原发老年性痴呆淀粉样β25～35多肽诱导乙酰胆碱能受体缺损的研究

目的探讨活性肽段Aβ25～35是否可以直接改变神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAchRs)亚型的表达及其机制.方法实验于2002/2003在瑞典皇家医学院老年病研究所中心进行.采用配体结合实验以及Western Blot,RPA法,观察在Aβ25～35侵害早期,PC12细胞损伤机制.结果用nmol浓度Aβ25～35能明显降低PC12细胞nAchRs结合位点数量,引起α7等亚单位蛋白和mRNA水平不同程度的下降,Aβ25～35(0.1～100 nmol/L)作用后,[3H]epibatidine结合力平均显著下降37.4%,Aβ25～35(10～100 nmol/L)共同孵育,[125I]α-BTX结合力平均降低为28.2%.α7亚单位随Aβ25～35(1～100 mol/L)呈剂量依赖性递减分别为23.4%,α3亚单位随Aβ25～35(0.1～100 nmol/L)呈剂量依赖性递减分别为42.8%.α7亚单位mRNA水平随Aβ25～35(1～100 nmol/L)呈浓度依赖性下降分别为33.8%.对照组反转肽段Aβ35～25对PC12细胞nAchRs结合位点,α3,α7,β2亚单位的蛋白和mRNA水平无明显影响.nmol浓度Aβ25～35与nAchRs的特异结合力较弱,但明显抑制细胞活性.结论在AD病程早期,Aβ可直接引起nAchRs退行性改变;细胞内在信号传导系统的失衡可能是引起nAchRs生物合成降低的原因之一.     

灯盏细辛组分对脑神经细胞损伤保护作用的谱效关系研究

目的:研究灯盏细辛中各组分对神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞的保护作用,探讨其在阿尔茨海默病(AD)治疗中的作用物质基础。方法:用柱色谱技术将灯盏细辛提取物划分为3个极性组分,并采用正交法将其配伍,以细胞MTT还原率、脂质过氧化产物(丙二醛,MDA)、神经型尼古丁受体α7蛋白表达等为活性指标,研究灯盏细辛各配伍组分对β-淀粉样肽(Aβ)损伤神经细胞的保护作用;将各配伍组分活性信息与其相应的UPLC指纹图谱化学信息进行方差分析和相关性分析研究,推测活性物质基础。结果:谱效相关性研究发现,灯盏细辛在指纹图谱中的B,C组分段具有明显活性;其中4,7~12号色谱峰与活性呈现正相关。结论:通过谱效研究,推测了灯盏细辛体外对抗Aβ神经细胞毒性的活性组分以及化学成分。为灯盏细辛深层次研究开发奠定一定的实验基础。     

天参益智方对老年痴呆模型学习记忆能力及Aβ1-40的影响

目的研究天参益智方（TSYZ）对AD大鼠模型学习记忆障碍的保护作用，探讨其对AD大鼠脑内Aβ1-40沉积的影响。方法以慢性铝中毒法复制AD大鼠模型，用Moriss水迷宫法检测AD大鼠学习记忆能力；采用免疫组化法检测AD大鼠海马和皮质Aβ1-40。水平。结果天参益智方治疗组逃出水迷宫的时间及搜索距离显著低于模型对照组（P〈0．05，P〈0．01），大鼠海马和皮质的平均灰度值显著升高（P〈0．01），Aβ1-40水平明显低于模型组。结论天参益智方明显减少AD大鼠脑组织中Aβ1-40沉积，这可能是其改善AD大鼠学习记忆功能作用机制之一。     

灯盏乙素对痴呆大鼠脑组织乙酰胆碱尼古丁受体蛋白及mRNA表达的作用

目的:观察灯盏乙素对痴呆模型大鼠乙酰胆碱尼古丁受体(nAChR)亚单位蛋白质和mRNA水平表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:Wistar大鼠42只,随机分为5组,正常对照组(6只)、假手术组(6只)、学习记忆损伤模型组(6只)、灯盏乙素处理组(10只)和脑复康处理组(10只)。用双侧脑室注射β淀粉样蛋白     

RNA干扰抑制α3神经型尼古丁受体的表达对SH-SY5Y神经细胞抗氧化能力的影响

目的：探讨通过RNA干扰技术抑制α3神经型尼古丁受体（nAChR）基因表达后该受体对神经细胞抗氧化能力的影响,了解α3nAChR的神经保护作用。方法：设计并体外合成α3nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸,退火后克隆至pSilencer 3.1-H1neo质粒中,构建重组质粒α3nAChR pSilencer3.1-H1neo。将α3nAChR pSilencer 3.1-H1neo转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用即时荧光定量PCR和Western blot方法检测转染细胞中α3nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化。用1μmol/Lβ-淀粉样肽1-42（Aβ1-42）处理转染细胞后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定细胞活力;用比色法测定其指质过氧化产物含量、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果：成功构建α3nAChR siRNA表达质粒,转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α3nAChR mRNA及蛋白表达量均降低（抑制率分别为98%和66%）;经转染处理的细胞活力明显低于对照组,细胞中脂质过氧化产物丙二醛含量明显增加,超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性不同程度的降低;抑制α3nAChR基因表达后能增强Aβ的神经细胞毒性作用。结论：成功构建的α3nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3nAChR基因表达,α3nAChR基因表达抑制后可引起氧化应激水平升高,并增加Aβ的神经毒性,表明α3nAChR具有一定的抗氧化能力和神经保护作用。     

贵州省3个少数民族线粒体DNA 9 bp序列缺失频率的分析研究

目的 探讨贵州省3个少数民族线粒体DNA(mtDNA)9 bp序列缺失频率情况.方法 随机选取贵州省雷山县苗族(69例)、荔波县布依族(70例)、荔波县水族(44例)共183例男性血液标本,应用PCR及直接测序检测线粒体DNA 9 bp序列缺失情况.结果 在贵州省3个少数民族样本中发现标准型、缺失型、3型,缺失频率最高为荔波县水族(40.91%),雷山县苗族中检出3型1例,3个少数民族群体间mtDNA 9 bp缺失频率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 3个世居少数民族mtD-N A 9 bp缺失频率不同,水族的遗传变异较大,水族与苗族的亲缘关系相比水族与布依族较近.     

