凋亡抑制蛋白Livin和促凋亡因子Smac在胃肠道间质瘤中的表达及意义

目的研究胃肠道间质瘤（GIST）中Livin和SmacmRNA的表达,探讨二者相关性。方法采用RT-PCR方法检测124例GIST患者的Livin和SmacmRNA的表达水平,并进行比较分析。结果Livin在癌旁组织未检出阳性结果,Smac在癌旁组织中高表达（P〈0．05）;Livin、SmacmRNA表达与性别、年龄、黏膜受侵以及组织学类型无关,与NIH分级、淋巴结转移有关;Livin与Smac表达呈负相关。结论Livin高表达、Smac低表达共同促进GIsT的发展,有望成为GIST发生的预测指标。     

S100钙结合蛋白A2在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨S100A2在慢性胃炎、肠上皮化生和胃癌组织样本中的表达及与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法:利用HE染色对所取胃组织标本进行病理组织学诊断;采用免疫组织化学方法检测标本S100A2蛋白的表达;qRT-PCR法检测S100A2 mRNA表达;Western blot检测S100A2蛋白的表达;采用Kaplan-Meier分析累积生存率。 结果:应用qRT-PCR方法分析不同胃组织标本S100A2 mRNA的表达水平,发现S100A2 mRNA的表达水平按以下顺序递减:胃炎,肠上皮化生,胃癌(P<0.001),与Western bolt分析S100A2蛋白的表达评定结果相吻合。免疫组化分析:S100A2在胃炎、肠上皮化生和胃癌组织细胞质中表达,S100A2阳性表达率为胃炎100％(73/73),肠上皮化生90.7％(78/86),胃癌48.9％(170/348) (P<0.001)。在胃癌中,S100A2蛋白的表达缺失在青年患者中多于老年患者。S100A2蛋白的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴管和静脉浸润、淋巴结转移、肿瘤TNM分期呈负相关,并随胃癌分化程度降低,在高分化癌、中分化癌和低分化癌中,S100A2的阳性表达率分别为65.9%、56.4%和17.2%(P<0.05),和患者性别无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier分析累积生存率显示:弱或中度S100A2基因表达的患者累积生存率明显高于不表达S100A2的患者。多因素分析显示S100A2表达、浸润深度、淋巴管及静脉浸润、淋巴结转移、TNM分期是胃癌患者预后的独立因素。结论:在胃炎-肠上皮化生-胃癌过程中S100A2 mRNA和蛋白表达逐渐降低。S100A2表达与肿瘤大小、浸袭深度、淋巴管和静脉侵犯、淋巴结转移及TNM分期负相关,并随胃癌分化程度降低,S100A2的阳性表达率逐渐降低。S100A2表达是独立的胃癌预后预测因素,是胃癌患者预后良好的指标之一。     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的：研究PI3K/Akt信号转导通路介导的细胞凋亡相关因子在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达及意义。方法：RT-PCR检测PI3K、NF-κB、XIAP、bcl-2与survivin在124例GIST及癌旁正常组织中mRNA水平。结果：在GIST中,PI3K、NF-κBmRNA表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关。XIAPmRNA随NIH分级表达上调;XIAP表达与GIST组织分化程度呈负相关,即分化程度越低,XIAP阳性表达率愈高,伴有肿瘤侵袭转移的GIST病例XIAP表达水平较高,同时XIAP的表达与黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关。bcl-2mRNA水平表达上调,与NIH分级、黏膜受侵有关,而与年龄、性别、组织学类型、转移复发及周围组织浸润无关。survivinmRNA在GIST中的表达与NIH分级、肿瘤侵袭转移、黏膜受侵等因素有关,而与年龄、性别以及组织学类型无关。由于NF-κB的调控作用,各指标之间mRNA的水平变化呈正相关。结论：GIST中PI3K/Akt信号转导通路的活化可以进一步激活NF-κBmRNA,从而进入细胞核内调控凋亡相关因子XIAP、bcl-2以及survivinmRNA水平的表达。     

慢性铅暴露小鼠海马NMDAR亚单位基因表达

目的探讨发育期慢性铅暴露对仔鼠学习记忆及海马细胞N-甲基D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位ε1、ε2mRNA表达的影响.方法采用跳台法检测小鼠被动回避反应的学习能力;采用逆转录-聚合酶链法检测慢性铅暴露时仔鼠海马细胞的NMDAR亚单位ε1、ε2mRNA表达水平.结果慢性铅暴露可致小鼠被动回避反应学习记忆能力下降,与对照组比差异有统计学意义（P＜0.05）;海马细胞的NMDAR亚单位ε1mRNA表达下降（2～4周）,ε2mRNA表达水平基本不变.结论铅致仔鼠被动回避反应的学习能力下降,与其致海马细胞的NMDAR亚单位ε1mRNA表达水平下降有关.     

