乏氧对人舌鳞癌细胞系Tca8113体外黏附和侵袭能力的影响

目的:研究乏氧及人乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达对舌鳞癌Tca8113细胞系黏附和侵袭能力的影响.方法:将化学合成的siRNA_(HIF-1α)转染入Tca8113细胞后进行常氧或乏氧(1% O_2)培养.实验设以下对照组:空白对照组、脂质体组及非特异性siRNA(siRNA_(Irr))组.采用real time-PCR和Western blot法测定细胞中HIF-1α mRNA表达和蛋白含量,并分别检测HIF-1α基因干扰前后细胞对细胞外基质(ECM)的黏附与侵袭力.结果: 乏氧能够诱导Tca8113细胞的黏附与侵袭力增加.乏氧培养条件下,HIF-1α的表达上调主要发生在蛋白水平.siRNA_(HIF-1α)转染后常氧或乏氧培养24 h, HIF-1α mRNA表达显著下调,与各对照组相比有统计学意义(P<0.01),Tca8113细胞内HIF-1α蛋白含量亦显著降低.无论在常氧还是乏氧培养条件下,siRNA_(HIF-1α)转染的Tca8113细胞黏附力与各对照组相比均显著降低(P<0.05或P<0.01);侵袭力也显著降低(P<0.01).乏氧条件下siRNAHIF-1α转染的Tca8113细胞黏附力和侵袭力下降程度高于常氧培养[(36.4±2.7)% vs (26±2.35);(44.2±2.2)% vs (35±1.75), P<0.01)].结论: 化学合成的靶向HIF-1α的siRNA能够下调Tca8113细胞中HIF-1α基因的表达,降低细胞对ECM的黏附和侵袭力,可能成为抑制肿瘤转移的基因治疗的新途径或新靶点.     

人HIF-1α基因沉默肺癌细胞株的筛选及鉴定

乏氧条件下，肿瘤细胞基因不稳定，突变的基因型影响信号传导途径，细胞凋亡受抑制，恶性程度升高，转移能力增加，对放化疗的敏感性降低。在乏氧应答中起关键作用的是由仅和B亚基组成乏氧诱导因子-1（HIF-1）。HIF-1α作为肿瘤治疗靶基因正引起大家关注。建立HIF-1α基因沉默的细胞系模型，可为研究HIF-1α在肺癌乏氧应答中的作用和通过阻断HIF-1α基因表达为治疗肺癌提供工具。     

雌孕激素及米非司酮对人子宫内膜癌细胞孕激素受体亚型调控的研究

目的:通过体外实验探讨雌激素、孕激素及米非司酮对人子宫内膜癌细胞孕激素受体亚型表达的调节。方法:体外培养表达不同孕激素受体亚型的人子宫内膜癌细胞HECCA-A(PRA+)、HECCA-B(PRB+)及HECCA-AB(PRA+和PRB+),分别加入雌激素、孕激素和米非司酮,作用24、48h后采用蛋白质印迹法测定各组细胞中2种孕激素受体亚型蛋白的表达。结果:雌激素作用48 h后,HECCA-A、HECCA-AB细胞的PRA表达水平明显升高,PRA/PRB比值升高,P<0.05;孕激素及米非司酮作用48 h后,HECCA-B、HECCA-AB细胞的PRB表达水平明显降低,PRA/PRB比值升高,P<0.05。结论:雌激素上调子宫内膜癌细胞PRA的蛋白表达水平,孕激素及米非司酮下调PRB的蛋白表达水平。     

人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒的构建及对人肺腺癌SPCA-1细胞HIF-1α表达的影响

目的构建人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒Ad.HIF-1α,并观察其对人肺腺癌细胞SPCA-1的影响。方法采用酶切、连接、转化等方法,利用AdEasy系统构建插入HIF-1αRNAi片段的重组腺病毒Ad.HIF-1α。氯化铯梯度离心法纯化病毒。病毒功能滴度采用传导293细胞的方法,以2MOIAd.HIF1α传导SPCA-1细胞,48h后应用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)表达和HIF-1α蛋白表达。HIF-1αmRNA表达用荧光定量PCR检测。结果酶切和卡那霉素抗性筛选证实,重组穿梭载体pAdTrack.HIF-1α和腺病毒质粒pAd.HIF-1α均构建正确。pAd.HIF-1α导入293细胞3d,约15%的细胞表达GFP,最终所获病毒滴度为5.0×1010TU/mL。Ad.HIF-1α转导SPCA-1细胞48h,GFP表达率为92%;HIF-1αmRNA和蛋白表达分别下降89%和87%。结论成功构建人HIF-1α基因RNAi腺病毒,为通过阻断HIF-1α基因治疗肺癌提供初步实验依据。