抗结核分枝杆菌抗原优势肽段单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备和初步鉴定抗结核分枝杆菌抗原优势肽段的单克隆抗体。方法:以两种优势肽段的融合抗原PGEX-4T-2/38kD-ESAT6-CFP10和PGEX-4T-2/Mtb8.4-MPT64-Mtb16.3-Mtb8作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合后,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blotting分析单抗的特性和特异性。结果:获得17株结核分枝杆菌抗原优势肽段特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA方法测定,杂交瘤细胞培养上清效价为28～212,接种小鼠的腹水效价为216～220。Western blotting结果显示,每株单抗均能特异性的识别融合蛋白的优势肽段。结论:制备了针对抗结核分枝杆菌抗原优势肽段的单克隆抗体,为结核分枝杆菌的快速诊断和抗原性分析奠定了基础。     

稳定表达人MAGE-1基因的小鼠细胞系的建立与鉴定

目的：克隆人黑素瘤抗原-1（MAGE-1）基因，构建真核表达载体，建立稳定表达人MAGE-1的小鼠细胞株。方法：提取人肝癌细胞的总RNA，RT-PCR法获得人MAGE-1cDNA，将测序正确的MAGE-1基因克隆至真核表达载体pcDNA3中，进行酶切鉴定和序列测定。将重组质粒pcDNA／MAGE和空载体pcDNA3分别转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2／0中，经G418筛选获得稳定表达株，用RT-PCR和Western印迹检测MAGE-1基因的转录及蛋白表达。结果：从肝癌细胞中成功克隆到人MAGE-1基因，经测序证明基因正确，酶切和序列测定表明，人MAGE-1基因的真核表达质粒已成功构建。将此重组质粒转入的SP2／0细胞可稳定表达人MAGE-1基因。结论：成功构建可稳定表达人MAGE-1基因的小鼠转基因细胞，为MAGE-1的免疫治疗研究奠定了基础。     

慢性丙型肝炎病毒感染者体内抗第一高变区抗体的变化规律

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)感染者在慢性致病过程中抗HVR1抗体的变化规律.方法:分别利用融合HVR1抗原和多靶点HVR1抗原组合包被酶联板,采用间接酶联免疫法,检测不同阶段慢性HCV感染者体内HVR1抗体存在情况及HVR1抗体的异质程度.结果:在42份无临床症状、41份慢性肝病变、38份肝硬化患者中HVR1抗体的检出率分别为90.5%、95.1%和94.7%,并无显著差异(P>0.05);而这3组患者血清中HVR1抗体异质程度分别为5.39±3.75、11.74±3.29和10.61±4.09;慢性肝病变和肝硬化患者组的抗体异质程度要显著高于急性患者组(P<0.01).结论:HCV慢性感染的严重程度与HVR1抗体的异质程度相关,但与HVR1抗体的存在情况无关.     

不同pH包被液对丙型肝炎病毒抗原反应性的影响

我们结合承担“八·五”、“九·五”攻关课题，对合成多肽和重组表达的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原，以不同ｐＨ缓冲液稀释抗原后包被酶联板，对测定结果的影响进行了比较，得出不同抗原的最佳ｐＨ，报道如下。一、材料和方法１－合成多肽和重组融合抗原：从ＨＣＶ基因编码蛋白中，选择了已证明具有较强抗原反应性的４个亲水性较强的片段，用化学合成法合成了不同长度ＨＣＶ核心区蛋白（ＣＰ９）、ＣＰ１０、ＣＰ７０；非结构区多肽抗原（５１１）。利用基因工程重组技术表达了ＨＣＶ核心区和非结构区３（Ｃ－ＮＳ３）融合的优势抗原［１，…     

慢性丙型肝炎第一高变区抗体与HCV RNA病毒滴度相关性的研究

[目的]探讨慢性丙型肝炎患者第一高变区抗体与HCVRNA滴度的关系。[方法]采用计算机软件辅助分析确定27条HVR1基因序列，并克隆表达了系列重组HVR1抗原。应用27条不同的HVR1抗原包被酶联板，采用间接ELISA法测定慢性丙型肝炎患者样品HVR1抗体，并利用定量RT—PCR对病人血样完成HCVRNA测定，根据测定HCVRNA病毒滴度分为6组，10^2、10^3、10^4、10^5、10^6、10^7，每组6人，分别与27条不同的HVR1抗原进行反应，测定抗HVR1抗体，分别计算每组每种HVR1抗原的OD平均值。[结果]10^2、10^3、10^4组对27条HVR1抗体反应OD平均值均低于10^5、10^6、10^7组，而10^5组对27条HVR1抗体反应OD平值均最高。随着HCV RNA滴度的升高，27条HVR1抗体反应OD平均值略有下降。[结论]慢性丙型肝炎患者多种HCV第一高变区抗体与HCVRNA病毒滴度有一定的关系。     

