表达幽门螺杆菌粘附素BabA重组蛋白菌株的构建及其粘附活性评价

目的 构建表达幽门螺杆菌(Hp)粘附素BabA重组蛋白的候选菌株并测定其粘附活性。方法 用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增粘附素babA2基因，将其定向插入表达载体pET-22b( )中，并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达，利用光镜计数法测定其粘附活性。结果 DNA序列分析表明，所克隆的粘附素babA2基因序列与GeneBank公布的一致。在37℃诱导表达3h后，粘附素BabA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34．8％，体外实验证实BabA参与了粘附过程。结论 本研究获得了表达有生物活性的Hp粘附素BabA的克隆，为深入研究其相关功能奠定了良好基础。     

~(125)I-A蛋白固相放射免疫分析技术及其应用

固相放射免疫分析方法是近几年才发展起来的新技术,由于这种分析方法具有特异性强、敏感性高和重复性好等优点,故日益得到广泛应用。本文介绍一种以化学活化纸为固相载体,以~(125)I-SPA代替“第二抗体”的     

毒素源性大肠杆菌CFA/Ⅰ、CS3重组菌株粘附力、免疫原性和保护性研究

采用可逆性肠结扎成兔腹泻(RITARD)动物模型检测了毒素源性大肠杆菌(ETEC)定居因子抗原Ⅰ(CFA/I)和表面抗原3(CS3)重组菌各1株的肠道粘附力,免疫原性和保护性。经肠道及口服接种重组菌株对肠道均有较强的粘附力,与CFAs阴性宿主菌相比P<0.0025。口服免疫家兔时,第4周血清抗体滴度达到高峰,滴度分别为1:9000和1:80000;肠道免疫家兔后血清效价在第2周达到高峰,滴度分别为1:8000和1:60000。在抗体滴度高峰时进行ETEC野生株攻毒,结果显示口服组抗腹泻保护率为66.7％～75％,肠道组为50.1％～71.4％。攻毒后免疫家兔的排菌天数较对照组明显减少。     

硒拮抗大鼠心肌缺血与再灌注期间自由基损伤机理的研究

目的 从基因表达水平探讨心肌缺血／再满足期间微量元素硒（Ｓｅ）拮抗自由基损伤的机理。方法 采用生化、原子吸收、ＲＴ－ＰＣＲ、基因测序等技术,分别对对照组、口服有机硒、无机硒等３组心肌缺血／再满足模型大鼠（每组２０只）于缺血前、缺血３０分钟、再灌注３０分钟时的心肌丙二醛（ＭＤＡ）含量、谷胱革肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性、Ｓｅ、Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋等离子浓度、ＧＳＨ－ＰｘｍＲＮＡ水平及ＧＳＨ－Ｐ     

幽门螺杆菌治疗性疫苗研究进展

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）被世界卫生组织定为一类致癌因子，由于化学疗法和预防性疫苗的局限性使得幽门螺杆菌的治疗性疫苗研究日益受到重视。目前幽门螺杆菌治疗性疫苗在小鼠动物模型实验中取得了一定疗效，但对灵长类和人类的治疗效果却令人失望。在治疗性疫苗研究中，保护性免疫机制的阐明、保护性抗原筛选和免疫佐剂研究备受关注。由于幽门螺杆菌在长期的进化过程中形成一套独特的机制来抵抗甚至抑制免疫系统，能否高效安全地从寄主体内清除幽门螺杆菌成为该研究的难点和重点，治疗性疫苗和抗生素的联合应用或许是解决这一问题的一个途径。     

TGFβ1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的　探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性。方法　通过支气管插管与滴注的方式进行。结果　检测分析表明 ,转基因后 1 5d ,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性 ;第 5 5天 ,PCR扩增 6 7% (2 3)阳性。RNAdotblot分析表明 ,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1mRNA含量降低。转染 35d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明 ,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高 (P <0 0 1) ,但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低 (均为P <0 .0 1)。用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠 ,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达。结论　由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法 ,它可以减缓肺纤维化的发生 ;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法 ,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径。     

梅毒螺旋体抗原基因的克隆、表达及其在临床检验中的应用

目的　克隆、表达并纯化梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 抗原 ,并检测梅毒患者的血清标本。方法　应用基因扩增技术分离此蛋白的全长基因 ,采用基因工程的方法 ,应用融合表达载体pGEX 2T ,重组、克隆得到带有梅毒螺旋体 47× 10 3 特异性抗原基因的重组菌株 ,经大肠杆菌表达系统获得重组融合蛋白。再经亲和层析获得纯品 ,并联合应用ELISA检测梅毒患者的血清标本 30份 ,同时检测非梅毒患者的血清标本 30份。结果　纯化后获得了梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 的特异性抗原。ELISA检测梅毒患者血清结果均阳性。非梅毒患者血清均阴性 ,无非特异性交叉反应。结论　此项方法具有操作简便、准确的特点 ,为临床检测梅毒开辟了新的领域     

新型粘膜免疫佐剂候选株LTA^—B^＋的构建

目的：产肠毒素大肠杆菌产生的不耐热肠毒素（ＬＴ）不仅是很强的口服免疫原,而且其粘膜免疫佐剂作用显著。ＬＴ的毒性限制了它的直接使用,希望通过体外定点诱变技术,获得具有粘膜免疫佐剂作用的ＬＴ减毒株。方法：以人源ＬＴ基因为研究对象,首先构建了重组质粒ｐＵＣ１９－ＬＴ,然后用单引物ＰＣＲ法和重叠延伸ＰＣＲ法分别构建了ＬＴ Ｑ７和Ｋ６３基因突变体。结果：ＣＨＯ细胞体外试验和家兔肠结扎体内试验毒性测定的结果表     

肠毒素大肠杆菌定居因子抗原Ⅰ的酶联免疫吸附试验检测法

本文叙述了肠毒素大肠杆菌(ETEC)定居因子抗原I(CFA/I)抗血清的制备方法,以及在此基础上建立的酶联免疫吸附试验。该方法具有特异性好,灵敏度高和简便快速等优点,不仅能检测产生CFA/I的野生菌株,也能检测重组克隆未装配成菌毛的功能蛋白的亚基,并且与其他肠道腹泻病原菌无交叉反应。既可用于临床检测和流行病学调查,也是筛选CFA/I基因克隆的有效途径。     

DNA净化新技术

本文介绍了一种用玻璃粉从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法.此技术基于在高浓度Nal存在时,琼脂糖的熔点大大降低,在45～55℃下琼脂糖就能溶解.当含有DNA的琼脂糖凝胶溶解后,释放出的DNA吸附于玻璃粉上,与蛋白质、RNA等成分分离.在低盐溶液或水溶液中,DNA从玻璃粉上解脱下来,从而达到净化的目的.此方法简便、经济、快速,DNA回收率可达70～80%.