奥密克戎变异株BF.7及BA.5.2感染新生儿的临床特征

目的：探讨新型冠状病毒(新冠病毒)奥密克戎变异株BF.7及BA.5.2感染新生儿的临床特点,并且对感染不同亚型病毒株新生儿的临床特征进行比较。方法：选取2022年12月收治的疑似新冠病毒感染的新生儿,进行病毒核酸检测及分型, 分析核酸阳性患儿的临床特点、实验室检查及转归,比较新生儿感染不同亚型病毒株的临床特征的差异。结果：新冠病毒核酸检测阳性新生儿43例,其中无症状感染2例,轻型37例,重型4例。轻型病例均表现为上呼吸道感染症状,其中3例伴有消化道症状;重型病例中3例表现为呼吸道症状,1例表现为消化道症状。症状性感染新生儿住院时间5.0(4.0,7.0)d,所有病例均治愈出院,大多数新生儿出院后随访无异常临床表现。对病毒载量较高的33例样本行全基因测序,显示14例为奥密克戎变异株BF.7亚型,19例为BA.5.2亚型。BA.5.2病例中,2例为重型,17例为轻型,4例存在消化道症状;而BF.7组中,2例为无症状, 12例为轻型,无病例表现为消化道症状。两组患儿在发病年龄,住院时间,发热、咳嗽、惊厥发生率,实验室检查方面,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：新生儿感染新冠病毒奥密克戎变异株后,临床以轻症、呼吸道症状为主,少数表现为消化道症状;感染BA.5.2亚型后,部分患儿出现消化道症状,少数患儿出现重型临床表现,奥密克戎变异株BA.5.2引起消化道症状、重症的发生率是否比BF.7更高需要进一步大样本的研究。     

抗HBsAg人源抗体Fab片段原核表达的优化

目的:优化抗HBsAg人源抗体片段hFabHB1在大肠杆菌中功能性表达的条件.方法:通过测定宿主菌培养物A600值观察10 g/L的葡萄糖对宿主菌生长的影响;比较诱导前是否更换培养液的2种不同条件hFabHB1的表达产量;比较在37℃和25℃ 2种诱导温度下功能性hFabHB1分子的表达量以及Fd和轻链表达的平衡性.大量表达的功能性hFabHB1分子经亲和层析纯化后,用ELISA鉴定其生物活性.结果:在培养液中加入10 g/L的葡萄糖可有效抑制重组蛋白的本底表达,增加宿主菌的生长速度;在加入IPTG诱导前更换培养液可明显提高hFabHB1的表达产量;25℃的诱导温度比37℃能表达更多的功能性Fab分子,并且Fd和轻链表达量也更趋于平衡.经亲和层析纯化的hFabHB1分子可与HBsAg特异性结合.结论:实验结果为在原核系统中大量表达该抗体片段提供了技术储备.     

多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术检测呼吸道病原体

目的 建立一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法.方法 针对几种重要的呼吸道病原体(甲型流感病毒、乙型流感病毒、SARS冠状病毒、嗜肺军团菌、脑膜炎奈瑟菌以及腺病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应、核酸侵入反应及纳米金显色反应,对多种呼吸道病原体同时进行检测,以人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、肺炎链球菌4种呼吸道病原核酸评价其检测特异性,以体外转录的病毒RNA或扩增的PCR片段评价其检测敏感性.结果 成功建立了一种呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测技术.建立的检测方法可特异的检测目的病原体,且与人偏肺病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、肺炎链球菌无交叉反应.该方法对不同靶标的检测灵敏度介0.5 ～50拷贝/μL.结论 建立的呼吸道病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术的检测方法,具有较高的检测特异性及灵敏度,检测通量高,肉眼即可观察结果,在传染病病原体检测方面具有广阔的应用前景.     

2012年江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒携带状况调查

目的了解江苏部分地区动物中发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)携带状况,探讨其可能的传播媒介和自然宿主。方法 2012年3月~12月在江苏省发现发热伴血小板减少综合征病例的7个市/县,采集鼠、牛、羊、刺猬、鸟类和蜱等动物标本,提取总核酸后,应用实时荧光RT-PCR法对标本进行布尼亚病毒S基因核酸的检测,阳性标本采用Vero细胞进行病毒分离。结果采集761只(管)动物,43只(管)检出SFTSV核酸阳性,阳性率为5.65%。采集3 728份标本,阳性49份,阳性率为1.31%。鼠的病毒携带率最高(6.84%),蜱标本阳性率最高(4.94%)。除蜱标本外的3 647份标本中检出阳性45份,阳性率为1.23%,不同器官阳性率分别为淋巴结(50.00%)、血清(2.34%)、脾(1.64%)、心(1.64%)、肝(1.28%)、肺(1.09%)、脑(0.94%)、肾(0.73%)、血块(0.41%)。5月标本阳性率最高(4.01%)。从1份羊血清及其体表1份蜱标本中各分离出1株SFTSV病毒。结论鼠、牛、羊和蜱均可携带SFTSV,可能是其自然宿主或传播媒介。     

