海藻酸盐与异种骨构建组织工程载体的适宜浓度

背景:研究认为,载体的结构在很大程度上影响着载体的功能。目的:探讨不同浓度的海藻酸盐凝胶与去抗原异种骨构建组织工程载体的生物学性能。设计:观察性实验。单位:解放军第四军医大学西京医院全军创伤骨科研究所。材料:海藻酸盐,氯化钙,骨髓基质细胞,异种骨。方法:取小牛松质骨,制成骨粒,脱脂、脱蛋白,真空冻干;选择孔隙直径在300～500μm左右的骨粒,环氧乙烷消毒。将提纯后的海藻酸钠以DMEM培养液为溶剂,配制成0.5%,2%,8%和16%的海藻酸钠DMEM溶液;将诱导后的骨髓基质细胞以1×1012L-1浓度等体积与海藻酸钠DMEM溶液充分混合,在0.5MPa的负压状态下复合,使细胞悬液充分占据松质骨的空隙,以50g/L的葡萄酸钙浸渍30s,以使海藻酸钠获得交联。置于CO2培养箱中,培养4d。观察异种骨孔隙中凝胶复合情况及其中细胞生长情况。观察不同藻酸密度复合松质骨粒中细胞生长情况。主要观察指标:观察海藻酸盐凝胶与去抗原异种骨复合情况,复合后的载体中细胞生长状态和基质分泌情况。结果:海藻酸盐的浓度为0.25%,1%时,凝胶在异种骨中均匀复合,浓度为4%和8%时藻酸仅复合在松质骨表面。体外培养4d后,0.25%海藻酸盐复合异种骨的表面大部分凝胶脱落,1%的海藻酸盐均匀复合在异种骨的骨孔中,细胞形态饱满,基质分泌;4%的海藻酸盐中,细胞生长受到限制;8%的凝胶的质地不均匀,无法见到细胞结构。结论:1%的海藻酸盐适宜与异种骨复合构建骨组织工程载体。     

抗感染活性骨治疗慢性血源性骨髓炎临床应用研究

[目的]观察和研究抗感染活性骨(anti-infective reconstituted bone xenograft,ARBX)I期植骨治疗慢性血源性骨髓炎的疗效。[方法]在获得总后卫生部军内临床试用研究许可的基础上,自2001年9月起将ARBX用于临床治疗慢性血源性骨髓炎24例,对其中17例获得12个月以上系统随访的患者进行疗效分析。[结果]17例中除1例骨髓炎未能治愈,1例骨髓炎治愈后复发,1例骨髓炎合并大段骨缺损在术后发生骨不连外;其余14例骨髓炎均获得完全治愈,病变部位均获得确实骨修复,无骨髓炎复发。本组慢性骨髓炎总治愈率为82.4%,远高于传统治疗方法。[结论]ARBX具有高效诱导成骨活性和强效抗感染能力,能I期植骨有效治疗慢性血源性骨髓炎。     

转染BIG-3基因的人骨髓基质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究

目的研究转染BIG-3基因对人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向软骨纠胞诱导分化的影响。方法将构建好的pMSCVpuro-BIG-3转染至建系的hBMSCs,5μg/mL嘌罗霉素筛选12 d后,扩增并收集细胞,电泳证实特定条带无误。实验分三组：hBMSCs-BIG-3组、hBMSCs-EV组和hBMSCs组,每组重复6次,将三组细胞制成微粒模拟三维培养模式,分别加入浓度为400 ng/mL的重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP一2)作用14 d后,检测甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原mRNA,利用MPS60病理图象分析系统采集图像,并进行灰度分析,半定量比较基质表达量。结果灰度值：hBMSCs-BIG-3组为684 481 822,hBMSCs-EV组为439 101 780,hBMSCs组为441 082 183,hBMSCs-BIG-3组灰度值明显高于后两组(P＜0．05),hBMSCs-EV组和hBMSCs组之间差异无显著性意义(P=0．862)。结论BIG-3基因有助于hBMSCs向软骨细胞诱导分化。     

