hBMP2转基因载体的构建及其在兔骨髓基质细胞中的表达

腹泻是离乳婴猴常见病,死亡率极高的病。作者多年的统计结果表明,死亡婴猴中58．3％死于腹泻。过去腹泻早期也使用过一些药物进行治疗, 但效果不太理想。最近,作者用胃肠粘膜保护剂联合思密达,口服补液盐辅助治疗婴猴腹泻,取得良好效果。 1 材料与方法 1．1 动物的选择选取离乳后3-60 d(4月龄离乳)的腹泻婴猴作试验观察,发病时间不超过24 h。全部婴猴半屏     

聚合酶链反应的定量检测研究现状

随着分子生物学的发展与进步,聚合酶链反应(PCR)技术已成为该领域研究中不可缺少的工具。近年来,PCR特异性核酸定量的研究有了很大发展。 以往的核酸定量(QPCR)技术包括Southern、Northern和印迹杂交,因敏感性低无法检出基因剂量的微小变异,而PCR技术能够克服以上方法学的缺点。用PCR分析极微量的DNA,无论以何种标本为模板均可扩增并定量     

组织胺与西米替丁对肠道细菌移位的影响

为了观察组织胺与西米替丁对肠道细菌移位的影响,本实验采用１×１０－４Ｍ的组织胺生理盐水和０５％的西米替丁生理盐水肠道的灌注出血—感染细菌移位模型大鼠,取肠系膜淋巴结、肝组织作细菌培养。结果显示,本实验失血感染细菌移位动物模型可靠,模拟手术对照组无细菌移位;失血—感染组１００％出现细菌移位;组织胺治疗组细菌移位率明显低于失血感染组,该组在肝、淋巴结组织中的平均组织含菌量明显低于失血感染组;西米替丁治疗组细菌移位率明显高于组织胺组,该组在肝、淋巴结组织中的平均组织含菌量大约是组织胺治疗组的１０倍。上述结果提示,小剂量肠道组织胺有抑制肠道细菌移位的作用,西米替丁有增加肠道细菌移位的作用。     

细菌生物膜及其相关研究进展

细菌生物膜(bacterial biofilm)也称生物膜,是单一或多种细菌为适应自然环境而形成的微菌落聚集物,其主要成分为多糖蛋白复合物,将细菌自身包裹其中,使细菌相互黏连产生特定结构的细菌复合体,形如膜状并不可逆地附着于病灶的表面或导管内[1]。这是细菌为适应环境维持自身生命所     

幽门螺杆菌感染的检测

幽门螺杆菌 (ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,简称Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ或Ｈｐ)因其致病性及作为明确的致癌因素引起医学上的广泛关注。它在引起胃和十二指肠各种炎症 ,以致癌变中起到不容忽视的作用。胃内螺旋状微生物的发现可追溯到 1893年 ,Ｂｉｚｚｏｚｅｒｏ首次报道在狗胃腺内观察到螺旋状微生物。 1983年Ｗａｒｒｅｎ[1]成功地从胃活检标本中分离到幽门弯曲菌。 1989年专家建议成立独立螺杆菌属 ,并在 1990年悉尼大会上获得承认 ,正式定名为幽门螺杆菌 (Ｈｐ)。 1994年ＷＨＯ将它确定为第一类致癌因子。其生物学性状、感染和致病…     

携带低氧诱导因子1αmu 和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达

背景:低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导成熟的血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合,但其真核表达载体的构建及表达却少见报道.目的:实验拟构建携带低氧诱导因子1αmu(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)目的蛋白和人源化海肾绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein, hrGFP)的双基因真核表达载体,并将其转染HEK293A细胞,观测其在细胞中的表达.方法:利用PCR技术定点突变目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人HIF1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸以及去掉其终止密码子,之后在基因序列前后添加新的酶切位点Not Ⅰ和PuvⅠ,酶切、测序检测突变情况,将正确突变的HIF1αmu定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中.经测序鉴定、Pme Ⅰ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,通过hrGFP基因荧光表达检测转染情况.结果与结论:经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸,终止密码子成功去除.经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功.荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达证实通过Lipofectamine 2000途径可使得重组腺病毒载体成功转染HEK293A细胞.     

