胆管损伤后良性狭窄形成过程中c-FLIP的表达及意义

目的观察凋亡抑制因子人类细胞同源FLICE样抑制蛋白(cellular homolog FLICE-like inhibitoryprotein,c-FLIP)在胆管良性狭窄形成过程中的表达和定位情况,并探讨其意义。方法利用原位杂交法分别对15只犬(实验组)胆管损伤后2、3、4、5、6个月及其配对的15只假手术组犬的吻合口组织中c-FLIP表达和定位情况进行分析,计算每张切片的平均积分光密度值,分别比较c-FLIP在实验组及其配对的假手术组的胆道吻合口间质组织与腺体组织中表达的差异。结果实验组各时相的间质组织中c-FLIP均呈强阳性表达,以纤维细胞胞浆表达为主,而腺体组织很少表达或几乎无表达;在相应时相的间质组织中的表达明显强于在腺体组织中的表达(P0.05);间质组织或腺体组织中c-FLIP表达在不同时相之间差异均无统计学意义(P0.05)。假手术组各时相的间质组织和腺体组织中c-FLIP均呈弱阳性表达;在相应时相的间质组织和腺体组织中c-FLIP表达差异无统计学意义(P0.05);间质组织或腺体组织中c-FLIP表达在不同时相之间差异均无统计学意义(P0.05)。c-FLIP在实验组间质组织中的表达明显强于相应时相的假手术组(P0.05);而c-FLIP在腺体组织中的表达2组间差异无统计学意义(P0.05)。结论胆管损伤后,吻合口间质组织内的c-FLIP呈持续表达状态,由此所造成的细胞凋亡持续受阻效应可能与胆管良性狭窄的形成关系密切。     

miR-138-5p通过靶向SETD6基因调控Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的探究miR-138-5p通过靶向赖氨酸甲基转移酶(SETD6)基因调控Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制肝癌细胞迁移、侵袭的分子机制。方法qRT-PCR、Western印迹检测正常肝细胞L02、肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7细胞中miR-138-5p、SETD6的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测转染后Hep3b细胞中CyclinD1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验及Western印迹检测miR-138-5p与SETD6的联系。结果与人正常肝细胞L02比较,肝癌细胞HepG2、Hep3b、HuH-7中miR-138-5p的表达水平显著降低,SETD6水平显著升高(P<0.05),选择Hep3b细胞进行后续实验;与NC、miR-con组比较,miR-138-5p mimics组miR-138-5p的表达水平显著升高,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2水平显著降低(P<0.05);与NC、si-con组比较,si-SETD6组中SETD6蛋白水平显著降低,细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2水平显著减少(P<0.05);TargetScan生物信息学软件预测显示,miR-138-5p与SETD63'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,miR-138-5p与SETD63'UTR区域特异性结合,Western印迹进一步检测显示miR-138-5p与SETD6直接结合负向调控SETD6的表达;与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组细胞存活率、侵袭和迁移细胞数目、SETD6、CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著升高(P<0.05);与miR-con组比较,过表达miR-138-5p后,miR-138-5p组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著降低,与miR-138-5p+pcDNA组比较,过表达SETD6后,miR-138-5p+pcDNA-SETD6组Raf、p-MEK、p-ERK蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到miR-138-5p及SETD6的双重调控,miR-138-5p可能通过调节SETD6的表达调控Raf/MEK/ERK通路进而调节肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,可为肝癌患者分子靶向治疗研究提供思路。     

肝下下腔静脉阻断与控制性低中心静脉压在复杂肝切除术中应用的比较

目的:比较肝下下腔静脉(IIVC)阻断与控制性低中心静脉压(CLCVP)技术在复杂肝切除术中应用的安全性及有效性。方法:回顾性分析2016年3月—2017年12月行复杂肝切除术的103例原发性肝癌患者临床资料,术中所有患者均采用Pringle法控制入肝血流,其中56例行IIVC阻断(IIVC阻断组),47例行CLCVP技术(CLCVP组)降低中心静脉压(CVP)。比较两组切肝过程中CVP的变化、切肝过程出血量、手术总出血量、术中尿量、输血率、术后并发症发生率、术后肝功能与肾功能变化。结果:两组患者一般资料差异无统计学意义(均P0.05)。与切肝前对比,两组患者在切肝过程中CVP均明显下降,但IIVC阻断组CVP较CLCVP降低更明显,且IIVC阻断组切肝过程中出血量、手术总出血量、术后第3天ALT和术后第3、7天TBIL均明显低于CLCVP组(均P0.05)。两组患者术中尿量、输血率及术后并发症发生率、肾功能情况差异无统计学意义(均P0.05)。结论:IIVC阻断联合Pringle法操作简单方便,相对于CLCVP技术,其对全身血流动力学影响较小,肝功能恢复更快,且更容易降低CVP,减少术中肝脏断面出血,有利于提高复杂肝切除术的安全性。     

