Kindlin-2通过mTOR和Hippo信号通路调节小鼠子宫内膜发育

目的：探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制。方法：利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2^flox/flox小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响。在子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中分别进行高表达和敲低Kindlin-2的实验,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路的激活变化,并且提取特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(实验组,基因型为Cdh16-Cre; Kindlin-2^flox/flox)和未特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(对照组,基因型为Kindlin-2^flox/flox)子宫蛋白,每组包含6～8只小鼠,重复3次独立实验,检测mTOR信号通路和Hippo信号通路关键分子的蛋白水平。结果：成功构建了子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,通过鼠尾聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PC...     

粘附结构蛋白migfilin基因N末端的克隆和抗体制备

目的 克隆migfilin-N末端基因并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物并进行多克隆抗体制备,为研究migfilin与大肠癌的关系奠定基础.方法 根据人migfilin全长cDNA系列,设计PCR引物,以人大肠癌cDNA文库为模板克隆migfilin-N末端基凶,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,经EcoRI/XhoI双酶切鉴定后,进行DNA序列测定.GST-migfilin-N融合蛋白在硫代半乳糖苷诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-migfilin-N融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体.并用纯化的抗migfilin多克隆抗体在不同的细胞株中用Western blotting检测migfilin的表达.结果 成功克隆了migfilin-N端基因片段,表达并纯化了GST-migfilin-N融合蛋白,制备了migfilin特异性抗体.Western blotting检测migfilin在不同细胞株中的表达,结果显示migfilin在肺癌及大肠癌细胞株中高表达.结论 migfilin特异性抗体制备成功,为深入探讨migfilin在大肠癌中的作用奠定了基础.     

正反义hTGF－β_1基因转染对大肠癌HT－29细胞体外生物学行为的影响

正反义ｈＴＧＦ－β＿１基因转染对大肠癌ＨＴ－２９细胞体外生物学行为的影响姜泊，周殿元，孙正基，张宏权应用基因重组技术构建了人转化生长因子（ｈＴＧＦ－β１）基因重组真核表达载体，并将其导入ＨＴ－２９细胞株，探讨对大肠癌细胞体外生物学行为的影响。材料与方...     

灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对乳腺癌血管生成调节因子的作用

目的探讨灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对人源高恶性乳腺癌血管生成调节因子的作用。方法不同剂量的灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油分别刺激体外培养的人源高恶性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231细胞制作的荷廇小鼠,Western blotting检测表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达变化,Real-time PCR检测肿瘤血管生成相关因子EGFR、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血小板反应素-1(TSP-1)、血小板衍生因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)转录水平的基因表达变化。结果灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均可在体内和体外抑制人源高恶性乳腺癌细胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表达,且有剂量依赖性;均可在体内和体外抑制VEGF RNA表达,增强血管生成抑制因子TSP-1 RNA表达;灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。结论灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均有抑制肿瘤血管生成因子表达和促进血管生成抑制因子表达的作用,其中灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。     

电击法转染COS-7细胞条件初探

电击法转染是近几年发展的1种新的细胞转染方法,它比经典的磷酸钙共沉淀法简便,快速,对质粒DNA 的纯度要求不高,常常能获得高的转染效率,但转染条件因细胞种类和电击仪而异。COS-7细胞是一个很好的暂时性表达系统,可进行多种基因的暂时性表达研究,尤其有利于基因改构时进行表达型筛选突变体;因而有必要建立适合 COS-7细胞的电击转染条件。本实验以尿激酶原(pro-UK)cDNA 为模型探索     

基底动脉尖综合征2例报告

基底动脉尖综合征（TOBS）是脑梗死的一种特殊类型。临床上较少见,且极易误诊误治,本文通过对2例基底动脉尖综合征患者的诊断和治疗过程的回顾,分析,发展早期MRI检查可明显提高该病的早期诊断率,从而避免误诊误治。     

PAK1基因对大肠癌细胞体外侵袭能力的影响

目的 研究p21-activated kinase-1(PAK1)基因对大肠癌细胞系体外侵袭能力的影响.方法 把重组p21活化蛋白激酶1质粒用脂质体转染大肠癌SW480细胞,同时设立空白对照组和空载体对照组.于转染后48 h采用免疫印迹方法检测PAK1的蛋白表达水平,Boyden小室模型检测大肠癌细胞SW480在转染重组PAK1基因质粒后侵袭能力的变化.结果 SW480细胞转染p21活化蛋白激酶1重组质粒后,与空白对照和空载体对照相比,PAK1蛋白水平明显增加,细胞的体外侵袭能力增强.结论 转染pPAK1重组质粒能够有效上调PAK1基因,增强大肠癌细胞系体外侵袭潜能,提示PAK1基因高表达可能与大肠癌细胞的侵袭和转移等生物学行为相关.

