骨髓间充质干细胞调控肝星状细胞RhoA、P27的表达

目的:观察体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对肝星状细胞(HSCs)RhoA信号因子及其细胞周期调控因子P27表达的影响,探讨MSCs调控HSCs细胞周期G1/S转换机制.方法:贴壁筛选法培养、纯化SD大鼠MSCs,传代至第4代使用;大鼠肝星状细胞(HSC-T6)系及纤维原细胞系冻融后传代使用.应用6孔塑料细胞培养盒,每孔使用半透膜(transwellinsert)建立上下双层细胞共培养体系,常规培养.实验分3组:空白对照组、阴性对照组、MSCs实验组.用WST-8法对HSCs增殖率进行测定:流式细胞仪检测细胞周期:RT-PCR、Western blot检测MSCs与HSCs共培养后HSCs内RhoA,P27 mRNA和蛋白的表达.结果:(1)HSCs与MSCs共培养24 h后,HSCs表现明显增殖抑制(P<0.01),且呈现时间依赖性,MSCs实验组与空白对照组、阴性对照组比较均有显著性差异(均P<0.01).(2)共培养12 h后,MSCs可阻滞HSCs由G0G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与空白对照组、阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),(3)共培养12 h后,MSCs实验组RhoAmRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(P<0.05,P<0.01),随时间的延长呈递减趋势;共培养后,MSCs实验组P27mRNA表达与空白对照组、阴性对照组比较均无统计学差异.(4)共培养12 h后,MSCs实验组RhoA蛋白表达与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递减趋势:共培养12 h后,MSCs实验组P27蛋白与空白对照组、阴性对照组比较均有统计学差异(均P<0.01),随时间的延长呈递增趋势.(5)相关性分析显示:RhoA与P27mRNA的表达无明显相关(r=0.105);RhoA与P27蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01).结论:MSCs抑制HSCs增殖的机制可能是通过RhoA-P27通路调控HSCs细胞周期改变;RhoA活性的下调可能是引起HSCs内P27蛋白表达增加的原因.     

骨髓间充质干细胞对大鼠急性肝损伤修复的影响

目的: 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植通过抑制RhoA-ROCK信号转导通路对大鼠急性肝损伤修复过程的影响.方法: 贴壁筛选法培养、纯化♂ S D大鼠BMSCs.将健康♀SD大鼠随机分为3组: 正常对照组(N组,n = 10)、CCl4组(C组,n = 10)及CCl4+BMSCs组(T组,n = 10).N组不予任何处理;T组和C组腹腔注射0.1 mL/100 g 600 mL/LCCl4花生油溶液制造急性肝损伤模型后24 h,分别经鼠尾静脉移植的间充质干细胞和等量PBS.各组于不同时间点留取标本,采用HE染色和血清肝功能酶学指标观察受损肝脏恢复过程;RT-PCR方法检测RhoA mRNA的表达;Western blot检测RhoA蛋白的表达.结果: 与C组相比,T组移植BMSCs后能显著改善CCl4急性损伤大鼠肝功能(1 d,ALT: 89.70±3.09 U/L vs 147.59±6.83 U/L,AST: 263.67±17.05 U/L vs 472.68±19.04 U/L,P＜0.01或0.05;7 d,ALT: 42.38±14.31 U/L vs 92.75±6.70U/L,AST 173.85±16.80 U/L vs 260.41±25.35U/L,均P＜0.05),并迅速修复肝脏结构.N组大鼠肝脏RhoA mRNA和蛋白表达量极低,C组经CCl4损伤后RhoA mRNA和蛋白表达量迅速增加(1.39±0.046 vs 0.57±0.010,1.23±0.020vs 0.35±0.036,均P＜0.01),此后表达量缓慢降低.T组经BMSCs移植后,与C组比较,RhoAmRNA和蛋白表达水平迅速下降.结论: Rho-ROCK信号转导通路参与CCl4导致的急性肝损伤发生、发展和修复全过程.BMSCs可能通过抑制RhoA-ROCK信号转导通路加速受损肝脏修复.     

