局部和远道电针对根性痛大鼠脊髓背角及背根神经节NOS的表达影响

目的:通过同节段局部和远道电针干预治疗慢性根性痛模型大鼠,观察其对脊髓背角及背根神经节中一氧化氮合酶(NOS)活性变化的影响。方法:采用慢性根性痛大鼠模型,将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、局部电针组(C组,取双侧L4"夹脊"穴)、远端电针组(D组,取双侧"阳陵泉")。通过NADPH-d组织化学染色,观察电针后脊髓背角及背根神经节NOS表达的变化。结果:患侧脊髓背角及DRG中NADPH-d阳性反应结果一致:B、C、D组较A组均增加明显(P<0.01),其中,B组增加尤其明显,较C、D组差异有显著统计学意义(P<0.01);C组阳性表达较D组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:电针的镇痛作用可能部分是通过抑制NOS的活性实现的。同节段局部电针组抑制NOS活性的作用较强。     

人miR-1908慢病毒载体构建及在人脂肪前体细胞中的表达验证

目的 构建人miR-1908慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪前体细胞中过表达效果。方法 以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-1908区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-1908的相应表达量。结果 成功构建人miR-1908慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪前体细胞的效率可达到70%以上,miR-1908过表达水平可接近2倍。结论 本研究成功构建了人miR-1908慢病毒过表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪前体细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础。     

高效液相色谱法测定Hb F的临床实验评价

目的就高效液相色谱法(HPLC)测定HbF进行临床实验评价。方法用全自动糖化血红蛋白分析仪G7(分析原理为HPLC)的β-模式测定HbF,与抗碱变试验法测得HbF含量进行比较;并对该方法精密度、线性、抗干扰等指标进行实验。结果共测定标本77份,其中成人及儿童(除新生儿外)42份,用本法检出HbF高于正常值(含量>3.1%)共17例。该方法精密度CV1.9%~3.2%之间;与碱变性试验的相关性良好γ=0.9900;回归方程为y=0.9915x-0.03704,HbF的线性范围可达35.8%;胆红素在250μmol/L,三酰甘油22.0mmol/L以下时对测定结果无影响。但是对35例新生儿标本的检测表明,HbF在HPLC法与碱变性试验结果不符,HPLC法测定结果均为0,碱变性试验结果为65.02±11.69%。结论全自动糖化血红蛋白分析仪G7测定HbF,对成人及一般儿童能很好检测,且检测速度快。但G7对新生儿HbF的测定需对仪器分析软件进行调整,才可以正确定量。     

糖化血红蛋白测定在妊娠期糖尿病筛查中的应用与评价

目的：探讨糖化血红蛋白（HbAlc）的测定在妊娠期糖尿病（GDM）筛查中的作用和意义。方法：正常妊娠组318例、妊娠期糖耐量异常组69例及妊娠期糖尿病组105例分别进行空腹血糖（FPG）、50 g葡萄糖筛选实验（OGCT）和HbAlc测定。并通过ROC曲线评价FPG,OGCT和HbAlc在GDM筛查中的应用价值。结果：妊娠期糖尿病组FPG,OGCT,HbAlc水平均高于正常妊娠组（P〈0.05）,HbAlc在GDM筛查中敏感性、特异性、可靠性和阳性预示值分别为82.9%、97.8%、94.1%和92.6%;FPG,OGCT和HbAlc诊断GDMROC曲线下面积（AUC%）分别为83.5%、91.8%和90.6%。OGCT的诊断界点7.8 mmol/L对应的敏感性和特异性为68.6%、96.5%;HbAlc的诊断界点6.0%对应的敏感性、特异性为82.9%、97.8%。结论：通过ROC曲线评价,HbAlc在GDM筛查中的诊断效率明显高于FPG,可作为临床GDM筛查诊断的指标。     

去铁胺对人源肠道 Caco-2细胞成纤维细胞生长因子21表达的影响

目的：观察缺氧模拟物去铁胺（DFO）对人源肠道Caco-2细胞成纤维细胞生长因子21（FGF21）表达的影响。方法分别用50、100、150、200μmol/L的DFO处理Caco-2细胞12 h,同时用200μmol/L的DFO处理Caco-2细胞4、8、12 h,RT-PCR法检测细胞中的FGF21 mRNA。分别用缺氧诱导因子（ HIF）抑制剂和ROS抑制剂预处理Caco-2细胞,再用DFO继续处理,RT-PCR法检测细胞中的FGF-21 mRNA。结果随DFO浓度增加和作用时间延长,Caco-2细胞FGF21 mRNA相对表达量逐渐降低（P均＜0．05）。 HIF抑制剂预处理后,Caco-2细胞FGF21相对表达量依然降低（P均＜0．05）;ROS抑制剂预处理后,Caco-2细胞FGF21 mRNA相对表达量未出现明显降低（P均＞0．05）。结论 DFO对肠道Caco-2细胞FGF21的表达有抑制作用,该作用与缺氧产生HIF无关,而与ROS有关。     

