大鼠CD86基因RNAi慢病毒载体的构建与功能鉴定

目的 构建大鼠CD86基因的RNAi慢病毒载体并在大鼠原代培养树突状细胞(DC)上鉴定其基因沉默效率.方法 将筛选获得的大鼠CD86基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA序列并退火成双链DNA,与pgC-GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.经由293T细胞包装shRNA慢病毒颗粒,随后将其感染原代培养的大鼠Dc细胞,采用real-time PCR和Western blot的方法检测靶基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率.结果 构建的慢病毒载体shRNA的PcR鉴定和测序正确,shRNA慢病毒颗粒感染大鼠DC细胞后CD86基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了90.6%;蛋白表达显著抑制.结论 成功构建了大鼠CD86基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在大鼠DC细胞上有效沉默靶基因.     

微分脉冲伏安法测定注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠中头孢哌酮钠含量

目的:建立微分脉冲伏安法测定注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠中头孢哌酮钠含量的方法.方法:分析复方制剂在电化学循环伏安法和微分脉冲法下的不同伏安行为,确定最佳实验条件和测定方法.结果:在250 mool·L-1磷酸二氢钠缓冲液中他唑巴坦钠没有响应,头孢哌酮钠检测质量浓度在13.7 ～ 171.4 mg·L-1与其峰电流值呈良好的线性关系(r=0.9994),最低检测限为2.58 mg·L-1,回收率(n=6,RSD l.67％ )97.8％～102.3％.结论:该方法可有效消除他唑巴坦钠对测定头孢哌酮钠的干扰,可用于注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠中头孢哌酮钠的含量测定.灵敏度高,耗材少,重复性可靠.     

大鼠OX-62+树突状细胞的体外诱导及生物学特性

目的 :从大鼠骨髓中有效地诱导、培养OX 6 2 + 树突状细胞 (dendriticcells,DC) ,观察其表型及功能特征。方法 :大鼠骨髓细胞培养 3h ,贴壁细胞加入含重组大鼠GM CSF和IL 4 ,继续培养 6～ 12d ,淘洗法去非粘附细胞中的Fc受体阳性细胞 ,流式细胞仪分析细胞表型及抗原摄取能力 ,混合淋巴细胞反应检测其刺激同种T细胞增殖能力 ,ELISA测定分泌IL 12水平。结果 :培养DC90 %以上表达OX 6 2。培养 6d的OX 6 2 + DCs具有不成熟表型 ,表达中等水平的MHCII抗原和低水平的CD80、CD86、ICAM 1;分泌少量IL 12 ;具有较强的摄取抗原能力 ,但刺激同种T细胞增殖能力极低。培养 12d的OX 6 2 + DC已经成熟 ,MHCII、CD8、CD86、ICAM 1表达明显增加 ;分泌IL 12增加 ;摄取抗原能力下降 ;刺激同种T细胞增殖能力明显增强。结论 :成功建立了体外大量扩增大鼠骨髓OX 6 2 + DC的新方法。     

经尿道自我灌注PGE1和硝酸甘油治疗阴茎勃起障碍的临床实验

已有报告经尿道注入 PGE1可诱发阴茎勃起〔1〕,但所用 PGE1剂量多为经海绵体注射剂量的 50倍以上。作者采用经尿道自我灌注 PGE1和硝酸甘油治疗阴茎勃起障碍患者 38例 ,获得满意疗效 ,且 PGE1用量较单独经尿道灌注 PGE1为少 ,报告如下。1　临床资料1.1　病例选择 :近 2年间经治的 38例阴茎勃起障碍患者 ,年龄 2 6～ 50岁 ,平均 33.5岁。其配偶性功能正常 ,关系良好。病程 6个月至 3年 ,平均 14个月。排除重要脏器器质性疾病 ,糖尿病患者血糖均已控制在正常范围内。检查证实血管源性 15例 (39.5% ) ,神经源性 11例 (2 8.9% ) ,精神性 …     

