骨髓源性内皮祖细胞与内皮细胞共培养促进其向成熟内皮细胞分化的研究

目的：探讨共培养的内皮细胞对内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化的影响。方法：分离1～2个月龄,SD大鼠股骨髓,个核细胞（MNCs）,MNCs,Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染鉴定内皮细胞的特性。应用贴块法培养大鼠腹主动脉的内皮细胞,vWF免疫组化染色进行鉴定。采用Transwell培养板,上、下室分别加入内皮祖细胞和内皮细胞,15%胎牛血清的NO.2 DMEM/F12培养液培养14 d,倒置相差显微镜观察培养内皮祖细胞的形态。RT-PCR检测eNOS、vWF mRNA,流式细胞术检测CD31及KDR的表达。结果：荧光双染显示培养的单个核细胞具有内皮祖细胞特性;共培养的内皮祖细胞呈短梭型、铺路石状,培养至4 w时有复杂的网状结构形成。RT-PCR检测显示,eNOS及vWF mRNA表达均较对照组显著增加（P〈0.05）。流式细胞术分析表明,共培养组的内皮祖细胞CD31及KDR的表达,也显著高于对照组（分别为P〈0.05及P〈0.01）。结论：与内皮细胞共培养可促进内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化。     

鱼卵提取物微量刺激法诱导鼠脾细胞表达干细胞标志抗原

背景:小鼠和人的体细胞能被一些特殊的因子诱导,逆转为类似胚胎细胞的状态,即诱导性多能干细胞。目的:进一步提高鱼卵提取物诱导体细胞逆向分化为多能干细胞的效率。方法:以鱼卵提取物诱导BALB/C小鼠脾细胞分化为多能干细胞,分别以普通诱导法(鱼卵提取物质量浓度分别为0,0.1,0.2,0.4,0.8,1.2g/L)与微量刺激法诱导(鱼卵提取物质量浓度分别为0,0.05,0.1,0.2,0.4g/L)。结果与结论:与普通诱导法比较,微量刺激法诱导的脾细胞表达更多的干细胞标志抗原OCT-3/4,Nanog,SSEA-1。证明微量刺激法可进一步提高体细胞逆向分化为多能干细胞的效率。     

体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展

背景：克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。 目的：探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。 方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以“重编程,方法,体细胞,干细胞,分化”或“reprogramming, method, somatic cell, stem cell, differentiation”为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。 结果与结论：一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。     

紫杉醇对人肝癌细胞株MHCC97-H的细胞形态和周期的影响

目的研究紫杉醇对体外培养肝癌细胞MHCC97-H的细胞形态和细胞周期的影响,初步探讨其作用机制。方法（1）将MHCC97-H传代培养后,给予不同浓度的紫杉醇作用24h,透射电镜观察细胞形态特征;（2）不同浓度的紫杉醇分别作用MHCC97-H12、24、48h后,MTT法检测肝癌细胞的抑制率,并绘制药物浓度-细胞抑制率曲线;（3）不同浓度的紫杉醇作用MHCC97-H48h后,用流式细胞仪测定细胞周期的变化及凋亡情况。结果（1）随着紫杉醇浓度的提高,MHCC97-H的细胞伪足数量减少;（2）紫杉醇对体外培养的MHCC97-H生长具有明显抑制作用,并且存在剂量与时间依赖性;（3）紫杉醇可以将MHCC97-H阻滞于G2-M期,并促进其凋亡。结论紫杉醇可以将MHCC97-H大部分阻滞于G2-M期,并通过诱导肝癌细胞凋亡来协同发挥抗癌作用,同时使肝癌细胞伪足减少来降低其运动能力。紫杉醇可能是有潜力的抗肝癌生长及转移的药物。     

代谢综合征动物模型的研究进展

代谢综合征(MS)是一组涉及多种代谢疾病的临床综合征,可导致严重的心脑血管疾病。MS相关模型的建立对深入研究MS对心脑血管疾病的影响具有十分重要的意义。目前MS的动物模型包括遗传性模型、诱发性模型以及转基因和基因剔除性模型三类。三类模型均具有MS的特点,具有各自的优缺点,但与人类MS的实际情况仍有一定的差距。     