骨组织工程中细胞因子基因修饰种子细胞来源研究:转染后骨形态发生蛋白-3成纤维细胞株的稳定表达

背景骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是诱导和促进种子细胞向骨细胞方向转化的最重要的细胞因子之一.天然BMP难溶解于培养基,对培养的种子细胞无法有效发挥作用;可溶性重组BMP虽可溶解于培养基,但价格昂贵,而且难于适时、适量的作用于种子细胞.基因治疗为上述问题的解决提供了新的思路.目的转染外源BMP-3基因入成纤维细胞,筛选获得稳定表达BMP-3的阳性成纤维细胞克隆.设计单一样本研究.单位解放军第四军医大学西京医院全军骨科研究所.材料成纤维细胞(NIH3T3细胞)由第四军医大学口腔医学院司徒镇强教授提供.方法2000-04/2003-11在全军重点实验室第四军医大学全军骨科研究所实验室完成.采用脂质体转染的方法将外源BMP-3基因转染入NIH3T3细胞,G418筛选后寻找细胞集落,分离、培养,免疫组织化学鉴定,BMP-3染色阳性者为阳性BMP-3表达细胞克隆.主要观察指标①NIH3T3细胞筛选浓度.②转染阳性细胞克隆的筛选.③筛选的细胞克隆内BMP-3的表达.结果成功将BMP-3基因转染入NIH3T3细胞,经免疫组化筛选出阳性BMP-3表达成纤维细胞的克隆,建立了BMP-3稳定表达成纤维细胞株.结论将BMP-3基因真核表达载体转染入成纤维细胞,并经筛选获得了可稳定表达BMP-3的成纤维细胞株,为将来骨组织工程研究中使用细胞因子基因修饰的种子细胞的研究奠定了一定基础.     

快速成型骨折模型在四肢骨折教学中的应用

目的评价快速成型骨折模型在四肢骨折教学中的应用效果。方法将第四军医大学2012年正在接受《外科学》教学的临床医学系60名本科学生采用抽签法随机分为A、B2个班,每班30人。A班采用传统方法教学,B班以传统教学为基础,并在快速成型骨折模型上讲解和演示基本解剖知识、骨折发生机制以及周围神经、血管等重要解剖结构的损伤机制。教学结束后即刻进行教学满意度和教学内容综合考核．考核原始成绩录入SPSS17．0软件,采用组间比较t检验对结果进行分析。结果教学结束后的考核成绩显示,A、B班学生对教学满意度的评分和专业考核中骨折机制、损伤机制、临床表现、诊断要点、治疗原则和总分的平均分行组间比较,差异均有统计学意义（均P=-0．000）。结论快速成型骨折模型可激发学生学习的自我能动性,提高其学习的兴趣和效率,其专业考核成绩明显提高。     

骨形态发生蛋白-2壳聚糖微球复合组织工程支架修复兔股骨髁部骨缺损的实验研究

目的 探讨重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)壳聚糖缓释微球复合聚乳酸-聚羟乙酸/磷酸三钙(PLGA/TCP)支架修复骨缺损的可行性和有效性.方法 取健康成年新西兰大白兔45只,在40只实验动物股骨髁部制备0.6 cm×1.0 cm骨缺损.实验分4组:A组:缺损组,B组:用PLGA/TCP空白支架修复骨缺损,C组:用等量rhBMP-2复合PLGA/TCP支架修复骨缺损,D组:用rhBMP-2壳聚糖微球复合PLGA/TCP支架修复骨缺损,每组10只动物.另5只动物为正常对照组(E组).应用X线、Micro-CT和组织病理学等方法检测术后4、12 周各实验组骨缺损修复效果.结果 术后4周X线片示:A组无新骨形成.B组有少量新生骨影像形成,C、D组骨缺损部位均有新骨影像形成.术后12周,Micro-CT结果显示:D组骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数目等指标均优于B组和C组,差异均有统计学意义(P<0.05),A组末检测到上述指标.术后4剧,D组可见大量骨组织形成,有部分成熟的骨小梁,PLGA/TCP支架大部分被降解.吸收.术后12周,D组支架和微球完全降解.骨缺损被成熟骨取代;B、C、D组骨长入率分别为5.78%±1.21%、37.26%±6.45%、74.25%±8.91%,3组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 复合rhBMP-2壳聚糖微球的PLGA/TCP支架具有良好的骨缺损修复效果,临床应用前景较好.     