大鼠90%极限门静脉分支结扎后肝脏组织中IL-6的表达与肝增殖作用的相关性研究

目的 探讨在大鼠极限90%门静脉分支结扎模型中门静脉压力促进肝再生过程中白介素-6(interleukin 6, IL-6)在肝脏组织中的表达及其与肝细胞增殖作用的关系.方法 72只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分成假手术对照组和门静脉分支结扎实验组.测定术后0.5、1、3、5、7、14 d大鼠门静脉压力变化,观察实验组非结扎侧肝脏质量大体变化,光学显微镜下观察非结扎侧肝组织的病理形态变化,用免疫组化方法检测非结扎侧肝细胞的IL-6和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并进行统计分析.结果 ①门静脉压力在结扎后立即升高,0.5 d达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降,7 d 左右降至正常水平.②非结扎侧肝叶质量逐渐增加,7 d达"平台期"; 而结扎侧肝叶逐渐萎缩;非结扎侧肝细胞术后3～7 d可见较多的分裂象,肝细胞核增大.③非结扎侧肝细胞中PCNA阳性细胞计数与对照组比较,0.5～5 d表达增强(P<0.05),以后逐渐恢复正常.④非结扎侧肝叶IL-6的表达量与对照组比较0.5～5 d表达增强,术后7～14 d恢复至对照组水平 (P>0.05).⑤门静脉压力与非结扎侧肝叶肝细胞PCNA的表达在术后1、3、5 d组呈正相关(r分别为0.816、0.774、0.827, P<0.05),在术后14 d组呈负相关(r=-0 761,P<0.05);大鼠肝脏PCNA的表达在术后1、14 d组与肝内IL-6表达呈正相关(r分别为0.813、0.825,P<0.05).结论 IL-6蛋白在门静脉压力促进极限门静脉分支结扎致肝再生过程中发挥重要作用.     

叉头框蛋白E1对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响

目的研究叉头框蛋白(FOX)E1对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响。方法分别用qRT-PCR和Western印迹法测定肝癌细胞SMCC7721、Hep G2、HCCLM3和正常肝细胞HL7702中FOXE1 mRNA和蛋白水平。在HCCLM3细胞中转染FOXE1真核表达载体和对照空载体记为FOXE1组和Vector组,以不做处理的HCCLM3细胞为WT组。细胞划痕实验测定细胞迁移,Transwell小室测定细胞侵袭,Western印迹测定细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白水平。结果肝癌细胞SMCC7721、Hep G2、HCCLM3中FOXE1 mRNA和蛋白水平均明显低于正常肝细胞HL7702(P0.05)。HCCLM3细胞中FOXE1 mRNA和蛋白水平显著低于SMCC7721、Hep G2(P0.05)。Vector组细胞侵袭、迁移及细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白与WT组相比差异无统计学意义(P0.05)。FOXE1组细胞侵袭、迁移及细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin水平均明显低于WT组,而E-cadherin水平明显高于WT组,差异有统计学意义(P0.05)。结论FOXE1在肝癌细胞中低表达,FOXE1降低肝癌细胞侵袭和迁移能力,下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin水平,促进细胞中E-cadherin表达。     

安全施行门奇断流术治疗107例门脉高压合并脾亢的初步体会

目的探讨安全施行门奇断流术合理的围术期管理方法以及术中的技术要点。方法回顾性分析我中心2010年7月至2011年6月收治的107例肝硬化门静脉高压患者围术期管理及其效果。结果术中失血量平均为(251.40±179.95)ml,其中肝功Child B级者失血量为(209.89±109.6)ml,Child C级者失血量为(487.50±294.68)ml,两组分布比较差异有统计学意义(P<0.05);平均输血量为(545.45±311.01)ml,其中Child B级组3例,输血率为3.30%,Child C级组8例,输血率为50%,两组输血率差异有统计学意义(P<0.05);术后6例发生肝性脑病;术后2例继发肝肾综合征。结论术前积极改善肝功能,术中有效控制出血,保护性利尿,以及术后早期营养支持等综合措施是提高手术成功率和降低并发症发生率的有效方法。     

Glove法常规器械行单孔腹腔镜胆囊切除术的临床体会

目的:探讨Glove法常规器械行单孔腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)的临床疗效及应用价值。方法:2015年1月至2017年9月采用自制单孔腹腔镜装置、常规腹腔镜器械为67例胆囊息肉、慢性结石性胆囊炎患者行单孔LC。结果:64例成功完成手术,2例因暴露欠佳改行两孔法LC,1例因胆囊动脉出血改行三孔法LC,无一例中转开腹。手术时间30~110 min,平均(56±27)min;术中出血量2~100 ml,平均(15±4)ml。术后1例出现脐下切口脂肪液化,经换药后痊愈;无胆道损伤、术后出血、胆漏等严重并发症发生。住院1~4 d,平均(2.8±1.5)d。结论:对符合条件的患者采用Glove法常规器械行单孔LC,切口美观,无需购置专门器械,卫生经济学效果突出,手术安全、有效、简单易行,具有推广价值。     

