造影剂碘海醇300对肾功能影响222例分析

目的探讨造影剂对肾功能影响,引起造影剂肾病（CIN）的易患因素及其防治。方法选择接受冠状动脉造影术患者222例,检测术前、术后24h、72h的血尿素氮、血肌酐（cr）。对造影后24～72h血肌酐较原来增高25%或者44μmol/L以上定义为CIN。结果肾功能不全组CIN发生率20%,明显高于术前肾功能正常组的4.7%,差异具有显著性（P〈0.05）。非CIN患者,术中造影剂用量少,而术前补液量明显多于CIN患者,差异具有显著性（P〈0.05）。结论造影剂可引起一过性肾功能改变,CIN与造影剂剂量、补液量密切有关。     

骨髓基质干细胞移植与心肌重建研究进展

骨髓基质干细胞是来源于骨髓的多能干细胞，在体、内外能分化成多种起源于中胚层的组织。其分化与其周围环境变化有关，可能需要一系列调控因子的参与。哺乳动物心肌从中胚层发育而来。在出生后早期，心肌细胞的增殖能力丧失，又没有相应的干细胞，损伤后心肌细胞不能再生。因而，心肌损伤后(如心肌梗死)，常导致心肌细胞的不可逆性丢失和永久的功能丧失。植入外源性细胞是一个修复损伤心肌的、具有潜在临床应用价值的方法。骨髓基质干细胞在体、内外可诱导分化为肌源性细胞或心肌细胞。骨髓基质干细胞移植可以重建心肌，逆转左室重构，改善心功能，为心肌梗死提供一种新的治疗选择，有广阔的临床应用前景。     

骨髓基质干细胞移植与心肌重建研究进展

骨髓基质干细胞是来源于骨髓的多能干细胞,在体、内外能分化成多种起源于中胚层的组织。其分化与其周围环境变化有关,可能需要一系列调控因子的参与。哺乳动物心肌从中胚层发育而来。在出生后早期,心肌细胞的增殖能力丧失,又没有相应的干细胞,损伤后心肌细胞不能再生。因而,心肌损伤后(如心肌梗死),常导致心肌细胞的不可逆性丢失和永久的功能丧失。植入外源性细胞是一个修复损伤心肌的、具有潜在临床应用价值的方法。骨髓基质干细胞在体、内外可诱导分化为肌源性细胞或心肌细胞。骨髓基质干细胞移植可以重建心肌,逆转左室重构,改善心功能,为心肌梗死提供一种新的治疗选择,有广阔的临床应用前景。     

狗骨髓基质干细胞体外分化为肌源性细胞的初步观察

用贴壁法体外分离骨髓基质干细胞，实验组5—氮胞苷诱导，对照组加入等量培养基，用相差显微镜和免疫组织化学方法观察、鉴定培养细胞。探讨成年狗骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌细胞的可行性，为心肌梗死和心力衰竭的细胞移植治疗提供新的细胞系。结果表明，实验组诱导后4周，多数培养细胞由梭形变为杆状，免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白I染色阳性；对照组多数培养细胞为梭形，免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性，平滑肌肌动蛋白染色弱阳性，肌钙蛋白I染色阴性。结果提示，成年狗骨髓基质干细胞体外可诱导分化为肌源性细胞。     

强力霉素调控小NEIA激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立

背景：前期研究发现，E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化，但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。目的：建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系，拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础。设计、时间及地点：对比观察实验，于2006—05／2008—03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。材料：强力霉素调控基因表达系统，3T3细胞系。方法：通过反转录一聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基因阻遏子（mCREG）cDNA序列；将mCREGcDNA序列亚克隆入pRey—TRE载体中，构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev—TRE—mCREG载体；分别经G418（新霉素）及潮霉素筛选表达pRev-Tet—On、pRev—TRE—mCREG的NIH3T3细胞克隆；反转录聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达。主要观察指标：Western blotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达。结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRev—TRE—mCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3，mCREG细胞克隆；反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性；Western blotting检测发现随强力霉素诱导剂量的增加（O，O．01，0．1，1mg／L），NIH3T3．mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加。结论：成功建立强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系。     

经冠状动脉移植自体骨髓基质干细胞改善成年心肌梗死犬的心功能

目的：观察经冠状动脉注射成年犬自体骨髓基质干细胞对梗死后心功能的影响。方法：本实验于2001-05／2002-04在解放军第二军医大学附属长征医院心内科实验室完成。选用成年犬8只，随机分为细胞移植组5只，对照组3只。结扎犬冠状动脉前降支制备心肌梗死模型；细胞移植组将体外培养、诱导的自体骨髓基质干细胞标记后在心肌梗死后4周经冠状动脉植入心脏；对照组植入等量培养基。胸内心脏超声检查测定左冠状动脉血流阻断前，再灌注后30min及移植后4周左心室射血分数；胸外心脏超声检查测定左冠状动脉血流阻断前、移植前、移植后4周左心室射血分数。用成组￡检验和随机区组方差分析完成统计学分析。结果：进入结果分析犬8只。①植入的骨髓基质干细胞在移植犬心肌组织内存活情况：细胞移植组免疫组织化学检查结蛋白及肌钙蛋白Ⅰ染色阳性，表示已生成心肌样细胞。对照组心脏标本中可见瘢痕组织；心肌细胞结蛋白染色阴性，肌钙蛋白Ⅰ染色阳性。②移植犬左室功能的左室射血分数：经胸外心脏彩色多普勒超声检查提示，细胞移植组细胞移植前明显低于血流阻断前和移植后4周[(54．86&;#177;7．12)％，(61．78&;#177;5．37)％，(61．74&;#177;2．93)％，P&;lt;0．01]；细胞移植组细胞移植后4周接近血流阻断前(P&;gt;0．05)；对照组移植后4周和移植前明显低于血流阻断前(P&;lt;0．01)。③移植犬左室功能的左室射血分数：经胸内心脏彩色多普勒超声检查反映，细胞移植组再灌注后30min明显低于血流阻断前和移植后4周[(49．98&;#177;6．79)％；(61．56&;#177;3．71)％，(64．56&;#177;5．27)％，P&;lt;0．01]。移植后4周明显高于血流阻断前(P&;lt;0．05)。对照组移植后4周和再灌注后30min明显低于血流阻断前(P&;lt;0．05，0．01)。结论：成年心肌梗死犬自体骨髓基质干细胞经冠状动脉移植后，在心肌组织内存活并分化为肌源性细胞使左心室功能改善。     

分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究

目的：探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法： 构建强力霉素（Dox）调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体；分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆；RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达；Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后，HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达；流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后，hCREG表达与细胞增殖的关系。结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆；RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性；Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1 mg/L)，HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加；流式细胞周期分析提示，hCREG表达增加后，HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加。结论： hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖。     

强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立***☆

背景：前期研究发现，E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化，但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。 目的：建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系，拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2006-05/2008-03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。 材料：强力霉素调控基因表达系统，3T3细胞系。 方法：通过反转录-聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基因阻遏子（mCREG） cDNA序列；将mCREG cDNA序列亚克隆入pRev-TRE载体中，构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev-TRE-mCREG载体；分别经G418（新霉素）及潮霉素筛选表达pRev-Tet-On、pRev-TRE-mCREG的NIH3T3细胞克隆；反转录-聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达。 主要观察指标：Western blotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达。 结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRev-TRE-mCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3-mCREG细胞克隆；反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性；Western blotting检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0，0.01，0.1，1 mg/L)，NIH3T3-mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加。 结论：成功建立强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系。