SIGIRR对H292细胞Toll样受体4、5、9致炎作用的影响及机制研究

目的 观察SIGIRR(sigh Ig IL-IR-related molecule)对人气道上皮细胞株H292中Toll样受体(TLR)4、5、9致炎作用的影响,并初步了解其作用机制.方法 运用脂质体转染的方法,将SIGIRR-EGFP融和蛋白真核表达载体稳定转染H292细胞,通过免疫细胞化学技术观察H292细胞中SIGIRR的过表达情况;经LPS、Flagellin、CpG DNA 2006处理后,ELISA检测重组质粒(SIGIRR-EGFP)、空质粒(pEGFP-N1)转染以及未转染的H292细胞分泌致炎因子TNF-a和IL-6水平;通过免疫共沉淀的方法了解SIGIRR与MyD88之间的关系.结果 激光共聚焦显微镜显示重组融合蛋白SIGIRR-EGFP与H292内源SIGIRR共定位于细胞膜上;经LPS、Flagellin、CpG DNA 2006刺激后,重组质粒转染的H292细胞分泌的IL-6和TNF-a水平显著低于空质粒转染和未转染的H292细胞(P＜0.01);免疫共沉淀提示H292细胞受到刺激后,SIGIRR与MyD88有较强相互作用,可与TLR4、5、9竞争结合MyD88分子.结论 SIGIRR对H292细胞TLR4、5、9致炎通路的负性调节作用,可能是通过减少MyD88分子与TLR4、5、9的结合,从而削弱了炎症信号的细胞内转导.     

医学影像学实践教学进展

本文主要阐述医学影像学实践教学重要性、特点及演变,总结传统医学影像学实践教学存在的弊端,介绍现代医学影像学实践教学信息化特征,列举国内外不同院校开展医学影像学实践教学的一些具体做法,指出只有充分利用电子信息学技术构建医学影像学实践教学平台,才能真正让学员掌握临床实践技能,满足医学影像学人才培养的岗位任职需求。     

肽抗生素hPAB-β制备工艺中基因工程菌的改建

目的 通过重新构建新的3拷贝串联体基因工程菌phPAB-β(3)/M15,在原有肽抗生素hPAB-β制备工艺路线基础上,使发酵后目的肽的最终产量得到提高.方法 重新构建含有重组质粒pQE31-hPAB-β(3)的基因工程菌M15,然后筛选出能够稳定而且高效表达目标蛋白的最佳工程菌株,进行传代稳定性分析,并明确新建工程菌中目标融合蛋白的表达形式和亲和层析的效果,最后通过相同条件下,在逐步放大的发酵规模(1 L摇瓶,3.7 L和10 L发酵罐),与以往的3拷贝串联体工程菌phPAB-β(3)/JM109进行对比研究(湿菌产量、目标蛋白表达率),同时观察新建工程菌在10 L发酵中目标蛋白的表达和遗传稳定性.结果 筛选出的最佳工程菌株的目标蛋白的表达效率为34.8%,经LB培养传代10次后,点种LB(AMP、KAN)平板,生长率为100%,质粒保存率达100%.在1 L摇瓶,3.7 L和10 L发酵罐的发酵规模下,phPAB-β(3)/M15与phPAB-β(3)/JM109一样,目标融合蛋白都以包涵体形式表达,亲和层析效果相近,目标蛋白表达率无显著性差异(P＞0.05),但发酵产量大于后者,有非常显著性差异(P＜0.01).且新建工程菌在10 L发酵中发酵产量达到55.15g/L,诱导表达后的第5小时,蛋白表达达到高峰,蛋白表达率为30.2%,重组质粒保存率为100%.结论 新构 建工程菌phPAB-β(3)/M15比起原来基因工程菌phPAB-β(3)/JM109,是更为理想且利于肽抗生素hPAB-β工业生产的基因工程菌.     

