肝细胞癌组织中microRNA表达谱研究

目的 检测人肝癌组织和对应的肝硬化组织microRNA表达的差异谱,为研究microRNA在肝细胞癌变机制中的作用提供实验基础.方法 Trizol法提取25例配对的肝癌和肝硬化组织总RNA,microRNA芯片分析肝癌和肝硬化组织中差异表达microRNA,实时定量PCR验证芯片的结果 .结果 肝癌与肝硬化组织间差异表达的microRNA共12个,其中3个表达上调,9个表达下调.实时荧光定量PCR结果 与芯片一致.结论 肝癌和肝硬化组织存在差异表达的microRNA,这些上调和下调表达的microRNA可能参与了肝癌的发生.     

XPD基因多态性与非霍奇金淋巴瘤发病风险

目的探讨核苷酸剪切修复基因(XPD)单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤(NHL)发病风险的关系。方法以309例NHL患者和305例健康对照者为研究对象,采用PCR-RFLP技术检测XPDG23591A、A35931C位点的基因多态。结果初步分析XPD G23591A和A35931C基因多态性与总的NHL无显著相关。对NHL亚类分析显示,在滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、其他B细胞NHL和T细胞NHL中,XPD23591位点GA+AA型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%,对照组为12.5%,OR值分别为1.43、1.58、0.89和1.50,差异无统计学意义(P>0.05);XPD35931位点AC+CC型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%,对照组为11.5%,OR值分别为1.41、1.48、1.75和1.12,差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论山东地区汉族人群XPD G23591A、G23591A位点多态性与非霍奇金淋巴瘤发病无关。     

一测多评法测定无硫和低硫白芷中5种香豆素类成分的含量

目的 建立一测多评方法比较无硫和低硫白芷药材中5种香豆素类成分含量的差异,并验证方法准确性和可行性。方法 以欧前胡素为内参物,建立相对校正因子。计算4种香豆素成分含量,同时与外标法计算结果进行比较,验证该方法的可行性。结果 相对校正因子在不同实验条件下RSD均在3.0%以内,且一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论 一测多评法可以用于无硫和低硫白芷药材中5种香豆素类成分含量测定。     

microRNA-21对乳腺癌MCF-7/ADR细胞株多柔比星耐药性影响的研究

目的:探讨microRNA-21(miR-21)基因表达改变对乳腺癌细胞多柔比星化疗耐药的影响.方法:人工合成miR-21模拟序列或干扰序列,以脂质体为载体,转染乳腺癌细胞MCF-7及其多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADR;应用荧光定量RT-PCR检测miR-21的表达;应用MTT法检测细胞转染前后对多柔比星的耐药性;应用流式细胞仪检测细胞凋亡;应用蛋白质印迹法检测PTEN、BAX及Bcl-2蛋白的表达.结果:MTT检测结果示,MCF-7及其耐药株MCF-7/ADR细胞多柔比星半数抑制浓度(IC50)分别为(0.28±0.03)和(17.5±0.12) μmol/L.miR-21表达上调,MCF-7细胞对多柔比星的IC50明显增高为(3.65±0.12) μmol/L;miR-21表达下调,MCF-7/ADR细胞对多柔比星的IC50明显降低为(7.53±0.11) μmol/L.流式细胞分析显示,miR-21下调后MCF-7/ADR细胞凋亡率明显增加.同时,细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低.结论:miR-21在乳腺癌化疗耐药中具有重要作用,抑制miR-21的表达可以逆转乳腺癌多柔比星耐药细胞株对多柔比星的耐药性.     

肿瘤坏死因子基因多态性与多发性骨髓瘤易感性关系的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肿瘤坏死因子β(TNF-β)基因多态性与多发性骨髓瘤(MM)易感性的关系.方法:采用聚合酶链反应-连接测序技术检测86例MM患者和172例健康对照者TNF-α(TNF-α-857、TNF-α-308和TNF-α-238位点)和TNF-β(TNF-β +252位点)基因多态性,以非条件Logistic回归分析计算比值比(OR)及95％可信区间(CI),从而评估不同基因型与MM风险之间的相关性.结果:MM组TNF-α-857 TT基因型及T等位基因频率显著高于对照组,病例组与对照组TT基因型频率分别为5.8％和1.2％,T等位基因频率分别为17.4％和9.6％.携带TNF-α-857 TT型者发生MM风险增高为5.78倍(OR=5.78,95％CI:1.09～30.6,P=0.039),携带TNF-α-857 T等位基因者发生MM风险增高为1.99倍(OR=1.99,95％CI:1.17～3.39,P=0.011),其他基因位点多态性未见与MM具有显著相关性.结论:在目前样本条件下,TNF-α-857位点T等位基因或TT基因型与MM发病风险增高具有相关性.     

