分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁区及其上游调控元件基因 ,克隆入E coli BCG穿梭载体 pOLYG中 ,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E coli BCG穿梭载体。用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT 6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达。结果　经测序证实所克隆的 19 ss基因序列正确 ,所构建的E coli BCG穿梭载体 (pCW )能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭 ,经免疫荧光检查外源基因Ag85B ESAT 6可融合表达于分枝杆菌宿主表面。 结论　本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B ESAT 6的E coli BCG穿梭质粒     

胃神经纤维瘤一例报告

胃神经纤维瘤罕见,易误诊。现将我院手术病理证实的一例报告如下。病历摘要,男,27岁。上腹隐痛、黑便、面色苍白4个月入院。伴有疲乏、头昏、眼花,但食欲好,不消瘦。体检:重度贫血病容,腹软,剑突下偏左侧可摸到一个约小儿拳头大肿块,质硬,可活动,有轻度压痛。其它未见异常。化验:RBC170万,Hb5.1g,     

肺分泌性腺癌脑转移一例

患者女,56岁.因言语不清10余天,于2012年10月18日入院.MRI示左侧额顶叶占位性病变,肿瘤呈类圆形异常信号,大小约3.3 cm×2.6 cm×2.2 cm,呈长T1长T2信号,内可见分隔及附壁结节,周围可见大片状水肿带,同侧胼胝体及侧脑室明显受压,中线见移位,T1W增强示肿瘤周边呈环形强化(图1).既往史:患者于23个月前曾行胸部MRI检查发现右肺上叶占位,22个月前行右肺上叶切除术,病理结果示右肺上叶分泌性腺癌(图2),支气管断端未见癌累及,淋巴结内见转移癌(图3).免疫组织化学结果示CK7、甲状腺转录因子(TTF)-1、E-cadherin阳性,p53、survivin弱阳性,CK5/6、突触素、嗜铬粒素A(CgA)、c-erbB-2、表皮生长因子受体(EGFR)均阴性,Ki-67阳性指数＞50％.     

高通量测序分析人诱导性多能干细胞分化为神经干细胞后microRNAs的表达变化

目的 筛选出人诱导性多能干细胞(hiPSCs)分化为神经干细胞(NSCs)后差异表达的microRNAs,为采用microRNAs调节hiPSCs诱导分化为NSCs的实验研究提供依据.方法 采用添加TGF-β信号通路抑制剂的单层贴壁培养法,将hiPSCs向NSCs进行为期7 d的诱导分化,收集并提取未分化的hiPSCs及诱导第7天的hiPSCs源性NSCs的总RNA,进行microRNAs高通量测序,生物信息学分析法筛选出hiPSCs分化为hNSCs后差异表达的mi-croRNAs,qPCR验证microRNAs的差异表达结果.结果 经过为期7 d的神经方向诱导,hiPSCs能高比例的转化为巢蛋白Nestin阳性、底板细胞Foxa2阳性及PAX6阳性的神经干细胞,经microRNAs高通量测序差异表达分析发现:hiPSCs分化为NSCs后具有统计学差异表达的microRNAs有429个(P<0.05),具有显著差异表达的microRNAs有343个,其中表达上调的microRNAs有186个,下调的157个.与调节hiPSCs向NSCs分化的关键信号通路TGF-β进行相关性分析发现miR-1247-3P、miR-34b-5p及miR-210-5p等20余个差异表达的microRNAs.结论 抑制TGF-β信号通路可以促进hiPSCs向Nestin阳性的NSCs的诱导分化,分化后的NSCs的microRNAs表达谱较hiPSCs有明显差异,提示有望通过调节与TGF-β信号通路相关的microRNAs的表达促进hiPSCs向NSCs的诱导分化.     

新广谱大肠杆菌噬菌体IME11的分离及鉴定

目的 分离广谱大肠杆菌噬菌体并对其进行种属的鉴定。方法 以不同种临床致病性大肠杆菌为指示菌,从未经处理的污水样品中分离噬菌体;采用蛋白酶K/SDS的方法提取噬菌体基因组,制备重组载体,将阳性重组质粒进行测序;将测序结果进行BLAST,推测该噬菌体种属分类位置。结果 分别以大肠杆菌E1 ～ E17共17种细菌作为指示菌,成功分离出一种广谱噬菌体,可裂解31株临床分离致病性大肠杆菌中的13株,并将其命名为IME11;由噬菌体基因组限制性酶切片段分析表明其遗传物质为dsDNA;将噬菌体IME11基因组的2个随机片段测序结果进行BLAST,推测其属于N4-like噬菌体属。结论 分离出了一种广谱噬菌体,在分类学上属于N4-like噬菌体属。     

日常生活能力评估在晚期肿瘤病人中的应用

目的:探讨日常生活能力评估在晚期肿瘤病人中的应用效果。方法:收集2019年4月—2019年6月入住我院肿瘤内科、肿瘤放疗科的晚期肿瘤病人364例,入院后常规给予日常生活能力(ADL)评估。根据ADL评估结果分为ADL正常组和ADL受损组,比较两组病人伴随的临床状况。针对有明显差别的伴随情况进一步行Logistic回归分析。最后比较两组病人住院期间并发症发生的差异。结果:共有56例(占15.4%)病人ADL出现受损,其中38例轻度受损(占67.9%),主要累及活动(52例,占92.9%)及洗澡(20例,占35.7%)。ADL受损组伴随贫血、低蛋白血症、肺炎、脑转移、疼痛、肝功能异常及腰椎转移的病人比例明显高于ADL正常组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,贫血、低蛋白、疼痛、肝功能异常及腰椎转移为影响晚期肿瘤病人ADL受损的伴随情况(P<0.05)。另外,ADL受损病人的跌倒、压疮、抑郁及生活质量受损的比例明显增多。结论:有15.4%的晚期肿瘤病人ADL受损,大部分为ADL轻度受损,较易累及洗澡和活动。贫血、低蛋白血症、疼痛、肝功能异常及腰椎转移与ADL受损具有相关性。ADL受损病人容易出现跌倒、压疮、抑郁及生活质量受损等不良事件。故有必要对晚期肿瘤病人行ADL评估,以减少并发症的发生,最终提高生活质量。     

