环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究

目的探讨环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药的分子机制。方法10株临床分离的肺炎链球菌体外用不同浓度梯度环丙沙星逐级诱导成为耐药株,检测诱导前后菌株对环丙沙星的MICs,PCR扩增诱导前后菌株parC/parE和gyrA/gyrB基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)、测序并与GenBank公布序列比对。结果8株临床菌株成功诱导为耐药株,诱导后MICs是诱导前16倍以上,诱导后2株只发现parC/parE基因的QRDR有突变其耐药水平较低MICs分别为8μg/ml和16μg/ml,6株parC/parE和gyrA/gyrB基因的QRDR同时存在点突变耐药水平较高,MICs分别为64μg/ml和128μg/ml。结论逐步增加药物浓度可以诱导肺炎链球菌parC/parE和/或gyrA/gyrB基因的QRDR点突变导致对环丙沙星耐药。     

浅谈小儿四肢静脉穿刺成功率

静脉输液作为临床常用的治疗，给药方法，无论是常规治疗还是在急救过程都具有重要作用。是护理工作中一项不可缺少的基本操作。静脉穿刺是临床最基本的护理技术操作。虽看似简单，但在对医疗服务质量不断提高的今天，却直接影响病人对护理服务的满意程度。特别是小儿静脉穿刺难度大、要求高。小儿对静脉穿刺又有一种本能的抵抗情绪。它要求护士不仅有精湛的穿刺技术，还要有良好的心情素质，下面我们就如何提高静脉输液成功率进行探讨。     

miR-16在金黄色葡萄球菌脓毒症中的表达及意义探讨

目的探讨miR-16表达水平与金黄色葡萄球菌脓毒症严重程度的关联性,进一步探讨其潜在的临床意义。方法收集金黄色葡萄球菌脓毒症血液标本共计32例,脓毒性休克、严重脓毒症和一般脓毒症各8例,不同年龄段的健康对照24例;另外,收集革兰氏阴性菌脓毒症血液标本8例。用Trizol液裂解全血后提取microRNA,采用荧光定量PCR测定miR-16在不同组的表达水平(2-△△Ct法),用SPSS 13.0软件分析各组之间的统计学差异。采用SPSS 13.0软件将miR-16定量值与相应CRP和PCT值进行相关性分析。结果 miR-16表达水平与金黄色葡萄球菌脓毒症严重程度呈明显的负关联,各实验组与对照组相比均有统计学差异(P0.001),实验组之间也有统计学差异(P0.01)。miR-16表达水平与CRP和PCT值呈负相关性,相关系数分别为-0.561和-0.769。结论 miR-16表达与金黄色葡萄球菌脓毒症有明显的负关联性,提示其可能作为该菌脓毒症严重程度的标记物。     

糖尿病患者烫伤28例治疗体会

生活中烫伤较常见,糖尿病患者血糖水平高、末梢血液循环差,烫伤后伤口不易愈合,容易感染.2004年4月-2009年7月,我们采用庆大霉素、山莨菪碱、胰岛素混合液治疗糖尿病患者烫伤28例,疗效满意.现分析报告如下.     

rTpNl7和rTpN47及其融合蛋白酶联免疫吸附试验检测梅毒血清标本的效果

目的构建梅毒螺旋体tpnl7、tpn47基因及tpnl7-tpn47融合基因原核表达系统，建立基于rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47的ELISAs并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法采用常规分子生物学方法扩增并克隆梅毒螺旋体tpnl7和tpn47基因，以连接引物PCR构建tpnl7-tpn47人工融合基因，建立上述目的基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的重组蛋白，Western blot检测其免疫性。分别以rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47为包被抗原，建立相应ELISAs检测健康人群、类风湿关节炎（RA）和系统性红斑狼疮（SLE）患者及梅毒患者血清标本中梅毒抗体并与现行TRUST和TPHA进行比较。结果克隆的tpnl7、tpn47基因及构建的tpnl7-tpn47融合基因与GenBank中相关序列相似性为100％。rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47表达量分别为细菌总蛋白的37．2％、23．3％和29．8％，其提纯物电泳后均显示单一条带，并均能与梅毒抗体阳性血清发生明显的结合反应。rTpNl7-ELISA、rTpN47．ELISA和rTpNl7-TpN47-ELISA对所有健康人血清、RA和SLE患者血清标本的检测结果均为阴性，对梅毒患者血清标本检测阳性率分别为84．4％、82．3％和98．1％，其中rTpNl7-ELISA和rTpN47-ELISA检测阳性率低于TPHA（P〈0．01），rTpNl7-TpN47-ELISA检测阳性率相似（P〉0．05），但均高于TRUST（71．4％）。结论研究中建立的rTpNl7-ELISA、rTpN47-ELISA，尤其是rTpNl7-TpN47-ELISA，有望成为快速、简便、安全的梅毒患者血清学筛查方法。     

肺炎链球菌ciaH/R基因重组表达及CiaH/R与β-内酰胺类耐药相关性

目的：构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统，探讨ciaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因，以常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS—PAGE及Bio—Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量。制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG。检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后，细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化。结果：与报道序列比较，所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．9％～100％和100%。所构建的工程菌E．coli BL21DE3^pET42A-ciaH和E．coli BL21DE3^pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR，其产量分别高达细菌总蛋白的33％和45％。rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1：4、1：4和1：1、1：1。CiaH—IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR—IgG胞内封闭CiaR后，青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性，但对耐药菌株耐药性无明显影响。结论：成功地构建了肺炎链球菌ciaH／ciaR基因原核表达系统，为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础。CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关。     

临证忌望文断章

中医理论乃众医临证经验之总结，它反过来又指导于临证实践，在临证实践中不断得以验证并逐步提高。在临证中，对医理万勿断章取义，否则便会迷途而延误治疗。现试举临证1例而议之，以飨同道。     

3种G-CSF动员224例外周血干细胞效果比较

目的比较3种粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对外周血干细胞的动员效果。方法我科自体外周血干细胞移植病人224例,采用3种粒细胞集落刺激因子(吉赛欣、欣粒生、惠尔血)进行外周血干细胞动员,对干细胞动员情况、干细胞质量、移植后造血重建和药物毒副作用进行比较。结果224例病人全部移植成功,其动员效果、干细胞质量及在移植后造血重建中的临床效果差异均无显著性,毒副作用小。结论吉赛欣和欣粒生两种国产制剂及惠尔血能可靠用于外周血干细胞动员及造血重建,尤其是国产制剂的价格明显低于进口产品,在有效保证动员效果的同时大大减轻了病员的经济负担,值得临床应用推广。     

内耳神经节细胞的成熟:截面积形态测定分析

小鼠耳蜗与前庭功能发生和成熟过程在出生后完成。本研究应用截面积形态测定法分析胚胎16和19天、出生时、生后4、6、10、12、22和28天的 CBA/CBA 小鼠内耳神经节细胞变化。主要观察结果:(1)胚胎期和出生后,耳蜗、前庭神经极短,前庭和耳蜗神经节在胚胎期开始发育,神经纤维直接发芽先于神     

离体鼠位听神经节在器官培养期的分化缺陷

一些研究者认为,中胚层和上皮组织的相互作用对内耳形态发生至关重要。本文观察了与脑干或听泡上皮组织均无联系的离体位听神经节在器官培养期的发育情况。选用 CBA/CBA小鼠,妊娠第12天处死,取出听泡及位听神经节,置入器官培养器,35±0.2℃下孵育4