AdKDR-CDglyTK系统对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的研究腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子受体(KDR)启动子驱动CD/TK双自杀基因系统对血管内皮细胞及结直肠癌肿瘤细胞的选择性杀伤作用。方法质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK和pAdEasy-CMV-CDglyTK在293细胞中包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV304、SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-氟胞嘧啶(5-FC)及更昔洛韦(GCV)处理,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果两种病毒滴度均为2.0×1012pfu/ml。两种重组体对各细胞株的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR方法检测发现:除感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞外,感染AdCMV-CDglyTK的所有细胞及感染AdKDR-CDglyTK的其他两种细胞均有目的基因CDglyTK的表达。该体系治疗结果提示:(1)感染AdCMV-CDglyTK的所有细胞株和感染AdKDR-CDglyTK的ECV304、SW620细胞对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无显著性意义(均P>0.05),与前两者相比感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(均P<0.001);(2)双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因的疗效(均P<0.001);(3)该体系旁观者效应明显。结论KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的血管     

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的　探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系,对人脐血管内皮细胞ECV30 4的选择性杀伤作用。方法　将质粒pAdEasy -KDR- CDglyTK在2 93细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV30 4细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5 - 氟胞嘧啶(5 -fuorocytosine ,5 -FC)和/或丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV) ,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果　所得病毒对两种细胞细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加;表达KDR的ECV30 4细胞对前药的具有较高的敏感性,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0 . 0 1) ;融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0 . 0 1) ;且观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测治疗后ECV30 4细胞G1期比率增多及S期细胞减少(P均<0 . 0 1) ,同时,电镜下可见ECV30 4有凋亡和坏死改变。结论　KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞。     

猪Calsarcin-2基因编码区的克隆及组织表达谱分析

目的克隆猪Calsarcin-2（Cs-2）基因,并探讨其在猪组织中的表达特点。方法利用RT—PCR方法扩增猪Cs-2基因编码区的序列;采用Northern杂交和半定量RT—PCR方法在猪不同组织和不同部位骨骼肌中分析Cs-2基因表达情况及转录本个数、大小。结果猪Cs-2基因片段长934bp,含有1个897bp的开放阅读框（ORF）,编码298个氨基酸,与已报到的人Cs-2基因氨基酸序列相似性为93％;猪Cs-2基因仅在骨骼肌中表达,不同骨骼肌中表达量有所不同,以背最长肌最高;此基因在骨骼肌中只有一个转录本,大小为1．26kb。结论猪Cs-2基因序列与已报道的人、鼠Cs-2基因具有高度同源性,主要在骨骼肌中特异表达。     

双自杀基因系统对乳腺癌细胞体外特异性杀伤作用

目的: 探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体外靶向杀伤作用。 方法: 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,并以RT-PCR、Westernblot方法检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;电镜观察细胞的病变;用流式细胞术观察细胞内DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。 结果: 腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR和Westernblot检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的基因和蛋白的表达,而乳腺上皮细胞无表达。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感。在感染复数为100时,电镜下可见用药组MCF-7细胞有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;且随着前药浓度的升高转基因细胞内Caspase-3活性逐渐升高。 结论: VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,细胞内Caspase-3活性升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

超声乳化手术的围术期护理

白内障是我国主要致盲眼病之一,其治疗方法主要是通过手术来改善及提高视力。随着我国的眼科技术不断发展及边缘科学的渗透,眼科复明手术的技术正在迅猛发展。白内障超声乳化吸出联合人工晶体植入术的诞生,是白内障史上一次历史性的转变,成千上万的白内障患者通过这一安全、高效的手术方式得到了不同程度的视力改善。与此同时,白内障患者的手术护理也在原有的基础上得到迅速发展和改进,从而满足了不同层次的患者生理和心理的需求。2008年1～5月安阳市眼科医院眼科共完成白内障超声乳化手术655例,现将护理工作中的经验及心得介绍如下。     

