率最高可达65%;MTT和流式细胞术结果证明siMDM2能显著抑制PC3细胞增殖并诱导细胞凋亡。 结论 siMDM2能特异有效地抑制MDM2在PC3中的表达,并抑制PC3细胞增殖,促进其凋亡。