肾上腺肿瘤的现代处理

目的：总结肾上腺肿瘤的现代处理经验。方法：分析１９９２～１９９８年间诊治的３２例肾上腺肿瘤的临床资料。结果：患者３２例，男性１４例，女性１８例，平均３８．４岁。３１例接受手术治疗，１例胃癌肾上腺转移者接受化疗。嗜铬细胞瘤患者１例术中死于大出血，另１例术后死于ＭＯＳＦ。２６例随访２月～５年均健在。结论：①定期体检、Ｂ超筛查是诊断肾上腺偶发瘤的主要方法；②无症状的巨大肾上腺肿瘤应警惕嗜铬细胞瘤；③正确     

法舒地尔对高血压大鼠勃起功能的影响

目的:探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对高血压大鼠勃起功能的影响及其机制。方法:12周龄雄性SD大鼠随机分成对照组(A组)、高血压组(B组)、法舒地尔治疗组(C组),建立高血压大鼠模型后,C组给予法舒地尔[30 mg/(kg.d)]腹腔注射,A组、B组给予等量生理盐水腹腔注射,术后10周测量大鼠阴茎海绵体内压/平均颈动脉压(ICPmax/MAP),Western印迹法测定ROCK1、ROCK2蛋白在阴茎海绵体的表达水平。结果:B组收缩压(mmHg)、ROCK1、ROCK2蛋白表达(190.39±5.07、0.048±0.002、0.143±0.011)较A组(124.81±4.01、0.036±0.001、0.101±0.011)显著增加(P<0.05),C组收缩压(mmHg)、ROCK1、ROCK2蛋白表达(182.03±4.32、0.044±0.001、0.126±0.007)较B组显著降低(P<0.05),B组ICPmax/MAP(36.82±5.47)较A组(59.99±5.69)显著降低(P<0.05),C组(51.1±5.63)较B组显著提高(P<0.05)。结论:法舒地尔可通过抑制RhoA/Rho激酶信号高表达及可能的降血压作用而改善高血压大鼠勃起功能。     

经直肠超声造影下穿刺活检在前列腺特异抗原灰区前列腺癌中的诊断价值

目的探讨经直肠超声造影下穿刺活检对前列腺特异抗原灰区前列腺癌的诊断价值。方法选取2013年8月到2014年8月该院收治的可疑前列腺特异抗原灰区前列腺癌患者110例,其中经直肠超声造影穿刺者(研究组)58例,普通直肠超声穿刺者(对照组)52例,比较两组穿刺情况。结果研究组所有者共穿刺456针,平均为7.9针,对照组所有者共穿刺426针,平均为8.2针,两组比较差异无统计学意义(P0.05);研究组10例为前列腺癌,其阳性率为15.5%,对照组7例为前列腺癌,阳性率是13.5%,两组比较差异无统计学意义(P0.05);病理组织显示,研究组阳性的针数为56针(12.3%),对照组为20针(4.7%),两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。两组穿刺过程中均存在不适感和疼痛感,但是均可以耐受,穿刺结束以后研究组血尿8例,血便3例,发热1例,对照组血尿9例,血便2例,发热3例,经过处理以后上述症状均消失。结论经直肠超声造影下穿刺活检对前列腺特异抗原灰区前列腺癌具有较好的诊断价值,且安全可靠。     

先天性心脏病介入封堵失败后的外科治疗

目的 总结动脉导管未闭、房间隔缺损和室间隔缺损等简单先天性心脏病介入封堵失败后的外科手术治疗方法和结果.方法 回顾性研究2000年1月至2013年12月间因介入封堵并发症而需外科手术的26例先天性心脏病患者,通过电话及门诊复查随访,复查X线胸片、超声心动图和心电图,记录每位患者的随访结果.结果 全组无死亡病例.年龄3.0～67.0岁,平均(18.8±17.9)岁.外科手术距离介入手术的中位时间为14天(2小时～5年),中位住院天数10(7～21)天,中位体外循环时间为67(0～206) min,中位阻断时间为40(0～90) min,中位呼吸机时间8.5(2.0～88.0)h,中位ICU时间1 (1～6)天.随访7.0～ 182.4个月,平均(93.0±49.3)个月.手术效果满意.结论 先天性心脏病(CHD)的介入封堵治疗总体是安全可靠的,但应严格把握适应证,并由操作熟练的介入医师完成.若出现复杂并发症,尽早进行外科手术干预,手术结果满意.建议介入封堵术后的患者应定期随访.