慢病毒载体的构建及其在基因治疗方面的应用

慢病毒属于逆转录病毒科,为RNA病毒。经改造的慢病毒作为外源基因载体,具有其独特的特点和优势。基因治疗成功的关键是选择合适的载体系统,慢病毒载体作为一种特殊的逆转录病毒载体,具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为当前基因治疗载体研究的热点。近年来对其基础生物学特性、载体改造及其应用等研究均取得了较大进展,笔者对慢病毒载体的构建以及其在人类疾病基因治疗方面的应用做简单的介绍。     

γ-干扰素对感染卡氏肺孢子虫宿主的免疫及所致炎性反应的作用

γ-干扰素(IFN-γ)在抵御多种病原体,保护宿主中起重要作用。但对卡氏肺孢子虫(PC)的感染有何作用尚不清楚。作者用三种小鼠模型,进行了IFN-γ对宿主抗PC作用的研究。 实验采用CB17和C57BL/6(B6)SCID(重度联合免疫缺陷)小鼠,经气管内或鼻内接种PC,有部分SCID小鼠是通过与感染鼠同室饲养4—5周而感染PC的。共重建三种     

Cox1基因鉴定人结膜吸吮线虫病及其感染途径分析

目的探讨人结膜吸吮线虫病的基因鉴定及其感染途径。方法采集新发现的1例患者的病史资料,对取自患者眼睛的虫体进行形态学观察,设计针对结膜吸吮线虫特异的Cox1基因引物进行PCR扩增,结合文献复习对病例的感染途径进行讨论分析。结果临床资料及虫体的形态学观察诊断患者为双眼结膜吸吮线虫重度感染,经Cox1基因鉴定进一步明确诊断。感染途径分析结果表明,患者的一只眼睛存在被接触感染的可能性。结论人结膜吸吮线虫病可以根据病史及虫体的形态学进行诊断,Cox1基因鉴定对于虫种鉴定及流行病学分析有一定意义。其感染途径不能排除直接接触感染的可能性。     

大鼠感染肺孢子菌模型诱导方法的优化

目的通过对实验条件的优化,建立一种高感染率和低死亡率的肺孢子菌感染模型诱导方法。方法以免疫抑制剂诱导大鼠自然感染肺孢子菌为基本方法,对比不同剂量、不同预处理方法、不同季节等因素对诱导大鼠肺孢子菌感染模型的成功率、感染度及动物死亡率等的影响。结果每鼠每次腹膜下注射2.5mg地塞米松(每周两次)至第8周,诱导的肺孢子菌感染率为87.50%,死亡率为0,3mg地塞米松组第7周诱导的肺孢子菌感染率为87.50%,死亡率为37.50%,2.0和3.5mg组感染率、死亡率分别为12.50%、0和75.00%、75.00%,差异有统计学意义(P<0.05);乙醚麻醉组肺孢子菌感染率为100%,非麻醉组为50.00%,差异有统计学意义(P<0.05);4~6月期间诱导的大鼠肺孢子菌感染率为62.50%,7~9月期间诱导的大鼠肺孢子菌感染率为100%,11月~次年1月组感染率为37.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论地塞米松腹腔内注射诱导大鼠感染肺孢子菌,以每鼠每次2.5~3mg为最佳剂量;辅助乙醚吸入麻醉可提高肺孢子菌感染率;夏秋季节诱导的大鼠肺孢子菌感染率较高。     

检测肠道病毒71型RT-LAMP技术的建立及其应用

目的为肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染的快速诊断建立一种简捷、敏感、特异的基因检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT LAMP)。方法针对EV71 VP1基因的8个区域设计6条特异性引物,建立检测该靶序列的RT LAMP方法,对其特异性及敏感性进行了验证;并对手足口病患者标本进行检测,并与RT PCR及Real time PCR方法进行了比较。结果利用RT LAMP方法能成功检测到EV71 VP1基因区,等温条件下60min内即可完成检测,该方法简便快捷、敏感性高、特异性好;其阳性率高于RT PCR方法（P<0.05）,与Real time PCR结果呈现很好的一致性（P>0.05）。结论RT LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作过程简捷快速,无需特复杂仪器等优点。适用于EV71感染的快速检测及分子流行病学的监测,具有很好的开发应用前景。     