鹿瓜多肽注射液对去卵巢大鼠骨密度及松质骨中骨形态发生蛋白表达的影响

目的探讨鹿瓜多肽（松梅乐）注射液肌肉注射对去卵巢大鼠骨密度及松质骨中骨形态发生蛋白（BMP2）表达的影响。方法将8月龄未经产雌性二级SD大鼠30只，随机分为假手术（SHAM）组、去势（VOX）组、去势＋鹿瓜多肽（VOX＋SML）组。VOX＋SML组大鼠术后第2天开始给药。术后20周处死各组大鼠，对各组大鼠骨密度进行检测。利用免疫组织化学染色及图像分析方法对各组大鼠松质骨切片图像进行灰度分析，观察鹿瓜多肽注射对去势大鼠腰椎松质骨中BMP2表达的影响。结果①去势组与SHAM组相比较，灰度值降低。而（VOX＋SML）治疗组较VOX组灰度值降低，表明VOX大鼠松质骨中骨小梁周围厦髓腔内BMP：表迭阳性细胞数明显多于SHAM组；而（VOX＋SML）治疗组骨小梁周围及髓腔内BMP2表达阳性细胞数多于VOX组，且染色加深。②与SHAM组相比，VOX组股骨近端、股骨干、腰椎的骨密度明显降低（P〈0．01）；（VOX＋SML）治疗组各部位的骨密度高于VOX组（P〈0．05），但未达到SHAM组水平（P〉0．05）。结论鹿瓜多肽注射液可抑制和延缓骨质疏松形成，对雌激素缺乏引起的骨质疏松具有预防作用。     

抗感染活性骨在儿童慢性血源性骨髓炎治疗中的应用

目的:研究和验证抗感染活性骨(ARBX)Ⅰ期同步植骨治疗儿童慢件血源性骨髓炎的疗效.方法:在获得临床试用研究许可的基础七,自2001-09起将ARBX用于临床治疗儿童慢性血源性骨髓炎15例,获得12 mo以上系统随访的患儿12例.随访时间12～79(平均32)mo.结果:12例中除1例骨髓炎未能治愈,1例骨髓炎治愈后复发,1例骨髓炎合并大段骨缺损在术后发生骨不连外,其余9例骨髓炎均获得完全治愈,病变部位均获得确实骨修复,无骨髓炎复发.本组儿童慢性血源性骨髓炎感染治愈率为83.3%,完全治愈率(既控制感染又完成骨修复)为75.0%,远高于传统治疗方法.结论:ARBX具有高效诱导成骨活性和强效抗感染能力,能Ⅰ期植骨有效治疗儿童慢性血源性骨髓炎.     

mBMP-4真核表达载体的构建及表达

0　引言　骨形态发生蛋白 - 4(BMP- 4)具有诱导成骨潜能细胞向软骨细胞和成骨细胞方向分化并形成新骨的能力 .随着基因转染技术的应用 ,将外源基因转入靶细胞内 ,通过靶细胞表达外源基因而发挥作用成为可能 .本研究的目的是通过基因克隆和 DNA重组技术构建可在真核细胞内表达的 BMP- 4表达载体 ,并观测外源基因在细胞内表达的情况 ,为探索将基因转移技术应用于骨折及骨不连等疾病的治疗奠定一定的实验基础 .1　材料和方法1.1　试剂　质粒 pc DNA3和 p SPT- 18- m BMP- 4均由吕振华博士馈赠 ,Eco R I和 H ind III,T4DNA连接酶、…     

结核分枝杆菌超声裂解产物体外诱导破骨细胞形成的相关实验研究

目的研究结核分枝杆菌超声裂解产物（Mt sonicate）体外诱导破骨细胞形成及其相关机制。方法通过破骨细胞计数、骨磨片吸收陷窝观察和TNF-α检测等方法观察不同浓度Mtsonicate体外诱导破骨细胞的形成。结果Mtsonicate能够在体外诱导破骨细胞生长，且破骨细胞数量对Mtsonicate存在浓度依赖性。Mtsonicate诱导破骨细胞的形成机制可能与TNF-α的分泌增加有关。结论骨、关节结核的发病很可能与结核分枝杆菌诱导的破骨细胞增生有关。