下肢骨搬运治疗患者运动康复方案的构建

目的 构建下肢骨搬运治疗患者的运动康复方案,旨在规范专科管理和护理实践,促进患者康复。方法 基于循证方法检索国内外文献,结合内容分析法拟定下肢骨搬运治疗患者的运动康复方案初稿。2021年4月—6月,运用德尔菲法对21名专家进行2轮函询,根据专家意见修改并确立下肢骨搬运治疗患者的运动康复方案终稿。 结果 2轮函询的专家积极系数分别为84.00%和100%,权威系数为0.89,协调系数分别为0.10和0.17（P<0.001）,最终形成的下肢骨搬运治疗患者运动康复方案包括5项一级指标、15项二级指标、28项三级指标。 结论 该研究构建的下肢骨搬运治疗患者运动康复方案兼具科学性和实用性,可为下肢骨搬运治疗患者的康复和护理提供理论依据和实践方向。     

葡萄糖调节蛋白78对人舌癌细胞侵袭的影响及其机制

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，Grp78)对人舌癌细胞系Tca-8113侵袭的影响及其分子机制。方法应用pcDNA3.1(+)-Grp78重组质粒转染舌癌细胞系Tca-8113筛选得到稳定表达Grp78的克隆(78C6)，再应用siRNA-Grp78转染78C6敲除Grp78表达，应用Transwell实验分析其侵袭能力，免疫荧光和细胞伸展实验检测细胞骨架排列和细胞伸展情况，GST-pulldown技术对Rac1和RhoA活性进行分析，Western blot检测Rac1、RhoA、MMP-9和MMP-2的表达。结果 Transwell实验结果显示，特异性上调Grp78表达明显促进舌癌细胞的侵袭，并且这种促进作用可以被siRNA-Grp78转染抑制，差异有统计学意义(P＜0.05)。进一步的研究发现，与对照组相比，Grp78高表达可以促进舌癌细胞Tca-8113的伸展和极性形成，差异有统计学意义(P＜0.05)。细胞骨架染色结果表明特异性上调Grp78后，细胞骨架微丝主要分布于细胞边缘，而这种作用可以被siRNA-Grp78转染抑制，导致细胞皮质部位出现明显的应力纤维。GST-pulldown结果表明，与对照组相比，Grp78高表达使Rac1的活性水平增高，RhoA活性降低，而siRNA-Grp78转染的细胞中Rac1活性降低，RhoA活性升高。Western blot研究显示，与对照组相比，Tca-8113/Grp78细胞中MMP-2和MMP-9表达增高(P＜0.05)， siRNA-Grp78转染的细胞中MMP-2和MMP-9表达降低(P＜0.05)，而RhoA和Rac1的表达前后无变化。结论 Grp78通过激活Rac1抑制RhoA活性及上调MMP-2和MMP-9表达来促进舌癌Tca-8113细胞的侵袭。     

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对肝癌细胞的靶向杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK双自杀基因系统（AdKDR- CDglyTK）对肝癌细胞选择性杀伤作用。方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后，体外感染表达KDR的BEL-7402细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株，并给予不同浓度的前药5-FC和/或GCV，观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果 所得病毒滴度为2.5×10^12pfu/ml。两种细胞的感染率相似，其感染率随腺病毒滴度的递增而增加。RT-PCR方法 检测发现：感染AdKDR-CDglyTK的BEL-7402有目的 基因CDglyTK的表达，感染AdKDR- CDglyTK的LS174T细胞无目的 基因表达。表达KDR的BEL-7402细胞对前药具有较高的敏感性，不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感（F=750.03，P〈0.001）。融合基因的疗效优于任一单自杀基因（F=275.89，P〈0.05）。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养，观察到该体系明显的旁观者效应。结论 KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的肝癌细胞。     

老年专科护理的实践模式探讨

目的探讨老年专科护理的实践模式,为更好地开展专科护理提供依据。方法对1660例老年住院患者开展老年专科护理实践,如建立老年护理专业架构,成立老年专科护理小组,规范专科护理程序,实行专科护理会诊、查房以及引进相关评估工具等。结果实施老年专科护理后老年患者不良护理事件（如压疮、肺炎）的发生率显著低于实施前（P〈0.05,P〈0.01）,患者满意度显著提高（P〈0.05）。病区护士老年专科护理知识和技能考核优良率显著高于培训前（均P〈0.01）。结论建立老年专科护理实践模式,可提高老年护理质量及老年患者对护理质量的满意度,显著提高护士的学习热情和业务能力。