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51.
恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1(MSP1)在其分子C-端MPS-119具有两个类EGF结构,其中类EGF-1为特异性抗体抑制原虫侵入细胞的靶位之一。本文通过酚-氯仿抽提,乙醇沉淀法提取恶性疟原虫(FCC-1HN株)基因组DNA,再用PCR扩增类EGF-1基因,经酶切纯化后插入质粒pGEM3Zf(+)中,转化大肠杆菌DH5a,经PCR筛选及双酶切鉴定,筛选出含类EGF-1基因的阳性克隆子。 相似文献
52.
日本血吸虫SjCa8基因的原核表达及其免疫学特征分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的表达和纯化日本血吸虫钙结合蛋白(SjCa8),研究其免疫学特征。方法重组质粒pET32a ( )-SjCa8经诱导表达后,获取纯化蛋白SjCa8,利用ELISA、Western-blot和动物保护性实验检测SjCa8的免疫学特征。结果成功获取了纯化蛋白SjCa8,该蛋白能免疫识别血吸虫感染小鼠血清和血吸虫病患者血清。SjCa8免疫Balb/c小鼠可获得较高滴度的特异性抗体,诱导宿主产生35.31%的减虫率和35.68%的减卵率。结论纯化蛋白SjCa8具有良好的免疫原性和免疫反应性,具有作为血吸虫病免疫诊断和疫苗候选分子的研究价值。 相似文献
53.
日本血吸虫卵壳白基因的体外扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
根据日本血吸虫卵壳蛋白基因的已知序列,借助计算机核酸序列软件分析,设计了一对引物。在5’端引物中引入HindⅢ酶切位点和起始密码子,在3’端引物中引入EcoRⅠ酶切位点和终止密码子,用PCR方法对日本血吸虫虫卵、雌虫、雄虫的基因组DNA进行体外扩增。1%琼脂糖凝胶电泳显示:雌虫和虫卵的基因组DNAPCR产物在618bp处出现特异扩增条带,而雄虫及对照组则无此条带出现。该条带与预期长度相符,并对PCR产物进行纯化和酶切。 相似文献
54.
目的 测定我国恶性疟原虫海南株 (FCC1/ HN)谷氨酸富集蛋白 (GARP)、丝氨酸重复抗原 (SERA)和裂殖子表面蛋白 1(MSA1)基因序列 ,并进行序列分析。 方法 采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 GARP、SERA和 MSA1基因片段 ,分别插入到测序载体上进行测序。应用 DNAstar软件辅助分析 3种抗原基因的结构及 3种抗原在不同恶性疟原虫株间的分化情况。 结果 恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP基因全长 2 2 6 3bp,编码6 82个氨基酸残基 ,谷氨酸占 2 3.6 1% ,包含 5个典型的氨基酸重复序列 ;SERA基因全长 344 8bp,编码 995个氨基酸残基 ,丝氨酸含量为 10 .6 5 % ,包含 1个连续 32个丝氨酸 (S)残基的序列 ;MSA1基因全长 5 0 85 bp,编码 16 94个氨基酸残基 ,MSA1的氨基酸序列符合 MAD2 0型特征。恶性疟原虫 FCC1/ HN株与 3D7、FC2 7株 GARP的序列差异主要集中于 C-末端 ;FCC1/ HN株与 FCR3、3D7、FCBR、Hondulas- 1株 SERA的序列差异主要集中于 N-端。FCC1/ HN株与MAD2 0、3D7、HN1、HN2、FC2 7、RO- 71、RO- 33、CAMP和 Palo- alto株 MSA1的同源性高 ,K1和 WEL L COME株 MSA1的同源性高 ,各分离株 MSA1的序列差异主要处于第 2至 16分区。 结论 了解了恶性疟原虫 FCC1/ HN株 GARP、SERA和 MSA1的 相似文献
55.