Stx1B基因克隆、表达及重组蛋白的纯化

目的构建志贺样毒素1B亚单位(Stx1B)的原核表达载体,获取高纯度的Stx1B重组蛋白。方法用PCR法扩增Stx1B,通过基因重组技术克隆入原核表达载体pGEX4T-2,将该重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析及Westernblot检测。结果重组质粒经诱导后表达分子量为34kD的重组蛋白,Western blot检测显示特异性条带,亲和层析柱纯化后得到重组蛋白的纯度在90%左右。结论成功构建了Stx1B重组质粒,表达并纯化出高纯度重组蛋白,为进一步的生物性质研究奠定了基础。     

人感染新型布尼亚病毒病临床和流行病学特征分析

【摘要】目的：分析人感染新型布尼亚病毒病的临床特点和流行病学特征,为制定预防控制措施提供依据。方法：采用统一的诊断标准和流行病学个案调查表对病例进行调查。结果：33例疑似病例中有20例确诊人感染新型布尼亚病毒病,病死率为30%。临床表现主要为发热（100%）、乏力（80%）、畏寒和呕吐（60%）;血常规检查有血小板计数减少（100%）和白细胞计数减少（90%）;病例多来自丘陵地区,以男性、中老年、农民为主,发病时间呈两个高峰,分别为6～7月和9～10月,部分病例发病前有明确的蜱叮咬史。结论：SFTS病例发病初期临床症状不典型,发病有地域特征,散发病例多见,但不排除人与人传播的可能。     

高通量测序H7N9禽流感病毒基因组模板制备方法的优化及应用

目的:建立一种较优的高通量测序H7N9禽流感病毒基因组模板制备方法,用于H7N9禽流感病毒基因组监测?方法:分别以6碱基随机引物反转录生成单链cDNA,合成双链cDNA;流感病毒通用反转录引物U12反转录生成单链cDNA,6碱基随机引物合成双链cDNA;U12引物反转录生成单链cDNA,通用流感病毒全基因扩增引物混合物生成双链cDNA制备高通量测序模板?构建测序文库?测序并分析数据,比较3种方法对高通量测序效率的影响,并与传统Sanger测序方法比较其测序的准确性,选择其中较优的方法用于高通量测序?结果:以U12引物反转录cDNA,通用流感病毒全基因扩增引物混合物生成双链cDNA制备的高通量测序模板,在测序族生成数?覆盖率?单核苷酸多态性及读长等方面均优于另外两种方法?结论:本研究建立的H7N9禽流感病毒基因组模板制备方法用于高通量测序具有准确性高,周期短,成本相对较低,可同时检测多个样本等特点,可用于大规模H7N9禽流感病毒基因组监测?     

SOS／Umu试验及其应用

SOS Umu试验 (又称umu试验 )是 80年代中期发展起来的检测环境诱变物的短期筛选试验 ,它是基于DNA损伤物诱导SOS反应而表达umuC基因的基础上建立起来的。该方法具有快速、敏感、廉价等优点 ,因而被广泛应用于遗传毒理学研究、酶代动力学分析、环境监测与质量评估以及药效学评价和新药筛选等方面。本文对其实验原理、操作过程及其应用等作一综述     

059SOS/Umu试验及其应用

SOS/Umu试验(又称umu试验)是80年代中期发展起来的检测环境诱变物的短期筛选试验,它是基于DNA损伤物诱导SOS反应而表达umuC基因的基础上建立起来的.该方法具有快速、敏感、廉价等优点,因而被广泛应用于遗传毒理学研究、酶代动力学分析、环境监测与质量评估以及药效学评价和新药筛选等方面.本文对其实验原理、操作过程及其应用等作一综述.     

细胞周期素与膀胱关系的研究进展

细胞周期素是细胞周期调节的重要因子,和膀胱肿瘤的发生发展密切相关.细胞周期素的表达对判断肿瘤的生物学特征、预后有重要的意义,针对细胞周期素的特异抑制剂有望为膀胱癌的防治提供新的策略.