携带低氧诱导因子1α~（mu）和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达

背景：低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导成熟的血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合,但其真核表达载体的构建及表达却少见报道。目的：实验拟构建携带低氧诱导因子1αmu（hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α）目的蛋白和人源化海肾绿色荧光蛋白（human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP）的双基因真核表达载体,并将其转染HEK293A细胞,观测其在细胞中的表达。方法：利用PCR技术定点突变目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人HIF1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸以及去掉其终止密码子,之后在基因序列前后添加新的酶切位点NotⅠ和PvuⅠ,酶切、测序检测突变情况,将正确突变的HIF1αmu定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中。经测序鉴定、PmeⅠ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,通过hrGFP基因荧光表达检测转染情况。结果与结论：经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸,终止密码子成功去除。经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功。荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达证实通过Lipofectamine 2000途径可使得重组腺病毒载体成功转染HEK293A细胞。     

肺炎克雷伯菌药敏分析及其超广谱β内酰胺酶基因分型研究

目的 对北京大学人民医院分离的肺炎克雷伯菌进行药敏分析及ESBL型别测定,为控制院内肺炎克雷伯菌感染提供依据.方法 收集北京大学人民医院2001-2007年分离的1 205株肺炎克雷伯菌,采用Vitek-2全自动药敏鉴定分析仪对菌株进行鉴定及药敏试验,采用WHONET 5.3软件进行药敏结果分析,PCR法检测ESBL基因型别,比较分析各种药物敏感率和基因型比率特征和差异.结果 2001-2007年肺炎克雷伯菌中产ESBL比例逐年增加:2001年为15.8% (40/253),2002年为20.9% (53/253),2003年为32.8% (42/128),2004年为32.8% (45/137),2005年为36.6% (60/164),2006年为45.3% (68/150),2007年为45.6% (73/160).ESBL阳性菌株中SHV基因检出比例最大,2007年为83.6%(61/73).ESBL阳性菌株中CTX-M基因检出率逐年增加,2007年为54.8%(40/73).携带单一SHV基因菌株与同时携带SHV、CTX-M基因菌株对头孢他啶、头孢曲松及头孢噻肟的耐药率差异有统计学意义(χ2值分别为20.26、32.03、29.65,P均＜0.05);携带单一SHV基因菌株与同时携带SHV、TEM基因菌株对头孢他啶、头孢曲松及头孢噻肟的耐药率差异有统计学意义 (χ2值分别为7.01、9.93、11.01,P均＜0.05);携带单一SHV基因菌株与同时携带SHV、OXA基因菌株对头孢他啶、头孢曲松及头孢噻肟的耐药率有统计学差异 (χ2值分别为14.11、17.58、11.54,P均＜0.05);携带CTX-M基因菌株与同时携带SHV、CTX-M基因菌株对头孢他啶耐药率差异有统计学意义(χ2=23.61,P＜0.05);携带TEM基因菌株与同时携带SHV、TEM基因菌株对头孢他啶耐药率差异有统计学意义(P=0.01).结论 肺炎克雷伯菌产ESBL逐年增加,以SHV型为主,携带CTX-M型ESBL基因菌株逐年增多.