猕猴自体骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞肝门静脉移植对猕猴急性肝损伤的治疗作用和为人类肝损伤治疗提供依据和方法。方法猕猴10只,随机分为实验组和对照组,每日皮下注射40?L40.8ml/kg,连续注射4d,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,分离实验组猴的自体骨髓单个核细胞,按3×108细胞/kg将骨髓细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)(P<0.001),而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,大量肝细胞坏死,部分细胞变性,水肿,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。骨髓细胞肝门静脉移植后60d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),病理组织学观察结构清楚,而对照组有纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体骨髓细胞肝门静脉移植能对猕猴急性肝损伤有明显治疗作用,可改善急性肝损伤猕猴的肝功能及组织结构,提示该方法可能对人类急性肝损伤有一定治疗意义。     

三七总皂甙、大鼠高胆固醇血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：为观察tPNS对HCS刺激的VSMC增殖的影响。方法：通过MTT法和电镜观察法，观察了tPNS对VSMC的保护作用。结果：HCS可明显刺激VSMC增殖并导致其表型的改变，tPNS可呈浓度依赖性抑制VSMC的增殖（r=-0.972)，与对照组相比具显著差异；tPNS还可明显抑制HCS对VSMC的刺激增殖作用，与HCS组相比具有显著差异。结论:tPNS可抑制VSMC增殖而抗动脉粥样硬化，这种抑制作用没有种属差异性。     

灯盏花素对动脉粥样硬化兔内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛分泌水平的影响

目的观察灯盏花素对动脉粥样硬化兔内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛分泌水平的影响。方法日本大耳白兔50只,随机分为健康组、对照组、实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组。健康组饲喂正常的基础饲料,对照组饲喂高胆固醇饲料（由79.5%基础饲料,15%蛋黄粉,0.5%胆固醇,5%猪油混合加工而成。）,实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组给予高胆固醇饲料的同时,每日分别肌肉注射1.53、.0和4.5 mg/kg体重的灯盏花素。3个月后分别采血测定内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛的含量。     

成人骨髓间充质干细胞体外培养方法的建立及生长特性分析

目的 建立成人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MMSCs)体外分离培养和扩增方法,观察MMSCs在体外培养的生物学特性,为MMSCs的临床应用奠定技术基础.方法 采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,利用DMEM/F12培养基添加自体血清进行黏附培养和扩增MMSCs,光镜观察MMSCs生长和形态变化,计数和MTT法观察原代和传代培养的增殖及生长特征,免疫组化法分析MMSCs纯度.结果 MMSCs贴壁生长,呈典型MMSCs形态和生长特征,原代及传代5代内的MMSCs均有活跃的增殖能力,其中CD105阳性细胞＞98%.结论 密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度和高增殖活性的MMSCs,成人MMSCs至少在传代培养5代内生长旺盛并维持其生物特性,可满足临床治疗和人体生物组织研究要求.     

不同年龄人骨髓间充质干细胞体外生长特性分析

目的建立人骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）体外分离培养和扩增方法，观察不同年龄人MMSCs在体外培养的生长特性，为MMSCs的临床应用提供技术方法和依据。方法采集10～60岁之间的人骨髓血，密度梯度法分离出单个核细胞，利用DMEM／F12培养基添加胎牛血清进行黏附培养和扩增MMSCs，分析第3代MMSCs生长情况和形态变化，细胞计数，用MTT法观察其增殖及生长特征，免疫组化法分析MMSCs的纯度。结果10～60岁人MMSCs均贴壁生长，呈典型MMSCs形态和生长特征，传代细胞的增殖速度比原代细胞快，但随着年龄的增长，原代及传代培养MMSCs的增殖能力下降，生长周期延长，其中CD105阳性细胞均大于95％，但老年人的CD105阳性细胞比率有所降低。结论密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度MMSCs，成人MMSCs在传代培养的增殖活性随年龄增加而降低。