目的 构建恶性疟原虫海南株 (FCC1 HN)CSP3′末端基因的原核表达载体 ,并对CSP3′末端基因进行序列测定。方法 根据恶性疟原虫CSP编码的基因序列设计引物 ,采用PCR技术扩增出CSP3′末端基因 ,将其克隆入原核表达载体pGEX 4T 1,转化大肠杆菌JM10 9;阳性重组质粒经PCR、酶切鉴定 ,用双脱氧链末端终止法进行序列测定。 结果 从恶性疟原虫基因组中扩增出CSP3′末端基因 ,其片段大小为 2 2 5bp ,构建的阳性重组质粒pGEX 4T 1 CSP3′末端经PCR和酶切鉴定与预期结果一致 ,测序结果进一步确认了插入片段的正确性。 结论 成功地构建了CSP3′末端的原核重组质粒 ,为进一步研究其功能奠定了基础。 相似文献
56.
恶性疟原虫疫苗研究Ⅱ.一种新的化学拼接法重组多价保护性抗原的基因 总被引:1,自引:2,他引:1
将恶性疟原虫保护性抗原环子孢子蛋白(CSP)、环状体感染红细胞表面抗原(RESA)、裂殖子表面抗原1和2(MSA1和MSA2)4种抗原中具有T和/或B细胞表位的6个基因片段,按照我们设计的方案排成一条线性序列,经在计算机上分析比较后,分成长短不一的8个基因片段(F1~F8),其中F1、F3、F5和F7为正链片段,F2、F4、F6和F8为负链片段。每相邻两个片段间预设15个互补碱基搭头。在DNA合成仪上分别合成这8个片段后,把F2~F76个片段分别磷酰化,按等摩尔浓度混合。经30℃退火,使8个片段连接起来,然后按基因体外扩增的原理,填补互补碱基以外的缺口,重组成新的多价基因。我们把这种化学拼接法取名为“缺口填补法(Filling-qapMethod)”,经克隆和测序验证,表明这种方法具有效果好、经济、简便等优点。 相似文献
57.
广州管圆线虫致病机制的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
广州管圆线虫是一种人兽共患寄生虫,幼虫侵入人体后可移至大脑,主要引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎。其发病为幼虫移行,幼虫在颅部占位并释放代谢产物,基质金属蛋白酶与纤溶酶原活化因子的产生,嗜酸性粒细胞对神经细胞的毒害及超敏反应等多因素作用的结果。偶尔该虫也可侵犯眼球,眼球病变主要是免疫反应导致的损害。了解广州管圆线虫的发病机制,对该病的防治和诊断具有重要意义。 相似文献
58.
应用巢式PCR方法诊断微小隐孢子虫感染的实验研究 总被引:11,自引:1,他引:10
目的应用巢式PCR扩增方法诊断微小隐孢子虫感染。方法用昆明种小鼠通过免疫抑制方法建立动物模型,通过不连续蔗糖密度梯度离心法分离、纯化隐孢子虫卵囊。抽提DNA后,用巢式PCR扩增隐孢子虫的18S核糖体DNA,电泳、割胶回收后测序。结果成功建立隐孢子虫的小鼠免疫抑制动物模型,纯化后的隐孢子虫卵囊形状均一,呈圆形或椭圆形,大小在3-6um左右。经巢式PCR扩增,在840bp左右有一条特异性条带。通过测序和生物信息学分析,证实该基因序列与微小隐孢子虫18S具有高度同源性。结论巢式PCR方法扩增18S基因是诊断微小隐孢子虫感染的敏感方法。 相似文献
59.
间充质干细胞分化为脂肪细胞蛋白组学分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 利用蛋白组学技术,分析成脂分化过程中蛋白表达改变,探讨脂肪形成机制.方法 以体外诱导人体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化脂肪细胞作为模型,收集诱导0,1和3周细胞,制成蛋白裂解液;采用双向电泳结合质谱分析方法,以0周为对照组,比较诱导1周或3周蛋白质表达改变.结果 成脂分化引起44个蛋白表达上调或下调水平超过2倍.这些蛋白功能类型主要属于代谢(39%)、细胞骨架(11%)、氧化还原(6.8%)、蛋白合成与分解(15.9%)、信号传导(6.8%)和分子伴侣(4.5%)等蛋白.结论 生物学信息分析表明,被调节的蛋白在脂肪形成过程中起重要作用;MSCs是研究多能前体细胞向包括前脂肪细胞在内的个体细胞系定向分化的有利工具. 相似文献
60.