Abstract：

Objective To analyze the antibiotic susceptibility, ESBL genotype of clinical Klebsiella pneumoniae strains isolated from People′s hospital and facilitate the control of resistance spread. Methods Identification and antibiotic susceptibility tests of 1 205 strains from 2001 to 2007 were done by VITEK-2 system.The antibiotic susceptibility results were analyzed by whonet5.3.The ESBL gene was detected by PCR and the Chi-square test was used for statistical analysis.Results The rate of ESBL-producing strains in klebsiella pneumoniae has increased from 2001 to 2007[18.8% (40/213) in 2001, 20.9% (53/253) in 2002, 32.8% (42/128) in 2003, 33.6% (45/137) in 2004, 36.6% (60/164) in 2005, 45.3% (68/150) in 2006 and 45.6% (73/160) in 2007].The SHV gene was the most dominant in ESBL genotypes.There were 83.3% (50/60) ESBL strains in 2005 with SHV gene, 82.3%(56/68) in 2006 and 83.6%(61/73) in 2007.The rated of strains with CTX-M gene were increasing.There were 26.7%(16/60) ESBL strains with CTX-M gene in 2005, 36.7%(25/68) in 2006 and 54.8%(40/73) in 2007.The isolates with more than one type of ESBL gene were increasing.There were 45%(27/60) ESBL strains in 2005 with two types of ESBL gene, and no one had more than two types of ESBL gene in that year.There were 47.9%(35/73) ESBL strains in 2007 with two types of ESBL gene.In 2007 there were 9.6%(7/73) and 2.7%(2/73) ESBL strains with three types and four types of ESBL gene respectively.There was a statistical difference between the antibiotic resistance rates of cefotaxime, ceftriaxone and ceftazidime in SHV-gene-phore strains (χ2=13.22, P＜0.01).The strains with SHV gene were more resistant to cefotaxime than ceftriaxone and ceftazidime.There also was a statistical difference of the antibiotic resistance rate of cefotaxime, ceftriaxone and ceftazidime between strains with TEM gene (χ2=9.91, P＜0.01) and CTX-M gene (χ2=34.84, P＜0.01) respectively.None of the strains with CTX-M gene was sensitive to cefotaxime, and they were more resistant to ceftriaxone than ceftazidime.The strains with TEM gene were more resistant to cefotaxime than ceftriaxone and ceftazidime.There were statistical differences of the antibiotic resistance rate to cefotaxime (χ2=29.65, P＜0.01), ceftriaxone (χ2=20.26, P＜0.01) and ceftazidime (χ2=20.26, P＜0.01) between the strains with SHV gene only and strains with SHV and CTX-M gene concurrently.There were also statistical differences of the antibiotic resistance rates to cefotaxime (χ2=11.01, P＜0.01), ceftriaxone (χ2=9.93, P＜0.01) and ceftazidime (χ2=7.01, P＜0.01) between the strains with SHV gene only and strains with SHV and TEM gene concurrently.The antibiotic resistance rates to cefotaxime (χ2=11.54, P＜0.01), ceftriaxone (χ2=17.58, P＜0.01) and ceftazidime (χ2=14.11, P＜0.01) were statistically different between the strains with SHV gene only and strains with SHV and OXA gene concurrently.The antibiotic resistance rates to ceftazidime (χ2=23.61, P＜0.01) were statistically different between the strains with CTX-M gene only and strains with SHV and CTX-M gene concurrently. There was no statistical difference in antibiotic resistance rates to cefotaxime (χ2=3.55, P＜0.01) and ceftriaxone (χ2=3.35, P＜0.01) between the strains with CTX-M gene only and strains with SHV and CTX-M gene concurrently. The antibiotic resistance rates to ceftazidime (P=0.01) were statistically different between the strains with only TEM gene and strains with SHV and TEM gene concurrently, and there was no statistical difference of the antibiotic resistance rates to cefotaxime (P=0.29) and ceftriaxone (P=0.26) between the strains with TEM gene only and strains with SHV and TEM gene concurrently. ConclusionsThe producing rate of ESBL is increasing year after year and the SHV type of ESBL is the dominant one.Strains with more than one type of ESBL gene are increasing.The antibiotic resistance rates to cefotaxime, ceftriaxone and ceftazidime are statistically different between strains with same ESBL genotype.     

加强传染性疾病监测刻不容缓

近年发生多起严重威胁人类健康的传染病流行，这是我们医学工作者共同面对的巨大挑战。由于全球人口增多、国际交流日益频繁、全球生态改变、贫穷以及公共健康监督的薄弱，使得新发传染病在任何时间、任何地方均有可能出现。本文着重阐述了我国传染病在实验室诊断检测中存在的一些问题，强调了监测的重要性，并提出相应建议。如何提高现有传染病的检验、防治水平，仍是医务工作者应该持续不懈努力去做的事。     

铜绿假单胞菌整合子基因盒的相关研究

目的对北京大学人民医院不同年度临床分离的铜绿假单胞菌进行整合子基因盒检测,分析其变化趋势及其与细菌耐药性的相关性。方法应用PCR对2006—2008年临床分离的420株铜绿假单胞菌进行整合子检测,对阳性PCR产物采用HinfⅠ内切酶作限制片段多态性(RFLP)分析进行整合子分类,并对整合子阳性株进行耐药基因盒的扩增与测序。结果 420株铜绿假单胞菌中116株(27.6%)检出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。对2006年及2008年的整合子阳性菌株可变区基因盒扩增得到7种不同的基因盒图谱,片段大小在710～2526bp,基因盒为介导氨基糖苷类抗生素耐药的aadB、aadA族和介导甲氧苄啶耐药的dfrA1和dhfrXVB。结论该院铜绿假单胞菌中整合子检出率随年度呈上升趋势,携带的基因盒与其耐药表型有相关性。