前列腺癌HRE.CArG.HSV-TK重组腺病毒载体基因放射治疗的体外研究

目的 观察NILE.CArG.HSV-TK重组腺病毒栽体Ad.HRE.CArG.HSV-TK联合放射对体外培养的前列腺癌细胞LNCaP和PC-3生长和凋亡的影响.方法 50 MOI重组腺病毒体外转导细胞,Real-timeRT-PCR检测TK基因mRNA表达水平,MTT法检测腺病毒转导联合放射对常氧(37℃,19%氧气,5%二氧化碳)和乏氧(37℃,0.5%氧气,5%二氧化碳)状态下细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测凋亡(Annexin V-FITC染色).结果 50MOI腺病毒体外转导细胞48 h后,TK mRNA表达较对照组明显增加(P＜0.05),乏氧和/或放射处理后TK mKNA表达增加更显著.腺病毒体外转导和/或联合射线照射后,细胞抑制率显著增加并可介导细胞凋亡(P＜0.05).乏氧处理时上述效应更明显.结论 腺病毒栽体联合放射可显著抑制体外人前列腺癌细胞生长并诱导凋亡,为前列腺癌进一步的基因-放射治疗研究奠定了基础.     

miRNAs及其靶基因的识别

microRNAs(miRNAs)是人类新发现的一类非编码小分子RNA,广泛分布于真核细胞内。miRNAs通过与靶基因互补位点配对结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达,参与生长发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等生命过程。据推测,大约1%的人类已知基因编码miRNAs,而miRNAs可调控人类基因组中10%~30%的基因。本文就如何识别miRNAs及其靶基因作一简要介绍。     

CYP1A1、GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性的关系

目的 探讨CYP1A1 m1、m2位点和GSTM1基因多态性与肺癌遗传易感性的关系.方法采用病例对照研究方法和寡核苷酸芯片技术对110例山东汉族肺癌患者和125例正常对照者的基因组DNA进行CYP1A1、GSTM1基因多态性分析.结果 CYP1A1 m2位点、GSTM1基因型分布在肺癌组和对照组间存在统计学差异(P<0.05);携带CYP1A1 Val/Val基因型或GSTM1缺失基因型者患肺癌的危险性增高,其中吸烟个体患肺癌的风险进一步增加.结论 CYP1A1 m2位点和GSTM1基因多态性可能与肺癌发生有关,吸烟与CYP1A1、GSTM1基因具有协同作用.     

XRCC1和XPD单核苷酸多态性预测晚期NSCLC铂类化疗敏感性的研究

目的探讨DNA损伤修复基因XRCC1和XPD单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)对铂类药物化疗敏感性的关系。方法以聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测166例以顺铂(DDP)为基础药物化疗的晚期NSCLC患者XRCC1 Arg194Trp和XPD Asp312Asn多态基因型,并比较不同基因型与化疗敏感性的关系。结果化疗总有效率(CR PR)为31.3%,其中CR2例,PR50例,SD70例,PD44例。携带至少1个XRCC1第194位密码子Trp等位基因患者化疗敏感性是携带Arg/Arg基因型患者的4.3倍(OR=4.32,95%CI=2.10~8.87,P=0.000);携带XPD第312位密码子Asp/Asp基因型患者化疗敏感性是携带至少1个Asn基因型患者的3.5倍(OR=3.49,95%CI=1.76~6.96,P=0.000)。联合分析这两个遗传多态性发现,尚不能认为XRCC1 Arg194Trp和XPD Asp312Asn多态性在NSCLC对铂类药物敏感性中存在联合作用(P>0.05)。结论XRCC1 Arg194Trp和XPD Asp312Asn单核苷酸多态性可能与NSCLC铂类药物敏感性有关。