不同正畸力值对哺乳期大鼠正畸牙周组织中HO-1 CC类趋化因子受体1及其配体的影响

目的 探讨不同正畸力值对哺乳期大鼠正畸牙周组织中血红素氧合酶(HO-1)、CC类趋化因子受体1及其配体的影响。方法 选择3月龄Wistar大鼠126只制备哺乳期大鼠模型,成功制备72只,按随机数字表法分为0N组、0.29N组、0.49N组及0.98N组,每组18只。每组依次给予0N、0.29N、0.49N及0.98N的正畸力,比较干预前1天及干预第1、3、7 天后4组大鼠的CC趋化因子受体1(CCR1)及其配体(CCL3、CCL5)mRNA相对表达量、HO-1表达及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)破骨细胞染色阳性面积。结果 干预第1、3天,0.29 N组、0.49 N组及0.98 N组CCR1、CCR3和CCL5 mRNA表达水平及破骨细胞染色阳性面积较0N组均明显增加(P<0.05),0.49N组及0.98N组上述指标水平较0.29N组均明显增加(P<0.05),而0.49N组与0.98N组这些指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 正畸干预可通过促进哺乳期大鼠牙周组织中HO-1、CCR1及其配体的表达发挥作用。     

辽宁省2005年国家监测点克山病病情监测结果分析

按照《关于继续进行克山病监测及防治工作的通知》（中地字[2005]2号）部署，辽宁省国家监测点区第3轮为期5年的克山病病情监测工作继续在清原县实施。现将首年监测结果报道如下。     

建立家兔梗阻性无精症模型对显微外科培训的实验性探讨

目的 建立家兔梗阻性无精症的动物模型,为男科医生“显微输精管附睾管吻合术”技能的培养寻找一种可行的方法.方法 依据月龄、体重及精液分析结果,筛选出38只健康5～6月龄加利福尼亚雄性大白兔作为实验对象.对家兔实施“双侧输精管近睾端结扎术”,以建立家兔梗阻性无精症模型.2月后取精检查,无精子发现后,家兔行双侧“显微纵向两针叠套式输精管附睾管吻合术”.术后2～4月内,对每只雄兔每月连续采精3次,每次间隔3d,连取3月结束实验.运用SCA精液分析仪行精液分析,并记录主要精液参数;若未见精子,先对精液标本离心处理,在高倍镜下检查精子有无,记录最终结果.结果 (1)家兔梗阻性无精模型建立实验中,1例家兔因睾丸附睾坏死、伤口感染死亡;1只因麻药推注速度过快,心脏骤停,余36例梗阻模型的建立进行顺利,术后无发热,元腹泻等; (2)吻合部分,2只家兔因为单侧输精管近端回缩与睾丸鞘膜、精索粘连严重,而只行单侧吻合,余34只实验进行顺利; (3)术后4月内,行精液分析辅助离心后检测,其结果显示:共23只雄兔精液中检测到精子,4只在离心后高倍镜下仅检测到少数精子而无精液分析结果.另3例中途曾检测到精子,继续实验又未见精子.结论 显微输精管附睾管吻合动物实验具有具有微创、简易、安全的特点,可作为临床男科医生开展“显微镜输精管附睾管吻合术”前的一种良好技能训练平台.     

表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的基因疫苗的免疫学特性

目的测定表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的两种重组质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法50只BALB/c小鼠随机分为5组(每组10只),将表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的两种重组质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF分别免疫小鼠3次,每次间隔2周,同时设卡介苗(BCG)免疫组、空载体质粒免疫组和生理盐水对照组。最后一次免疫结束后,每组取5只小鼠血清,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测特异性抗体的滴度,并分离小鼠的脾淋巴细胞,并在体外用结核分枝杆菌(MTB)培养滤液蛋白(cu lture filtrate prote in,CFP)刺激,测定脾淋巴细胞增殖指数和γ干扰素(IFN-γ)水平。用1 m l含1×105克隆形成单位(CFU)的MTB毒株H37Rv经尾静脉感染其余每组5只BALB/c小鼠,4周后计数脾脏细菌负荷数。结果质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF免疫小鼠血清的特异性抗体滴度分别为1∶1 000和1∶1 500。其脾淋巴细胞刺激指数分别为2.2和2.4,而生理盐水对照组和空载体质粒免疫组的刺激指数只有0.9和1.1;脾淋巴细胞悬液中诱发的IFN-γ分别为(5.48±0.38)ng/m l和(5.76±0.51)ng/m l,显著高于生理盐水对照组和空载体质粒免疫组(P<0.05),但与BCG免疫组的(5.55±0.31)ng/m l比较差异无统计学意义。结核毒株攻击后,与空载体质粒免疫组相比,质粒AZ-pcDNA3-EF和EZ-pcDNA3-AF免疫的BALB/c小鼠其抗MTB在脾脏中增殖有显著作用,3组脾脏细菌负荷对数值(lg,CFU/g)分别为6.08±0.25、4.63±0.11、4.50±0.32,但不及BCG免疫组的4.09±0.27。结论表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的基因疫苗在小鼠体内诱导的IFN-γ水平与BCG相当,其保护力有待进一步提高。