肝硬化患者血浆一氧化氮、内毒素和肿瘤坏死因子-α检测及意义

目的 :探讨肝硬化患者血浆一氧化氮 (NO)、内毒素和肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)的变化及其意义。方法 :用比色法、鲎试验定量检验法及 EL ISA法分别测定 5 6例肝硬化患者血浆的 NO、内毒素及 TNF- α。结果 :肝硬化患者血浆 NO、内毒素及 TNF- α的含量均显著升高 ,肝功能越差 ,升高越明显 ;NO与内毒素及 TNF- α水平显著正相关 ,NO与门脾静脉宽度呈显著正相关。结论 :肝硬化时 ,NO的合成增加 ,且与内毒素、 TNF- α诱导有关 ;NO与肝硬化门脉高压形成的关系密切。     

白藜芦醇通过巨噬细胞源性外泌体调节肝星状细胞活化对肝纤维化的影响

目的：探讨白藜芦醇（RSV）通过调节巨噬细胞影响肝星状细胞活化的机制。方法：以超速离心法提取空白组（NC-E组）和RSV处理（RSV-E）组外泌体并进行鉴定。将NC-E组及RSV-E组外泌体与转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的肝星状细胞JS-1共培养，分为对照组、TGF-β1活化组（TGF-β1组）、NC-E+TGF-β1活化组（NC-E+TGF-β1组）和RSV-E+TGF-β1活化组（RSV-E+TGF-β1组）。采用免疫荧光法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、western blotting检测肌动蛋白A(α-SMA)和Ⅰ型胶原a1链（Col1a1）纤维化指标表达。Western blotting检测Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ自噬相关指标表达。结果：与对照组相比，TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ表达水平升高（P<0.05）；与TGF-β1组相比，RSV-E+TGF-β1组α-SMA、Col1a1、Beclin1和LC3 Ⅰ/Ⅱ表达水平下降（P<0.05）,NC-E+TGF-β1组与TGF-β1组差异无统计学意义（P...     

儿童幽门螺杆菌感染的相关因素研究

目的 了解儿童幽门螺杆菌(H．pylori)感染的影响因素，为其防治工作提供理论依据。方法 对不同民族儿童278例采用ELISA法及免疫印迹法联合检测血清抗体以了解H．pylori感染状态，并采用问卷的方法对儿童的父母进行调查，了解影响儿童H．pylori感染可能的相关因素。结果 少数民族儿童278名H．pylori感染的总阳性率为64．4％(179／278)。经单因素分析后发现，年龄增长、父亲受教育年限低、多人口数家庭、居住地无公厕设施、养狗者等的H．pylori阳性率较高。多因素的Logistic回归分析显示年龄、养狗是H．pylori感染的相关因素。结论 年龄、父亲受教育年限、家庭人口数、居住地公厕设施、养狗等可能是儿童H．pylori感染的相关因素。     

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目的探讨儿童幽门螺杆菌vacA基因型并分析各基因亚型与胃十二指肠疾病的关系。方法对80例H·pylori感染的儿童,采用PCR法扩增胃黏膜vacA基因亚型。结果南宁儿童H·pylorivacA基因型有s1a/m1和s1a/m2两种组合,基因频率分别为3·75%、66·25%。vacA基因各亚型在慢性浅表性胃炎及消化性溃疡中的检出率差异无显著性(P>0·05)。结论s1a/m2为南宁地区儿童幽门螺杆菌的vacA优势基因型。部分患儿同时感染多株不同vacA基因型H·pylori。vacA基因各亚型不能作为南宁地区儿童H·pylori菌株毒力强弱的指标。     

胃癌组织P53、P63蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的：探讨P53、P63蛋白表达及细胞凋亡在胃癌发生发展中的可能机制。方法：选择57例手术切除的胃癌及胃癌旁组织,用免疫组化方法检测组织中的P53、P63蛋白表达,同时用Tunel方法检测胃癌组织中的凋亡细胞。结果：胃癌组织P53、P63蛋白表达率显著高于胃癌旁组织（P〈0.05）;低、未分化型腺癌表达率显著高于高、中分化型腺癌（P〈0.05）;有淋巴转移显著高于无转移组（P〈0.05）;P53、P63高表达的癌组织,细胞凋亡指数减少,早期胃癌低于晚期胃癌（P〈0.05）。结论：胃癌组织P53、P63蛋白高表达,可能延缓细胞凋亡;细胞凋亡机制障碍可能是胃癌增生失控的基础。     