高效液相层析法检查β地中海贫血应用评价

目的 对高效液相层析法快速筛查β地中海贫血进行评价。方法 用高效液相层析法测定血中血红蛋白A2（HbA2）、血红蛋白F（HbF）的含量，并与抗碱变试验法测得HbF、琼脂糖电泳法测得HbA2的含量进行比较；取低、中、高三种浓度值的标本进行重复性试验；在HbF含量为3．5％、5．7％和HbA2含量为5．9％、7．7％的两份标本中加入不同浓度的胆红素液及脂肪乳作干扰试验；与已知HbF浓度为33．0％和1．1％的两份标本按不同比例混合，分别进行测定，观察该法测定的线性范围。结果 该法测定HbF与抗碱变试验法结果相符、HbA2与琼脂糖电泳法有良好相关（r=0．8656）；HbF的线性范围可达33％；HbF和HbA2批内变异系数分别为1．5％～3．4％和3．7％～5．9％，批间变异系数分别为1．9％～4．2％和4．9％～7．5％；胆红素浓度在250μmol／L，甘油三酯浓度在22mmol／L以下时对测定结果无影响。结论 高效液相层析法测定HbF和HbA2具有准确度高，重复性好，不受脂浊、黄胆标本的干扰，且检测速度快，对G地中海贫血具有较好的初筛作用。     

不孕不育患者血清中抗精子抗体与抗心磷脂抗体的测定

目的 探讨抗精子抗体(AsAb)、抗心磷脂抗体(ACA)在不孕不育患者中的临床检测意义.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中的ACA和AsAb.1756例不孕不育患者检测了血清ACA,其中1326例不孕不育患者与20对正常生育夫妇同时检测了ACA和AsAb,1127例反复自发性流产患者(流产≥2次)(高危组)检测了ACA.结果 不孕不育组AsAb的总阳性率为21.4%,IgM阳性率为13.5%;正常生育组AsAb总阳性率为7.5%,IgM为0(均P<0.05).不孕不育组ACA检测总阳性率为36.6%,其中IgA阳性率为5.1%,IgG阳性率为30.5%,IgM为12.3%;高危组ACA阳性者471例,阳性率为41.8%,其中IgA阳性73例,占6.5%,IgG阳性398例,占35.3%,IgM阳性154例,占13.7%;正常生育组阳性率为5.0%,其中IgG阳性率为5.0%,IgM为2.5%(均P<0.05).结论 AsAb、ACA与不孕不育关系密切,其检测有助于免疫性不孕不育症的诊断.     

溴甲酚紫法测定血清白蛋白参考范围调查

目的建立溴甲酚紫(BCP)法测定血清白蛋白的参考范围,并与溴甲酚绿(BCG)法的结果进行比较。方法首先用配套校准液校准仪器,并测定配套的定值质控血清,然后对1385例健康体检者同时用BCP和BCG法测定血清白蛋白(ALB),双缩脲法测定血清总蛋白(TP),计算白/球比值(A/G)。结果男女总体参考范围TP64.1~83.7g/L,ALB(BCP法)35.6~48.6g/L,A/G比值1.10~1.80、ALB(BCG法)40.9~52.5g/L,A/G比值1.39~2.39。血清TP、ALB值1~10岁和大于50岁两组结果较低,且男女组之间无统计学意义(P>0.05);其他几组男女间均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),但总均值TP是女性高于男性(P<0.05),平均约高2.6g/L,ALB、A/G值是男性高于女性(P<0.01)。ALB值及A/G值的BCP法明显低于BCG法(P<0.001)。结论实验室在采用不同方法检测ALB时,应建立各自的ALB及A/G值的参考范围。     

同节段远近配穴电针对慢性根性痛大鼠脊髓P物质的影响

目的:探讨相同脊髓节段的远近配穴电针治疗慢性根性痛的相关机制。方法:采用慢性根性痛大鼠模型,将25只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、局部取穴电针组(C组,取双侧L4"夹脊"穴)、远道取穴电针组(D组,取双侧"阳陵泉")及远近配穴电针组(E组,取双侧L4"夹脊"+双侧"阳陵泉")。各电针组均采用2 Hz连续波低频电针治疗8 d,观察大鼠神经根压迫部位HE染色病理形态、步态恢复情况及电针前后痛阈变化,免疫组化法观察患侧脊髓背角P物质表达的变化。结果:各电针组步态恢复比B组进步;痛阈变化值随电针次数增加而增加,差异有显著性意义(P<0.05),但各电针组间痛阈变化值比较差异无显著性意义(P>0.05);与B组相比,A、C、D、E组患侧脊髓背角P物质的表达均明显减少(P<0.05),各电针组之间患侧背角P物质的表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论:2 Hz电针具有明显的镇痛作用,抑制P物质的释放可能是实现其镇痛作用的机制之一;相同脊髓节段的局部和远道取穴在抑制P物质的释放及对痛阈变化值的影响方面效果相当。     

has-miR-26b沉默载体的构建及验证

目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。