丙型肝炎病毒核心蛋白不同区段在HEK293T细胞内的定位

目的：为进一步探讨HCV核心蛋白致癌机制，观察了HCV核心蛋白不同区段在HEK293T细胞内的定位情况。方法：构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和不同长度核心蛋白区段融合表达的pEGFP-C1系列重组载体，对HEK293T细胞进行瞬时转染，并在激光扫描共聚焦显微镜下观察核心蛋白不同区段在细胞内的定位。结果：全长核心蛋白定位于细胞质；核心蛋白1-59aa区段完全定位于细胞核；50～140aa区段和1-140aa区段在细胞核和细胞质中均存在；130～191aa区段完全存在于细胞质中。结论：核心蛋白不同区段在细胞内的定位不同，将导致其参与细胞调节的途径和功能的不同。     

人重组谷氨酸脱羧酶65基因的克隆表达及其在1型糖尿病诊断中的初步应用

目的 构建人重组谷氨酸脱羧酶65(GAD65)基因不同区段原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证GAD65不同抗原区段在1型糖尿病GAD自身抗体检测中的价值.方法 应用巢式逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术调取目的 基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌E.coli HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,用重组蛋白作为包被抗原,初步建立检测GAD自身抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)方法,评价各片段在1型糖尿病诊断中的价值.结果 获得了4种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人GAD抗原区段,其中GAD65(180-585)抗原区段具有很好的特异性,检出率为55.3%,是首选的抗原区段.结论 所选重组人GAD65(180-585)抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原.     

慢性丙型肝炎患者HCV不同功能区抗体的随访研究

目的　探讨慢性丙型肝炎患者不同功能区抗体的免疫应答。方法　利用基因重组克隆表达丙型肝炎病毒HCV c、NS3、NS4、NS5和HVR1抗原 ,分别包被酶联板 ,以间接ELISA法检测 1991～ 2 0 0 2年采集的 5 8名丙型肝炎患者的 14 4份血清不同功能区抗 HCV。结果　其中 5 0名 (86 .2 0 % )慢性丙型肝炎患者血清 5种相应抗 HCV呈持续阳性。结论　慢性丙型肝炎患者体内HCV c、NS3、NS4、、NS5和HVR1抗体无明显变化 ,未发现这 5种抗体与自愈的关系。     

人C反应蛋白的发光免疫测定

C反应蛋白(CRP)在正常人血清中含量甚低(1～3μg/ml)。在个种炎症及组织损伤的患者血清中可升高数十倍。甚至数百倍。利用发光物质代替同位素标记的发光免疫测定法(LIA),既具有放射免疫法(RIA)的灵敏度高,特异法强的优点,又无同位素污染和需要防护的缺点。本文以6[N—(4—氨     

重组HIV抗原和多表位抗原的研究

目的研究重组HIV病毒系列抗原,以满足HIV各种抗体检测试荆研究的需要。方法从HIV-1／2不同抗原中精选出优势抗原片段,分别用PCR方法从编码全长HIV-1基因的pBHIOR2／HIV质粒中扩增出HIV-1／gpl20、HIV-1／GP41及HIV-1／“M”优势抗原表位,用基因合成法,合成HIV-1／“0”和HIV-2／gp36基因,将获得的各基因片段插入到pBVIL1载体,使其在HB101中表达。利用载体pBVILl具有使小分子肽基因间可方便连接的特点,选择优势抗原表位进行连接和嵌合表达。结果与结论所克隆的单片段及嵌合抗原均在大肠杆菌中获得了高效的表达,纯化的单片段及多表位嵌合抗原经用间接EIA法对HIV阴性和阳性血清测定,表明抗原已满足抗体检测试剂盒的要求。得到的单片段抗原可用于LIA测定,而多表位嵌合抗原,可用于EIA筛检试剂。