survivin mRNA和NF-κB mRNA在原发性肝癌中的表达及其意义——附30例检测结果

目的:探讨存活素信使核糖核酸(survivin mRNA)和核因子-κB信使核糖核酸(nuclear factor-κB mRNA,NF-κB mRNA)在原发性肝细胞癌(肝癌)癌组织和相应癌旁组织中的表达及其意义.方法:收集肝癌病人的肝癌组织标本及癌旁组织标本各30份,肝血管瘤病人的瘤旁正常肝组织标本(对照组)10份,采用实时荧光定量逆转录PCR技术检测标本中的survivin mRNA和NF-κB mRNA的表达水平,以及研究两者在肝癌组织中的相关性.结果:肝癌癌组织中survivin mRNA的表达水平均高于癌旁组织和正常组织,差异均有统计学意义(P＜0.05～P＜0.01),而在癌旁组织的表达水平与正常组织的表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).癌组织中NF-κB mRNA的表达均高于癌旁组织和正常组织,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),在正常肝组织、癌旁组织及癌组织中,该因子的表达呈逐渐升高的趋势.survivin mRNA和NF-κB mRNA在肝癌癌组织中的表达呈正相关(r=0.36,P＜0.05).结论:survivin mRNA和NF-κB mRNA在肝癌癌组织中呈高表达,且两者在癌组织中的表达呈正相关,提示两者可能与肝癌的发生、发展有关.     

一氧化氮、内皮素和抗利尿激素水平变化对肝硬化门脉高压的影响

目的 研究一氧化氮（ＮＯ）,内皮素（ＥＴ）和抗利尿激素（ＡＤＨ）在肝硬化中的变化与门脉高压的关系。方法 用比色法测定５８例肝硬化患者血浆的ＮＯ;用ＥＬＩＳＡ法分别测定５８例肝硬化患者血浆的ＥＴ和ＡＤＨ。结果 ＮＯ、ＥＴ和ＡＤＨ在肝硬化时均显著升高,肝功能越差,升高越明显,有腹水患者较无腹水患者显著升高：ＮＯ、ＥＴ与门、脾静脉宽度呈显著正相关（ｒ＝０．６１、０．５８,Ｐ〈０．０５）;ＡＤＨ与２４小时     

幽门螺杆菌与胃黏膜bFGF,FGFR-2表达的关系及意义

目的:探讨幽门螺杆菌(H pylori)感染的胃黏膜上皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、成纤维细胞生长因子受体-2 (FGFR-2)的表达及其在胃黏膜癌变过程中的意义.方法:选择慢性浅表性胃炎(CSG)30例、胃黏膜肠上皮化生(IM)29例、不典型增生(Dys) 31例及胃癌(GC)55例.采用免疫组化SP法检测胃黏膜上皮细胞bFGF,FGFR-2表达状况,用快速尿素酶试验和组织学Warthin-Starry嗜银染色法联合检测胃黏膜H pylori感染情况.结果:CSG组bFGF,FGFR-2的表达显著低于其余三组(IM组:χ~2=4.002,P<0.05;χ~2= 4.163,P<0.05;Dys组:χ~2=15.779,P=0.000;χ~2=15.949,P=0.000;GC组:χ~2=24.110,P= 0.000;χ~2=18.736,P=0.000),IM组的表达低于Dys组及GC组(Dys组:χ~2=4.258,P<0.05;χ~2 =4.212,P<0.05:GC组:χ~2=7.786,P<0.01;χ~2 =4.687,P<0.05),而Dys组与GC组间无显著性差异.H pylori阳性IM及Dys组bFGF,FGFR-2的表达均显著高于阴性组(IM组:χ~2=10.076,P<0.01;χ~2=7.535,P<0.01;Dys组:χ~2=11.501,P<0.01;χ~2=8.330,P<0.01).H pylori阳性Dys组bFGF,FGFR-2表达显著高于GC组(χ~2= 4.201,P<0.05;χ~2=3.982,P<0.05),H pylori阳性IM组则与GC组的表达无显著性差异;H pylori阴性Dys组及IM组bFGF的表达均显著低于GC组(χ~2=5.736,P<0.05;χ~2=17.113,P= 0.000),H pylori阴性Dys组FGFR-2表达与GC组无显著性差异而IM组的FGFR-2的表达显著低于GC组(χ~2=11.091,P<0.05).结论:H pylori感染引起胃黏膜上皮细胞bFGF及FGFR-2的过度表达可能与H pylori感染致胃黏膜上皮细胞的癌变有关.