H2S 在缺血再灌注损伤中神经细胞自噬发生机制中的作用研究

目的：利用siRNA 干扰技术干扰H2S 生成的关键酶胱硫醚β- 合成酶（cystathionine β-synthase,CBS）基因并构建细胞氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,探讨OGD/R 和CBS 基因干扰后SH-SY5Y 细胞自噬和凋亡情况及相关信号通路变化。方法：构建OGD/R 模型,体外模拟缺血再灌注过程,根据氧糖剥夺和再灌注时间不同共设9 组,利用透射电镜观察各组细胞OGD/R 后细胞内自噬小体形成情况,根据透射电镜结果选取氧糖剥夺
4 h/ 再灌注24 h 作为后续实验的OGD/R 模型;脂质体转染法将针对CBS 基因的siRNA 转入SH-SY5Y 细胞内,同时构建OGD/R 模型,将细胞分为3 个组,分别为CBS 干扰组,OGD /R 组和CBS 干扰+OGD/R 组,各组均设相应对照。Real time PCR 和蛋白印迹法鉴定CBS 基因干扰效率,并检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1 和信号通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平,以及凋亡信号通路中NF-κBp65、COX-2 蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果：透射电镜观察细胞内自噬小体：除正常对照组和氧糖剥夺4 h/ 再灌注12 h 组未观察到自噬小体外,其余各组均在胞质内观察到了较多自噬小体。CBS 基因干扰效率达80%。CBS 干扰组自噬相关蛋白及相关信号通路蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平与阴性对照组比较均无统计学差异;OGD/R 组与正常对照组比较,OGD/R 组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 明显高于正常对照组, p-Akt/Akt 和p-mTOR/mTOR 均明显降低,NF-κBp65、COX-2 蛋白表达水平均高于正常对照组;CBS干扰+OGD/R 组与对照组比较,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR 均无显著差异。CBS 干扰组细胞凋亡率与阴性对照组比较无统计学差异;与正常对照组比较OGD/R 组细胞凋亡率明显高于正常对照组;CBS 干扰+OGD/R 组与阴性对照组比较,细胞凋亡率无显著差异。结论：OGD/R 能够明显诱导SH-SY5Y细胞发生自噬和凋亡,且可能与Akt/mTOR 及 NF-κBp65/COX-2 信号通路相关;CBS 基因干扰后对细胞自噬和凋亡均无明显影响。     

脂质体法与电穿孔法转染两种细胞效率的比较

目的：对比脂质体与电穿孔法对 HepG2、SGC7901/ADM 两种细胞的转染效率。方法以 HepG2、SGC7901/ADM细胞为研究对象,采用脂质体法和电穿孔法分别转染pcDNA3．1‐EGFP质粒,流式细胞仪计算细胞存活率,借助绿色荧光标志蛋白eGFP测算转染效率。结果利用脂质体转染eGFP质粒至HepG2细胞所获得的阳性转染率为（20．8±2．1）％,而电穿孔法转染效率增高至（49．6±2．5）％,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。利用脂质体转染eGFP质粒至SGC7901/ADM细胞所获得的阳性转染率为（25．4±1．3）％,而电穿孔法转染效率增高至（52．6±2．1）％,二者比较差异亦有统计学意义（P＜0．05）。结论使用电穿孔法能明显提高大片段载体的转染效率。     

贵州省3个少数民族 HLA-G基因14 bp插入/缺失的多态性研究

目的：了解贵州省3个少数民族（布依族、水族、苗族）群体人类白细胞抗原-G（ HLA-G）基因14 bp插入/缺失多态性的分布规律及其与遗传背景之间的关系。方法：采用PCR扩增、电泳及测序的方法对来自贵州地区的布依族、水族、苗族共344例健康个体DNA进行HLA-G基因14 bp插入/缺失多态性检测,并与文献报道的仡佬族、壮族等13个民族群体的HLA-G基因14 bp插入/缺失多态性分布数据进行对比。结果：布依族、水族和苗族人群的+14 bp 等位基因频率分别为23.7%、26.0%和38.1%,+14 bp/+14 bp 基因型频率分别为9.40%、10.4%和15.9%,14 bp插入频率比较示布依族和苗族差异有统计学意义（χ2=11.345,P=0.001）,苗族与水族差异有统计学意义（χ2=6.125,P=0.009）而布依族和水族间比较差异无统计学意义（ P>0.017）;与其他人群数据比较,苗族群体的14 bp插入/缺失分布与其他人群相似,而作为壮侗语族的布依族、水族则有自己独特的14 bp插入/缺失分布规律。结论：布依族、水族人群的14 bp插入/缺失分布相似,但是与苗族人群的分布存在一定的差异。     

慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶表达水平观察

[摘要]目的：观察慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导激酶表达变化,进一步揭示慢性氟中毒神经损伤的分子机制。方法：SD大鼠随机分为3组：对照组、低氟组、高氟组,每组24只,