胃肠道间质瘤中PTEN、蛋白激酶B与转录因子家族NF-κ B、bcl-2关系的研究

目的 研究磷酸化抑癌基因(PPTEN)、蛋白激酶B(Akt)基因与转录因子家族NF-κB、B细胞淋巴瘤/白血病2(bcl-2)在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及意义.方法 应用RT-PCR及Western blot检测124例GIST中Akt、PTEN、NF-κB、bcl-2基因mRNA和蛋白表达情况.结果 在GIST中,随着NIH分级增高,Akt的mRNA及蛋白表达水平上调,而抑癌基因PTEN的mRNA及蛋白表达水平下调,二者阳性表达率与肿瘤侵袭转移和黏膜受侵关系密切,PTEN与pAkt蛋白阳性表达之间呈显著负相关(r=-0.386,P=0.024).NF-κB、bcl-2的mRNA的表达变化与NIH分级以及肿瘤侵袭转移、黏膜受侵密切相关,而与年龄、性别、组织学类型无关;NF-κB和bcl-2 mRNA表达水平呈正相关;Akt和NF-κB、bcl-2的mRNA表达水平呈正相关.结论 GIST中PTEN基因失活可以活化蛋白激酶Akt,进一步激活NF-kB转录因子,上调凋亡相关因子bcl-2 mRNA水平的表达.     

铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响。结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关。与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P<0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高。结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高。     

胃肠道间质瘤PI3K-Akt 信号转导通路促进血管生成相关因子的检测及其意义*

目的:研究胃肠道间质瘤PI 3K-Akt 信号转导通路促进血管生成相关因子的检测及其意义。方法:Western印迹法检测PI 3K、Akt、PTEN在GIST中的表达,免疫组织化学法检测HIF-1 α 、NOS 2、VEGF在GIST中的表达。结果:在GIST中,随着NIH 分级增高,PI 3K、Akt的蛋白表达水平上调,低危组分别为82.14、115.16;中危组分别为101.34、142.52;高危组分别为138.52、180.55（P<0.05或P<0.01）,而抑癌基因PTEN 的蛋白表达水平下调,低危组为114.28;中危组为73.24;高危组为60.12（P<0.05或P<0.01）。 HIF-1 α 、NOS 2 和VEGF的表达与GIST的NIH 分级、黏膜受侵及侵袭转移关系密切（P<0.05或P<0.01）。 有侵袭转移组的阳性率明显高于无侵袭转移组。Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的HIF-1 α 的阳性率分别为46.2% 、68.4%（P<0.01）;黏膜受侵和无受侵组的患者HIF-1 α 阳性率分别为88.2% 、54.4%（P<0.05）;Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者NOS 2 的阳性率分别为42.3% 、70.4%（P<0.05）;黏膜受侵和无受侵组的患者NOS 2 阳性率分别为88.2% 、55.7%（P<0.01）;Ⅰ、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的VEGF的阳性率分别为46.2% 、61.2%（P<0.01）;黏膜受侵和无受侵组的患者VEGF阳性率分别为79.4% 、50.6%（P<0.01）;HIF-1 α 、NOS 2 和VEGF的的表达未发现与其他临床病理特征有明显的相关性（P>0.05）。 HIF-1 α与NOS 2 蛋白阳性表达之间呈显著正相关（r=0.392,P=0.026）;HIF-1 α与VEGF蛋白阳性表达之间呈显著正相关（r=0.368,P=0.034）;NOS 2 和VEGF蛋白阳性表达之间呈显著正相关（r=0.452,P=0.021）。 结论:PI 3K-Akt 信号途径可能通过抑癌基因PTEN的调控来调节HIF-1 α 蛋白的表达,HIF-1 α 、NOS 2 和VEGF以及MVD的表达与GIST的NIH 分级、黏膜受侵及肿瘤侵袭转移关系密切。