日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅡ—p15亚单位的分离和序列分析

目的：分离和鉴定日本血吸虫（Schistosom japonisum,Sj)新基因。方法：应用表达序列标签（Expressd sequence tags,ESTs）法随机筛选Sj cDNA文库,通过PCR直接序列测定技术和同源性比较对阳性持入片段进行鉴定,采用亚克隆技术和生物信息学分析对日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅡ－p15亚单位进行结构和功能的鉴定。结果：我们从Sj cDNA文库中随机筛选到一个cDNA克隆,它含有一个371个碱基组成的阅读框,编码118个氨基酸,与哺乳动物等的RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅡ－p15亚单位具有较高的同源性,且具有该因子所特有的氨基酸序列,表明我们已经获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅡ－p15亚单位。结论：获得血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅡ－p15亚单位的全长cDNA序我,为该基因功能的实验性鉴定工作奠定基础。     

华支睾吸虫成虫RPEF基因产物及其抗RPEF多克隆抗体的制备

目的 体外制备华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因产物及抗RPEF多克隆抗体.方法 亲和纯化试剂盒纯化表达蛋白pGEX-4T-1-RPEF,凝血酶酶切表达蛋白制备重组蛋白RPEF,将重组蛋白RPEF免疫小鼠,制备多克隆抗血清,检测抗体滴度和抗血清特异性.结果 体外制备的RPEF蛋白经SDS电泳呈单一条带;酶联免疫吸附结果显示,免疫过程抗体滴度呈连续上升趋势;免疫印迹结果显示,小鼠抗血清具有抗RPEF特异性.结论 获得较专一的华支睾吸虫RPEF蛋白和RPEF抗血清.     

恶性疟原虫ABRA基因真核表达重组质粒的构建及序列分析

目的 构建恶性疟原虫海南（FCC1／HN）株ABRA基因真核表达重组质粒pcDNA3-ABRA;测定ABRA基因序列,并了解FCC1／HN株与其它分离株ABRA序列的差异。方法 根据ABRA基因已知序列设计合成一对引物,用PCR技术从FCC1／HN株基因组的DNA中扩增ABRA基因,将ABRA基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;用切,PCR扩增鉴定筛选到的重 质粒阳性克隆。以正确的重组质粒为模板,用双脱氧链末端终止法测定ABRA基因序列,应用软件辅助分析ABRA序列及进行同生比较。结果 PCR扩增得到特异的FCC1／HN株ABRA基因;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3-ABRA重组质粒。测序表明,FCC1／HN株ABRA基因大小为2220bp,编码739个氨基酸。恶性疟原虫FCC1／HN株与Camp,3D7,FC27株ABRA基因编码氨基酸序列主要在C－端存在少量不同;FCR3株与以上4株ABRA基因编码氨基酸序列相比,只有少量的氨基酸替换。结论 从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA中获取ABRA基因,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-ABRA,并测定了FCC1／HN株ABRA基因的序列;FCC1／HN株与其它分离株ABRA基因有很高的同源性。     

日本血吸虫thioredoxin基因的克隆和表达

目的 结合分子生物学和生物信息学方法筛选鉴定日本血吸虫新基因。方法 从日本血吸虫(Schistosoma japonicum，大陆株)成虫cDNA库中获取表达序列标签(expressed sequence tag，EST)，用电子拼接的方法延伸序列，用NCBI提供的BLAETx程序和Genbank数据库进行同源性分析以筛选基因；设计特异性引物从日本血吸虫成虫mRNA中扩增筛选基因并预测和分析；扩增产物克隆到原核表达载体并表达。结果 筛选出日本血吸虫Thioredoxin全长基因并对其进行了序列分析，克隆全长cDNA至PET原核载体并表达成功。结论 结合EST、电子延伸和传统的分子生物学方法是高效筛选S.jiaponicum功能基因的有效策略。     

恶性疟原虫子孢子表面蛋白2基因的克隆与序列分析

目的：克隆恶性疟原虫海南株(FCC1／HN)子孢子表面蛋白2(PfSSP2)基因，并进行序列分析。方法：根据PfSSP2基因已知序列设计合成一对引物，用PCR技术从FCC1／HN株基因组DNA中扩增出PfSSP2基因，并克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测序，用DNAstar软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果：PCR扩增得到特异的FCC1／HN株PfSSP2基因序列，酶切及PCR鉴定获得了正确的pT-PfSSP2重组质粒。测序表明，所克隆的PfSSP2基因大小为1680bp，编码559个氨基酸残基。序列分析表明，我国恶性疟原虫FCC1／HN株与国外的3D7、DD2、FCR3、HB3A、K1、Thai814、Thai838、Thai842、Thai947及7G8株PfSSP2的氨基酸序列在33个位点存在氨基酸替代，1处氨基酸序列增加；各株间PfSSP2的氨基酸序列同源性都在95.7％以上。结论：克隆了恶性疟原虫FCC1／HN株PfSSP2基因。序列测定及同源性分析表明，恶性疟原虫不同分离株间有高度的同源性。     

“拓展-探究性”案例为导向的细胞生物与遗传学教学改革探讨

在细胞生物与遗传学教学过程中,对本课程的教学方法和教学模式进行改革和优化.课堂上以“拓展-探究性”案例为导向,将理论和实践有机结合,充分体现学生的主体地位,大力培养学生的逻辑思维和创新能力.