高葡萄糖对与内皮细胞共培养的雪旺细胞的损伤作用

目的观察高葡萄糖对与内皮细胞(endothelial cells,EC)共培养的雪旺细胞(Schwann cells,SC)的损伤情况。方法建立大鼠SC与EC的共培养模型,根据形态学和MTT选定25 mmol/L高葡萄糖浓度和48 h作用时间。将细胞分为正常葡萄糖SC与EC共培养组、高葡萄糖SC与EC共培养组及高葡萄糖SC组,通过形态学和MTT、凋亡率(流式细胞仪)和Casepase-3 mRNA表达(Real time PCR)观察细胞损伤。结果形态学及MTT显示,与EC共培养的SC在高葡萄糖条件下,比正常葡萄糖共培养以及高葡萄糖单培养的SC存活率明显下降;SC凋亡率比正常葡萄糖共培养及高葡萄糖单培养的SC明显增高;Casepase-3 mRNA表达较正常葡萄糖共培养组明显升高,但与高葡萄糖单培养组相比其增高尚无统计学显著性意义。结论在高葡萄糖环境下,与EC共培养的SC损伤更明显,可能与两种细胞相互作用加重SC损伤有关。     

关节镜下综合治疗复发性髌骨脱位

我院从2004年至今应用关节镜下髌外侧支持带松解，内侧支持带紧缩，胫骨结节移位术综合治疗复发性髌骨脱位12例，疗效确切，现报道如下。     

79例XY性腺发育异常患者性腺肿瘤发生情况分析

目的 探讨表型为女性、染色体含有Y或Y成分的性腺发育异常患者的性腺肿瘤发生情况.方法 1989年10月至2005年12月间于北京协和医院妇产科因性腺发育异常手术切除双侧性腺的患者共79例,所有患者均取外周血进行淋巴细胞染色体核型分析、Y基因性决定区检测以及相关激素和酶检测,影像学检查了解性腺位置.行经腹或腹腔镜下性腺切除术,所有手术标本均行病理检查.结果 79例患者中,雄激素不敏感综合征患者41例,其中发生精原细胞瘤1例、支持细胞腺瘤2例,占7%;170r羟化酶缺乏症患者14例,其中发生支持细胞腺瘤1例,占7%;XY单纯性腺发育不全患者4例,其中发生性腺母细胞瘤及无性细胞瘤1例,占1/4;XO/XY性腺发育不全患者16例,其中发生精原细胞瘤及性腺母细胞瘤1例,占6%;睾丸退化患者4例中无肿瘤发生.发生肿瘤的性腺多位于盆腔内,发生肿瘤的年龄集中于15～23岁.结论 表型为女性、染色体含有Y或Y成分的性腺发育异常患者易发生性腺母细胞瘤和生殖细胞肿瘤,一旦确诊宜及早切除双侧性腺.     

增殖细胞核抗原

有关细胞增殖周期与细胞增生的研究是目前细胞基础研究的一个重要内容，其中以与细胞增殖周期相关的周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ），周期蛋白依赖激酶（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎ ｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ，Ｃｄｋｓ）、ｐ１６蛋白、ｐ５３蛋白等的研究发展较快。其中，增殖细胞核...     

硝酸咪康唑栓7日与1日疗法治疗外阴阴道念珠菌病的临床研究

目的:观察1200mg硝酸咪康唑栓(1日疗法)治疗外阴阴道念珠菌病的临床疗效。方法:采用开放、随机、平行、对照的多中心临床试验,以硝酸咪康唑栓200mg(7日疗法)作为对照。试验前、用药后2周、4周分别进行阴道分泌物念珠菌镜检与培养,试验前与给药后2周进行血尿常规与肝肾功能测定,并填写症状与不良反应日记卡。结果:筛选165例,有效病例数为125例。2组对象在年龄、疾病初发或再发以及疾病的严重程度等方面无显著性差异(P≥0.05)。200mg组与1200mg组的临床有效率、微生物疗效与总体疗效分别为:在用药2、4周时的临床有效率:95.1%,91.8%;81.3%,85.9%;微生物疗效:93.4%、91.8%;79.7%,82.8%;总体疗效:93.4%,91.8%;79.7%,82.8%。其中统计分析2周时两组这三方面疗效皆有显著差异;症状缓解时间分别为5天与7天,无统计学显著差异;初发病例与复发病例的微生物疗效相似。性生活是影响1200mg组微生物疗效的一个重要因素。结论:硝酸咪康唑栓7日疗法与1日疗法皆可有效、安全地治疗外阴阴道念珠菌病。1日疗法提高了药物依从性,安全性高,副作用小,时间短,病人易于接受。     

