双侧裂开对兔环状软骨生长发育的影响

目的：探讨双侧裂开对环状软骨生长发育的影响。方法：将幼兔环状软骨前、前后及前后加双侧裂开，8个月后测量环状软骨内径，计算其管腔面积。结果：①与对照组比较，实验组兔环状软骨管腔面积差异无统计学意义（P〉0．05）；②裂开处均由软组织连接，未形成过多瘢痕。结论：双侧裂开对环状软骨及幼兔的生长发育无显著影响。     

喉气管狭窄重建术后喉功能恢复评价

喉气管狭窄治疗后患者喉气管功能的恢复状态缺乏有效的评价系统。为解决这一问题,设计喉功能恢复的评价方法,并对经手术治愈患者的喉功能恢复情况进行评估。     

困难条件下的气管切开术

目的：探讨困难条件下气管切开术的方法和经验,以期缩短手术时间,减少并发症,降低死亡率.方法：回顾性总结我科5年来施行的困难条件下气管切开术36例.结果：36例困难条件下的气管切开术全部获得成功,未出现严重并发症及与气管切开术有关的死亡病例.结论：环状软骨弓在绝大多数情况下都可作为气管切开术明显和稳定的参考标志.3度呼吸困难的患者,条件允许时最好先经口或经鼻插管,变紧急气管切开为常规气管切开,能降低手术意外的发生.     

不同穴位重复电针预处理诱导兔脊髓缺血耐受效果的对比

目的：比较不同穴位电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用的效果，为临床提供最佳的预处理方案。方法：32只雄性新西兰大白兔随机数字表法分成4组(各组n=8)，即对照组、戊巴比妥钠组、委中穴组及足三里穴组。对照组静脉给予生理盐水1mL／kg，连续5d；戊巴比妥钠组静脉给予戊巴比妥钠30mg／kg，连续5d；委中穴和足三里穴组每天在戊巴比妥钠(30mg／kg)麻醉下，电针分别刺激委中穴和足三里穴60min／d，连续5d。最后一次预处理后24h，夹闭肾下腹主动脉20min，制作兔脊髓缺血模型；再灌注后4,8，12，24和48h分别对动物后肢运动功能评分；再灌注48h后，深麻醉下处死动物取脊髓(L6-7)，制作标本行组织病理学观察。结果：所有动物均存活，再灌注后48h电针预处理委中穴和足三里穴组后肢运动功能评分及脊髓前角运动神经元计数均明显高于对照组(P=0．001)；足三里组后肢运动功能评分和脊髓前角运动神经元计数明显低于委中穴组(P=0．001)；对照组与戊巴比妥钠组相比，后肢运动功能评分及脊髓前角神经元计数无显著性差别(P=1．0和P=0．873)。结论：电针预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用，且刺激委中穴优于刺激足三里穴的效果。     

HSV-tk/GCV自杀基因系统治疗小鼠喉癌的实验研究

目的 :研究逆转录病毒介导的 HSV- tk/GCV系统对荷人喉癌小鼠的抑瘤作用及体内旁观者效应。方法 :将含 HSV- tk基因的重组逆转录病毒感染人喉癌细胞 Hep- 2 ,G41 8筛选出抗性克隆 ,命名为 Hep- 2 /tk。将 Hep- 2 /tk细胞单独或 Hep- 2 /tk细胞与未经基因修饰的 Hep- 2细胞等比例混合接种小鼠皮下 ,联合应用 GCV,观察其抑瘤作用及体内旁观者效应。结果 :GCV治疗后 ,Hep- 2 /tk细胞或 Hep- 2 /tk细胞与 Hep- 2细胞等比例混合所致荷瘤鼠与对照组相比 ,肿瘤的生长明显受到抑制 ( P<0 .0 1 )。结论 :逆转录病毒介导的HSV- tk/GCV系统对荷人喉癌小鼠具有明显的抑瘤作用及体内旁观者效应。该系统有望成为喉癌的有效治疗途径。     

降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

兔气管纤毛上皮细胞原代培养的生物学特性及其体外生长规律

目的:建立兔气管纤毛上皮细胞原代培养模型,观察其体外培养条件下的生物学特性并确定其体外生长规律。方法:实验于2005-03/07在解放军第四军医大学唐都中心实验室完成。①纤毛上皮细胞提取及培养:日本大耳兔20只,利用酶消化法分离获取兔气管纤毛上皮细胞,无血清生长因子培养基(成分:DMEM:Ham’sF12为1∶1,并加入以下激素及生长因子:10mg/L胰岛素、5mg/L转铁蛋白、20μg/L甲状腺素、0.4mg/L氢化可的松、7.5mg/L内皮细胞生长支持物、25μg/L表皮生长因子、1mmol/L-谷氨酰胺,100IU/mL青霉素,50mg/L链霉素)体外培养。②细胞纯度及鉴定:用抗角蛋白单克隆抗体进行SP法免疫细胞化学反应,二氨基联苯胺显色阳性为上皮细胞。扫描电镜观察细胞表面结构。结果:①气管上皮细胞的分离:低温消化加刷洗法获得的气管上皮细酶胞数量较多,呈圆形,较大,悬浮旋转。②气管上皮细胞生长状态和形态特征:皿接种细胞24h后,贴壁率约为60%,细胞增大,并进入分裂套相。五六天后细胞增殖旺盛,部分无纤毛上皮细胞汇合呈多角形铺路石样相嵌生长,在相差显微镜下放大200～400倍清晰可见纤毛呈海葵样向心摆动活跃,第3周纤毛逐渐消失成遗迹,细胞凋亡。③纤毛细胞的电镜观察:见纤毛由细胞顶膜伸出,大部分集结成束,除纤毛外,还可有稠密的较细短的微绒毛由细胞顶膜伸出。④气道上皮细胞的免疫细胞化学鉴定:抗角蛋白单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,细胞达(91±3)%。结论:酶消化法分离、无血清生长因子培养基培养,以建立兔气管纤毛可上皮细胞的原代培养模型,具有成为气管组织工程种子细胞的应用价值。     

外源性p16基因稳定转染对喉癌细胞周期和增殖的影响

目的：探索p16基因在喉癌细胞内的表达作用及基因治疗方面的应用前景。方法：采用亚克隆技术，构建p16真核表达载体pCDNA3-p16.利用lipofectamine介导，将外源野生型p16基因导入喉癌细胞系Hep-2，筛选阳性克隆，采用打点杂交技术、免疫荧光、免疫组化、图像分析法观察和分析p16基因的表达。同时以空载体质粒pCDNA3为对照，用流式细胞仪分析瘤细胞生长周期、荧光染色检测细胞凋亡。结果：打点杂交、免疫荧光、免疫组化及图像分析法分析证实转染p16基因的Ｈep-2细胞有外源p16基因的表达，外源基因p16在Hep-2细胞系中的表达能抑制Hep-2细胞系的生长。流式细胞仪计数和免疫荧光检测证实p16能诱导喉癌细胞系Hep-2发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论：导入外源野生型p16基因可抑制喉癌细胞恶性增殖。