病毒与细胞凋亡

近年来的研究表明病毒感染与细胞凋亡之间有着密切的关系,在感染病毒引起细胞凋亡的过程中有许多新基因和新蛋白得到表达,并且参与作用,另外许多细胞因子也直接或间接地参与了该过程.本文对最近几年在HIV,HBV,HCV,EBV,HPV等病毒在细胞凋亡方面的研究进展进行综合介绍.     

病毒与细胞凋亡

近年来的研究表明病毒感染与细胞凋亡之间有着密切的关系，在感染病毒引起细胞凋亡的过程中有许多新基因和新蛋白得到表达，并且参与作用，另外许多细胞因子直接或间接地参与了该过程。本文对最近几年在HIV，HBV，HCV，EBV，HPV等病毒在细胞凋亡方面的研究进展进行了综合介绍。     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子研究进展

人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子是一种能促进骨髓粒系 ,单核细胞系 ,巨噬细胞系发育和成熟 ,增加外周血成熟粒细胞 ,单核巨噬细胞功能的一种细胞因子。本文着重综述了近几年国内外在人GM CSF基因表达调控 ,对效应细胞的调节以及与其相关的融合蛋白方面的研究进展。     

一株柯萨奇病毒B组5 型(Cox.B5) 病毒的分离及VP1基因分析

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Mega 4.0等软件分析处理。结果从无菌性脑膜炎患者粪便标本中,分离到CVB5,其VP1区的核苷酸长度均为831bp,未发现核苷酸插入与丢失。与浙江COXB5/ZHEJIANG/12/02(CFS)株、山东02336/SD/CHN/2002/CB5株及浙江COXB5/ZHEJIANG/13/02株氨基酸同源性最高为98.19%,与国外毒株的同源性为95.67%～97.83%。在进化树上与YZ081/SD/CHN/2005/CB5株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组5型(CVB5),分离株(KMA193-09)VP1区变异较小。     

两种rHuIL-6/GM-CSF融合蛋白对化疗药物所致小鼠白细胞减少的恢复作用

以BALB/c系小鼠作为实验动物 ,探讨两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白 [包括IL 6 (1 184 )GM CSF (9 12 7) (简称IG1) ,IL 6 (2 4 184 ) GM CSF (9 12 7) (简称IG2 ) ]在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致BALB/c系小鼠白细胞减少及造血功能的影响。注射环磷酰胺建立化疗模型 ,分别同时注射融合蛋白 7d ,于 13d摘除眼球采血 ,并进行外周血白细胞记数 ,骨髓有核细胞 ,单个核细胞记数及CFU GM的测定。实验结果表明两种rHuIL 6 /GM CSF融合蛋白对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少及造血功能的损伤具有不同程度的修复作用。     

Ⅰ~Ⅳ登革病毒基因同源性分析及Ⅱ型C蛋白二级结构预测

目的 对登革病毒（dengue virus,DENV）Ⅰ~Ⅳ基因同源性进行分析,同时对DENV Ⅱ C蛋白的二级结构进行预测,为更深入了解DENV 4个血清型间差异及衣壳蛋白C构想。方法 通过DNAMAN分子生物学分析软件和蛋白结构在线预测网站分别对登革病毒基因同源性及C蛋白的二级结构进行预测。结果 在登革病毒基因组同源性中,DENVⅠ与Ⅲ同源性最高为72%,发现DENVⅠ与Ⅳ同源性最低为67%;在登革病毒基因中,前膜基因prM的的同源性最高为82.5%,非结构基因NS2a的同源性最低为55.28%。在编码capsid的氨基酸中,占组成比例最多的为是精氨酸,可能存在的蛋白结合位点较多。结论 通过基因组同源分析图谱看出Ⅰ~Ⅳ DENV在结构基因（C、prM、E）之间和非结构基因NS1,NS2b和NS3中的同源性较高,同时蛋白二级结构预测发现DENV ⅡC蛋白可能具有分子识别和蛋白骨架等功能。     

人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

目的在原核中高效表达及活性鉴定重组人survivin蛋白分子。方法应用RT-PCR的方法得到survivin的cDNA,并构建成pBV220-survivin原核表达质粒,将其导入E.coliBl21(Gold)中,诱导表达survivin蛋白。通过DEAESepharoseFastFlow离子交换柱和SephacrylS-200分子筛二步柱纯化以获取目的蛋白。用Westernblotting检测表达产物。结果PT-PCR产物经测序分析与预期结果完全一致,表达质粒在E.coliBl21(Gold)中得到高效表达,表达的survivin蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在。通过离子交换柱和分子筛二步柱纯化及复性后获得的目的蛋白,其纯度达到95%以上。Westernblotting证明表达产物具有特异性。结论获得了较高纯度的survivin蛋白,为进一步深入研究该蛋白的细胞凋亡调控功能提供了工具。     

靶向survivin利用RNA干扰技术影响云南个旧肺鳞癌细胞株YTMLC凋亡的初步研究

 目的检测云南个旧肺鳞癌细胞株YTMLC细胞内源凋亡抑制因子survivin基因的表达以及促进YTMLC细胞凋亡的情况。方法构建和转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2至YTMLC细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测YTMLC细胞株的凋亡。结果构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA-negative非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到sur-vivin基因mRNA转录明显减少,抑制率为80.60%和70.09%;通过PI-AnnexinV双染法检测YTMLC细胞的凋亡分别达(33.42±2.42)%(P<0.01)和(20.09±1.32)%(P<0.01)。结论重组...     

云南省3000例妇女宫颈人乳头瘤病毒的检测与基因分型

目的探讨云南省妇女宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染状况、亚型及年龄分布,为该地区预防HPV感染和防治宫颈癌提供科学依据。方法收集2010年7月至2011年12月云南省各地市州县送检至昆明医学院第一附属医院及于该院妇产科门诊就诊并自愿接受宫颈HPV检查者宫颈标本3000例为研究对象,年龄为18～75岁。通过提取HPV DNA后,通过巢式PCR,美国国立生物技术信息中心(NCBI)BLAST序列比对等方法分析HPV-DNA亚型、感染率和年龄分布(本研究遵循的程序符合中国医学科学院北京和医学院医学生物学研究所人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准)。结果自3000例受试对象中,共计检出646例HPV呈阳性者,感染率为21.53%。其中高危型HPV(HR-HPV)为476例(73.68%,476/646),以HPV-16(33.59%,217/646),-58(22.45%,145/646),-33(8.51%,55/646)为主;低危型HPV(LR-HPV)为170例(26.32%,170/646),以HPV-6(12.54%,81/646),-81(7.74%,50/646),-11(4.43%,28/646)为主。HPV感染的高峰年龄为29～39岁(44.27%,286/646)。结论 HPV基因亚型分布具有一定地域性,云南省妇女宫颈HPV感染最常见类型为HPV-16,-58,-6。HPV-DNA分型检测在宫颈癌的临床诊断和预后方面具有重要意义。