手助腹腔镜在23例妇科手术中的应用

目的 探讨手助腹腔镜在妇科手术中的应用。方法 回顾性分析北京协和医院2003-04—2005-07间23例手助腹腔镜的治疗经验．对实施手助腹腔镜的各种情况如疾病种类、手术适应证、术中出血情况、手术时间、术后恢复与近期与远期并发症等进行分析。结果 23例盆腔严重粘连患者，22例成功完成手术，1例改为开腹手术：术中平均出血量（63．2±45．3）mL，手术时间（89．14±25．6）min，术中、术后均无严重并发症发生，术后患者疼痛轻微，恢复快，术后平均住院时间为（4．1±1．7）d。术后随诊3～30个月，无远期并发症发生。结论 运用手助腹腔镜技术可以综合开腹手术和腹腔镜手术的优势，达到微创的目的。     

具有分泌性激素功能的卵巢肿瘤50例分析

目的探讨具有分泌性激素功能的卵巢肿瘤的临床特征与内分泌症状,为正确诊断提供临床参考资料。方法回顾性分析1980年1月至2003年1月在北京协和医院就诊的具有分泌性激素功能的卵巢肿瘤50例,分别对症状、肿瘤种类、性激素等相互间关系进行统计学分析。结果50例中以卵巢颗粒细胞瘤为多见,其次为卵巢支持间质细胞瘤等。主要为雄激素与雌激素增多症状,其中雄激素异常的常见临床表现依次为多毛、阴蒂增大与喉结出现。多毛为首发表现,多见于卵巢支持间质细胞瘤与卵巢类脂质细胞瘤。雌激素异常的主要临床表现为绝经后出血与月经紊乱,多见于颗粒细胞瘤。结论多毛、阴蒂增大等是雄激素过多的最常见表现,睾酮≥6.0nmol/L者应高度怀疑发生肿瘤的可能,治疗以手术为主。     

两次骨髓干细胞移植治疗大面积急性心肌梗死的疗效观察

目的探讨两次细胞移植治疗大面积心肌梗死患者的疗效。方法35例大面积急性心肌梗死患者(LVEF<40％),成功实施急诊PCI术后3-7 d,行uRI及SPECT后,随机分为3组。A组11例单次细胞移植组患者于PCI术后3-7 d施行细胞移植,B组12例两次细胞移植组患者分别于PCI术后3-7 d及术后3个月接受细胞移植, 12例对照组患者在相同时间接受0．9％氯化钠溶液冠脉内注射。结果随访12个月时,未发现与重复细胞移植相关的不良反应。MRI结果发现,与对照组相比,单次移植组和两次移植组LVEFF变化值均显著升高[(2．9±2．0)％比(7．1±1．5)％比(11．7±2．7)％,P<0．01],而两次移植组较单次移植组变化更为显著(P<0．01)。同时,MRI显示两次移植组梗死心肌面积、SPECT显示心肌灌注面积改善幅度均优于其他两组(P<0．01)。结论两次骨髓干细胞移植治疗对于大面积急性心肌梗死患者是安全可行的,可在一次移植的基础上进一步改善心脏功能。     