手术分级管理的做法和体会

外科手术作为一种侵入性有创的治疗手段,具有高风险性、高技术要求和群体协作实施的特点[1]。合理界定外科专科的手术范围和科学认定医师的手术资格,实施外科手术技术准入制度和分级管理,促进外科专科医师手术操作技能的进步和技术特长的发展,能有效减少外科医师的手术操作失误,降低外科手术风险和保证医疗安全。本文结合医院实际情况从指导思想、管理机构、资质要求、准入标准、准入程序、监督管理等方面,介绍外科手术技术准入制度和分级管理在医院的实施过程,重点探讨在此过程中遇到的一些实际难点和解决方法,并为这项制度的持续改进提供一些思路。     

医学检验本科生知识产权案例教学实践

目前,部分医学检验本科生在校学习期间已参与科研创新实践,但科研成果知识产权保护意识淡薄。笔者采用"基于案例学习"(CBL)的教学法,对医学检验本科生进行知识产权和文献数据库检索分析、知识产权基础理论课程、知识产权申报培训等内容的教学,并通过理论考核、申报实践等评价教学效果,旨在建立适合医学检验本科生的知识产权教学模式。     

承载分子PaP3.30在小分子活性肽融合表达中的应用

目的：筛选并克隆—个承载分子，研究其在肽抗生素及其他小分子活性肽融合表达中的应用。方法：根据肽抗生素为小分子活性肽，通常带正电荷的特性，从绿脓杆菌噬菌体(PaP3)基因组中筛选一承载分子，构建其与肽抗生素hPAB-β的融合蛋白表达载体，确认该承载分子能在大肠杆菌中融合表达肽抗生素后，再选择一组不同来源、不同大小、不同等电点的小肽分子作为研究对象，分别构建它们与承载分子的融合蛋白表达载体，转化大肠杆菌进行表达。根据表达情况，分析所选择的承载分子融合表达生物活性小肽的能力。结果：从PaP3基因组中成功地筛选到ORF-30编码的162个氨基酸组成的蛋白作为承载分子(PaP3．30)；构建该承载分子与肽抗生素hPAW-β的融合蛋白表达质粒pQE-PaP30-hPAB-β，在大肠杆菌中表达的融合蛋白占细菌总蛋白的30％以上；对所选择的不同来源(人、蜜蜂、爪蟾、大肠杆菌)、不同大小(相对分子质量为700—5300)、不同等电点(pⅠ2．9—12)的六种小肽分子PaP3．30，均能实现其在大肠杆菌中高效融合表达，表达量为细菌总蛋白的35％-44％。结论：所筛选的承载分子PaP3．30具有很强的融合表达小分子活性肽的能力，为建立高效表达和制备活性小肽的技术平台创造了条件。     

倒扣草的生药鉴定

目的:对倒扣草进行生药鉴定。方法:采用显微鉴别、薄层色谱鉴别法和高效液相色谱法对倒扣草进行定性和定量鉴定。结果:倒扣草的形状特征和组织构造特征明显,并具有较高含量的齐墩果酸和蜕皮甾酮。结论:其结果可为倒扣草的鉴别和质量标准的制定提供一些参考依据。     

SIGIRR对CpG诱导的人气道H292细胞TLR9表达的影响

目的研究SIGIRR对未甲基化的胞嘧啶磷酸鸟苷（CpG）诱导的人气道上皮细胞株H292细胞钟形受体9（TLR9）表达的影响。方法本实验对象包括6组,分别为H292组、空质粒转染组（eH292组）、SIGIRR转染组（SH292组）,以及给予CpG刺激后的H292组（CH292组）、eH292组（CeH292组）和SH292组（CsH292组）。构建SIGIRR-EGFP融合蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292经CpG刺激后,Western blot检测人气道H292细胞TLR9的表达,ELISA检测人气道上皮细胞H292分泌IL-6的水平。结果CH292组、CeH292组和CsH292组细胞较H292组、eH292组、sH292组细胞TLR9蛋白表达量增加（P均〈0．01）;CSH292组细胞产生的IL-6（3．41±0．08pg／ml）少于CH292组（4．27±0．07pg／ml）及CeH292组（5．04±0．05pg／ml）（P均〈0．05）、而TLR9蛋白表达量差异无统计学意义。结论CpG可诱导Hm细胞表达TLR9蛋白,SIGIRR上调表达可抑制CpG诱导的H292细胞IL-6的产生,对TLR9表达无影响,