卡氏肺孢子虫肺炎

本文就卡氏肺孢子虫肺炎的病原体 ,感染途径 ,临床表现 ,诊断治疗及预防等方面作一概述 ,为卡氏肺孢子虫肺炎的预防控制提供参考。     

粗球孢子菌病原学鉴定及形态学参数分析

目的 建立粗球孢子菌的形态学参数并对相关数据进行分析,为粗球孢子菌病原学鉴定提供数字化资料。方法 取粗球孢子菌肺感染患者痰液进行巴氏染色,应用显微镜摄像系统采集粗球孢子菌图像,通过计算机数字图像分析系统测量粗球孢子菌的长径,短径,周长,面积,计算其圆球度等一系列形态学参数。应用SPSS数据处理软件对采集到的数据进行统计学分析。结果 测量粗球孢子菌297个,长径均值为70.91 μm,最大值为110 μm,最小值为33 μm;短径均值为54.46 μm,最大值为92 μm,最小值为27 μm;周长最大值为382 μm,最小值 116 μm,平均值为227.60 μm;面积最大值85.93 mm²,最小值8.49 mm²,平均值为30.75 mm²。结论 利用计算机数字图像分析系统和SPSS数据处理软件获得粗球孢子菌长径、短径、周长、面积、圆球度等的累加、均值、标准差、最大值、最小值及95％可信区间等一系列形态学参数。粗球孢子菌形态学参数和数据的建立为量化及鉴别该菌提供了可靠的资料。     

辽宁与新疆两地细粒棘球蚴分离株基因型研究

目的检测辽宁和新疆人源细粒棘球蚴的基因型及其遗传变异情况,分析不同地理株之间的基因差异。方法分别从两地区肝包虫病患者肝内获取棘球蚴囊,取囊内容物离心沉淀,提取DNA,以细粒棘球绦虫线粒体细胞色素氧化酶(cox1)基因为靶基因设计引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行测序,应用NCBI Blast软件和DNAman软件分析测序结果。结果辽宁和新疆人源细粒棘球蚴cox1基因扩增片段为1 838bp,测序后进行NCBI Blast分析,发现100条同源序列,均为细粒棘球绦虫种属;其A,C,G,T含量分别为47.90%、25.13%、9.17%、17.80%和47.84%、25.13%、9.23%、17.80%,两地区分离株cox1基因序列同源性为99.94%,目的基因序列中第64位仅存在一个变异位点,两者的基因型均属于G1亚型。结论辽宁和新疆人源细粒棘球蚴基因型均为G1型,cox1基因同源性高,仅在第64位存在一个变异位点,可为当地人体细粒棘球蚴病的分子流行病学研究及其预防提供参考。     

大鼠支气管肺泡灌洗液中肺孢子虫的超微结构观察

目的观察大鼠支气管肺泡灌洗液中肺孢子虫的超微结构。方法Wister大鼠皮下注射地塞米松8周,诱导建立肺孢子虫肺炎的动物模型。乙醚麻醉下处死大鼠,收集大鼠的支气管肺泡灌洗液,浓缩病原体,扫描电镜下观察肺孢子虫的超微结构。结果扫描电镜下可见Wister大鼠源肺孢子虫有两种形态一种虫体表面光滑,近球形,大小3~5μm,且部分光滑型虫体表面有2~3个脐形凹陷,凹陷上可见数个微孔;另一种虫体表面粗糙,形态近球形或不规则形,大小5~9μm,虫体表面可见不同形态的突起、伪足、微孔、凹陷等。结论扫描电镜下大鼠源肺孢子虫有光滑型及粗糙型两种形态,认为前者是包囊后者为滋养体。     

Th17细胞的生物学特性及其在寄生虫感染中的作用

辅助性T细胞传统上分为Th1型和Th2型.近年研究者发现了一种新的CD4+T细胞亚群,可以产生白细胞介素17(IL-17),被称为Th17细胞.Th17细胞在炎症反应中发挥着重要的调节作用,它的产物IL-17等与原虫、吸虫、绦虫等寄生虫感染有联系.该文就Th17细胞亚群及其产物在寄生虫感染中的作用作一简要综述.