Abstract：

Objective To observe the effect of p21-activated kinase-1(PAK1)gene transfection on the invasiveness of human colorectal carcinoma SW480 cells in vitro.Methods SW480 cells in routine culture were transfected with the recombinant plasmid EGFP-C1/PAK1 via Lipofectamine~(TM) 2000.The expression of PAK1 protein in SW480 cells was detected using Western blotting,and the changes of the invasiveness of SW480 cells were evaluated using Boyden chamber invasion assay.Results Forty-eight hours after transfection with pEGFP-C1/PAK1,the PAK1 protein expression increased significantly in comparison with those in negative and vector control groups.The invasiveness of the SW480 cells was significantly enhanced after the transfection. Conclusion The PAK1 gene transfection call increase the expression of PAK1 in SW480 cells and enhance the invasiveness of the cells.PAK1 can be associated with the invasiveness and metastasis of colorectal carcinoma cells.     

雄激素及其受体与多囊卵巢综合征

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女常见的一种内分泌代谢性疾病,发病率为5%~10%,其发病机制尚未完全阐明。高雄激素血症是PCOS的突出特点,尤其是卵巢局部的高雄激素环境是导致PCOS的关键原因,因此对高雄激素形成这一特征性改变的研究成为阐明PCOS病因的重点所在。雄激素主要通过激活雄激素受体(AR)来发挥作用,故AR的作用不容忽视,我们着重就雄激素和AR在PCOS发病中的作用作一综述。     

PAK6基因的克隆、抗体制备及在前列腺癌中的表达

目的 在克隆P21相关激酶6(PAK6)全长cDNA的基础上,进一步克隆PAK6-N端基因并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因产物并进行多克隆抗体制备,为研究PAK6与疾病的关系奠定基础.同时研究PAK6在前列腺癌中的表达.方法 根据人全长PAK6 cDNA序列,设计PCR引物,以人前列腺癌cDNA文库为模板利用PCR技术克隆PAK6全长cDNA.在此基础上,以PAK6全长cDNA为模板克隆PAK6-N端基因,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中,经EcoRI/XhoI双酶切鉴定后,进行DAN序列测定.GST-PAK6-N融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达.利用G1utothione亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-PAK6-N融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并用纯化的抗PAK6多克隆抗体在3例前列腺癌病人标本中进行了免疫组化表达的初步研究.结果 成功克隆了PAK6全长cDNA和PAK6-N端基因片断,在E.coli中表达了PAK6-NT,纯化了GST-PAK6-N融合蛋白,并制备了PAK6特异性抗体.免疫组织化学研究表明:3例前列腺癌患者石蜡包埋病理组织切片免疫组化染色全部表现为间质阳性,PAK6在前列腺癌间质中呈现表达,而前列腺癌细胞则不染色.结论 首次克隆了PAK6全长cDNA和PAK6-N端基因片断并成功制备了PAK6特异性抗体,为深入探讨PAK6在前列腺癌中的作用奠定了基础.初步揭示PAK6在前列腺癌的表达     

基因免疫制备人PAK4单克隆抗体及其部分特性的鉴定

背景与目的:制备人PAK4单克隆抗体可以用于临床诊断恶性肿瘤,同时为深入探讨PAK4蛋白的功能提供可靠途径.材料与方法:用重组PAK4质粒(以P3XFLAG-CMV-10表达质粒为载体)免疫6～8周龄雌性Balb/C小鼠,通过细胞融合与克隆,筛选PAK4特异性单抗.结果:得到稳定分泌PAK4抗体的单克隆杂交瘤细胞2株,分别命名为2D1和3H4;间接ELISA方法测得2株PAK4单抗腹水效价为1∶1.0×104;单抗亚类鉴定表明2D1是IgG类,3H4是IgM类;免疫组化试验显示2株单抗均与临床两例乳腺癌组织管状上皮细胞高度反应.结论:PAK4单克隆抗体特异性较好,可用于临床肿瘤组织诊断.