SHU555A标记间充质千细胞心肌内磁共振成像的策略优化

目的目前研究表明,超顺磁性氧化铁颗粒标记干细胞后,可进行心肌内移植磁共振活体示踪,但由于标记效率较低,加上大动物心电门控和呼吸控制效果较差,磁共振图像质量差强人意。本实验采用SHU555A(Resovist)纳米微粒标记猪骨髓间充质干细胞(MSCs),对标记方法和标记细胞磁共振成像进行方法学优化,以期提高磁共振成像质量。方法①细胞磁标记方法的优化:分离培养猪MSCs。将SHU555A和非特异性转染剂PLL以1:0．03的比例用无血清的DMEM培养液稀释,制成含铁终浓度分别为0、25、50、100和200 g／mL的SHU555A-PLL标记培养液,室温下轻摇混合60 min,形成SHU555A-PLL复合物,标记猪MSCs 24 h以确定最佳标记浓度;然后以该浓度与猪MSCs分别共孵育0、2、4、8、16、24和48 h,以确定最佳标记时间。反映不同条件下标记效率和标记毒性的检测指标包括:普鲁士蓝染色、细胞电子显微镜检查、细胞铁浓度测定(原子吸收分光光度仪)、锥虫蓝排除试验、细胞毒性和增殖活性测定(CCK-8试验)。②标记细胞心脏移植的磁共振成像优化:开胸结扎前降支建立猪急性心肌梗死模型10头,每头直视下经心外膜向左室梗死交界区心肌内缓慢注射(1-10)×106细胞,每点150μL,共3点。对植入猪心肌内的标记细胞进行体内磁共振成像。比较T2 * WI-Flash2d(快速小角度反转梯度回波序列)、T2*WI-MAP和钆喷酸葡胺静脉注射后T2*WI-Flash2d等3种成像方法的图像质量。结果①MSCs平均含铁量随着培养液中SHU555A浓度的增加而升高;但SHU555A浓度增加到100 g／mL时,细胞活力开始下降(P<0．01),并可见较多蓝染铁颗粒粘附于细胞表面甚至游离于细胞外;进一步增加到200 g／mL时,细胞存活率和细胞活力均下降(P分别<0．05、0．01)。MSCs平均含铁量随着共孵育时间的增加而相应升高:但共孵育48 h时,细胞存活率降低(P<0．05)。电子显微镜检查显示, 50:1．5μg／mL SHU555A-PLL 24 h标记方案在细胞和亚细胞水平未发现氧化铁的毒性作用。该方案体外磁共振T2*WI-GRE检测闽值为7．5×104细胞。②标记细胞心肌内移植磁共振成像发现,T2*WI-Flash2d图像平均评分为(2．00±0．82)分;72*WI-Map成像、钆喷酸葡胺注射后T2*WI-Flash2d图像平均评分均为(2．60±0．84)分,明显优于前者(P=0．024)。结论50:1．5μg／mL SHU555A-PLL培养液与猪MSCs共孵育24 h是合适的标记方案。1．5 T磁共振成像仪72*WI-Flash2df笋列可对植入心脏的磁标细胞进行活体显像,T2*I-Map成像、钆喷酸葡胺注射后T2*WI-Flash2d成像可显著提高图像质量。     

乙醛脱氢酶2抑制剂daidzin对大鼠心肌细胞缺氧损伤作用的机制

目的检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)被daidzin抑制时对大鼠心肌细胞在缺氧状态下发生凋亡和信号转导的影响,验证乙醛脱氢酶2 (ALDH2)在此过程中所起的作用．方法在确定daidzin的最佳抑制浓度后,运用心肌细胞缺氧模型,比较大鼠心肌细胞在单独缺氧和经ALDH2特异性抑制剂daidzin预处理24 h后缺氧的凋亡和MAPK信号通路的改变。酶活性检测采用乙醛代谢法、ROS的检测用C400测定,凋亡的测定通过用Hoechest 33324、免疫荧光标记的流式细胞仪和TUNEL试剂盒检测,MAPK信号通路酶(ERK1／2、JNK、P38)磷酸化的改变用Western印迹法检测。结果60μmol/Ldaidzin浓度是ALDH2酶活性被抑制而细胞无凋亡发生的最佳工作浓度。在daidzin (60μmol／L)预处理24 h后再经缺氧诱导,比单独缺氧引起的心肌细胞凋亡更为明显:表现为在Hoechest 33324染色中,细胞核溶解和核碎裂(P<0．05),在FACS和TUNEL的检测中,凋亡细胞明显增加(P<0．05),经凋亡后的死亡细胞有增加趋势但差异无统计学意义,同时与MAPK信号通路有关的磷酸化ERK1／2、JNX和P38的酶活性均表达增强。结论daidzin使ALDH2酶活性降低可增加心肌细胞对缺氧导致凋亡的易感性,其机制是与细胞ROS和凋亡的增加及MAPK信号通路的激活有关。ALDH2对缺氧引起的细胞凋亡损伤具有保护作用。