我国首例胰腺次全切除联合自体胰岛细胞移植治疗慢性胰腺炎临床分析△

目的总结分析胰腺次全切除联合自体胰岛细胞移植治疗慢性胰腺炎的临床疗效。方法对1例全胰腺实质弥漫性病变及其他治疗均失败的慢性胰腺炎患者行胰腺次全切除联合自体胰岛细胞移植,并对随访3个月的资料进行总结与分析。结果患者术后恢复顺利,无出血、无吻合口漏、无严重低血糖等并发症发生,腹痛完全缓解,术后未使用任何镇痛药。随访期间患者空腹血糖及C肽在正常水平,腹部超声检查未发现异常。结论胰腺次全切除联合自体胰岛细胞移植是治疗全胰腺实质弥漫性病变及其他治疗均失败的慢性胰腺炎患者的理想方法,既能缓解患者的临床症状,又最大程度地预防了外科性糖尿病的发生,即使术后移植胰岛仅保留部分功能,但对于维持血糖的生理性平衡、减少糖尿病并发症的发生尤其是致命性低血糖的发作是十分重要的。     

转化生长因子α和β1在极限门静脉结扎肝脏组织中的表达及其意义

目的探讨转化生长因子（TGF）-α和TGF-β1在90%极限门静脉分支结扎大鼠肝脏组织中的表达及其与肝脏再生的关系。方法 SD雄性大鼠96只,随机平均分成假手术组和门静脉结扎（PBL）组,观察术后0.5、1、3、5、7、14、21和28d总肝脏和未结扎侧肝脏质量变化,光学显微镜下观察未结扎侧肝细胞的形态变化,用免疫组化方法检测未结扎侧肝细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）及TGF-α和TGF-β1的表达。结果 90%极限门静脉分支结扎后,结扎侧肝叶呈进行性萎缩、变小,未结扎侧肝叶占总肝质量的比例在术后1d内增加较缓慢,而在术后1～5d增加速度明显加快,5d以后增加变慢,于7d达＂平台期＂。与假手术组比较,PBL组术后肝组织中PCNA表达在术后0.5～3d明显增多（P〈0.01）,术后5d达高峰,7d有所减少,但仍高于假手术组（P〈0.01）,以后减少接近假手术组。假手术组术后肝脏可见少量TGF-α和TGF-β1表达,PBL组大鼠未结扎侧肝叶术后0.5d开始两者表达量增加,分别至术后3d和1d达高峰（P〈0.05）,术后7～28d下降并接近假手术组（P〉0.05）。结论大鼠90%PBL术后导致未结扎侧肝脏再生,而TGF-α和TGF-β1蛋白表达与肝脏再生启动和增殖过程密切相关。     

抗病毒治疗对乙型肝炎相关性肝癌术后肝内复发患者生存状况的影响

目的 探讨抗病毒治疗对乙型肝炎病毒（HBV）相关肝癌术后肝内复发患者生存状况的影响。 方法 回顾性分析2012 年1 月-2013 年6 月四川省人民医院107 例乙型肝炎相关性肝癌术后发生肝内复发 患者的临床资料,根据患者复发后抗病毒治疗情况分为抗病毒组（68 例）和对照组（39 例）。比较两组患者 复发后累积生存时间、复发后6 个月乙型肝炎-DNA（HBV-DNA）、乙型肝炎病毒e 抗原（HBe-Ag）及 甲胎蛋白（AFP）水平。采用Kaplan-Meier 法统计两组患者的2 年生存率,Cox 回归模型分析与患者复发后 2 年生存率相关的因素。结果 抗病毒组的中位生存时间为24 个月（15.6 ～ 26.1 个月）,对照组的中位生存 时间为14 个月（11.2 ～ 20.3 个月）,差异均有统计学意义（P <0.05）。抗病毒组1 和2 年累积生存率分别为 79.71% 和39.12%,对照组1 和2 年累积生存率分别为58.41% 和15.71%,差异有统计学意义（P <0.05）。经过 正规抗病毒治疗6 个月后,抗病毒组患者的HBV-DNA 拷贝数低于对照组（P <0.05）。Cox 多因素分析显示： 原发肝癌的组学分化程度、复发肿瘤≥ 2 cm 及抗病毒治疗是影响肝癌患者肝内复发后2 年生存率的主要因素。 结论 对存在抗病毒治疗指征的肝癌术后肝内复发患者采用正规的抗病毒治疗对提高患者的生存率有积极的 作用。