反向间接血凝法检测乙脑早期脑脊液中抗原

流行性乙型脑炎(乙脑)为一种季节流行的急性传染病,其确诊有赖于实验室结果.目前所用的补体结合验(CFT)及血凝抑制试验(HI)不仅繁杂而且不能作为早期诊断之用,我们用猪抗乙脑IgG 致敏羊红细胞的反向间按血凝法(RPHA)检测乙脑患者的脑脊液(CSF)中的抗原,取得较好的结果,现报道如下.一、实验方法1.猪抗乙脑IgG 在乙脑流行季节(8～10月)到乙脑疫区屠宰场,采集若干份猪血清,用补体结合法从     

两株B型流感病毒的基因组序列分析

目的 了解两株B型流感病毒的基因组序列特征。方法 对两株B型流感病毒进行全基因组序列测定和基因进化特性的分析。结果 成功扩增出两株B型流感病毒的全基因组序列,并且两毒株的基因组均属于Yamagata系类似株Ⅱ系。两株病毒的基因组序列与疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)以及Victoria系代表株B/Brisbane/60/2008、B/Malaysia/2506/2004相比,HA基因同源性为89.7%～97.3%,NB基因同源性则为95.4%～98.4%。两株病毒的HA蛋白与WHO推荐的疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)相比,存在11处氨基酸突变,其中HA的N131K氨基酸位点突变,可能对抗原性产生影响。NB的S198N氨基酸位点突变可能影响神经氨酸酶抑制剂的灵敏度。结论 两株B型流感病毒的遗传进化状态稳定,但是与同分支中的毒株基因序列部分位点存在差异。     

布氏菌分离株16SrDNA基因遗传进化分析

目的检测内蒙古布氏菌临床分离株的16SrDNA基因序列,构建16SrDNA遗传进化树,确定该菌株的分类地位。方法用BCSP31-PCR对临床分离株检测,再进行16SrDNA双向测序;从GeneBank下载标准参考菌株和与布氏菌有共同抗原细菌的16SrDNA基因序列;用Mega6.0进行序列比对并构建遗传进化树。结果BCSP31-PCR结果显示均有223 bp扩增条带,16SrDNA测序得到单一基因序列;比对后发现有4处特异片段,经Blast比对,位于844-1224包括380 bp的片段为布氏菌独有;进化树显示布氏菌临床分离株与标准菌株聚在1个末端分支上,遗传距离接近0,无法精细区分相互关系;与人苍白杆菌聚集在1个亚分支上,遗传距离0.019;与其它试验菌株如霍乱弧菌、小肠结肠炎耶尔菌遗传进化距离较远,遗传距离>0.02。结论从遗传进化角度对布氏菌分离株与标准菌株的亲缘关系进行分析,布氏菌所有种型遗传距离接近,提示布氏菌16SrDNA为高度保守序列,不宜做遗传进化分析的靶基因;布氏菌与人苍白杆菌有较近的亲缘关系;布氏菌属16SrDNA特有的380 bp的基因片段可作为布氏菌快速鉴定的靶序列。     

狂犬病毒核蛋白基因的克隆及核蛋白主要抗原表位分析

目的:克隆狂犬病毒ERA株核蛋白基因并对核蛋白主要抗原表位进行分析.方法:根据GenBank中已发表的RV N基因序列,设计合成了1对特异性引物,对RV ERA株N基因进行了RT-PCR扩增.将PCR产物纯化后与pMD18-T连接得到重组质粒pMD-N,并进行核苷酸序列测定.结果:该基因全长1 353 bp,编码450个氨基酸.RV ERA株与Gen-Bank中RV不同固定毒株和分离毒株N基因相比,核苷酸的同源性为98.0%～99.6%,推导的氨基酸序列的同源性为98.3%～99.60A,.核蛋白主要抗原表位分析表明,ERA株与其他固定毒株和分离毒株相比,仅在BC抗原表位(369～383位氨基酸)和Th抗原表位(394～408位氨基酸)处有1～3个氨基酸的不同,其他表位无差异.但与Iagos bat、Mokola和Duvenhage毒株相比,抗原位点氨基酸组成差异明显.结论:RV ERA株N基因可用于基因工程疫苗研制和核酸检测的靶基因;核蛋白可作为抗原用于狂犬病的检测.     

狂犬病病毒感染小鼠脑组织中lncRNA表达谱分析

目的通过RNA测序的方法研究狂犬病病毒(RABV)小鼠脑组织中lncRNA的表达谱和功能。方法用RABV CVS11株感染小鼠脑组织并提取总RNA,构建文库,上机测序分析获得CVS11毒株感染小鼠脑组织mRNA和lncRNA表达谱,并进行实时荧光定量PCR验证,通过GO和KEGG分析差异表达lncRNA和mRNA的功能。结果与未感染组相比,CVS11感染组有88个lncRNA差异表达,2648个mRNA差异表达(FC≥2,P0.05)。采用实时定量PCR验证差异表达,结果与RNA-seq结果相一致。GO分析差异表达的lncRNA共定位基因高度富集在如氮化合物的解毒,氮化合物的细胞解毒和硝基苯的代谢过程等生物过程中;KEGG分析差异表达的lncRNA靶点参与Toll样受体,NF-κB,MAPK,趋化因子,单纯疱疹和流感A感染等重要信号通路。结论 lncRNA在RABV感染期间参与调节免疫反应,因此可作为狂犬病预防和治疗的潜在靶点。通过高通量RNA测序研究感染小鼠脑组织中lncRNA和mRNA概况。     

拉沙热疫苗研究进展

拉沙热是由拉沙病毒(Lassa virus, LASV)引起的一种急性传染病,主要由啮齿类动物传给人. 西非是拉沙热最主要的流行区,该地区每年有几十万人患病,数千例死亡.由于LASV的高致病性,被列为潜在生物战剂,当前无获批的拉沙热疫苗.研究表明传统的灭活疫苗免疫保护效果不理想,LASV基因重组的复制增殖型病毒载体疫苗、复制缺陷型病毒载体疫苗和DNA疫苗等新型疫苗显示较好的发展前景. 但是这几种新型疫苗仍处于临床预试验阶段或临床试验阶段.     

狂犬病病毒的功能蛋白研究进展

狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种高度致死性中枢神经系统感染的疾病。RABV主要由5个功能蛋白组成,各个蛋白在致病性方面均发挥重要的作用。本文就狂犬病病毒各个功能蛋白的国内外研究进展进行综述,从而加深对于RABV致病性的了解。     

豚鼠TNF、IFN-γ、IL-1荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立测定豚鼠肺脏中TNF、IFN-γ、IL-1的荧光定量PCR方法。方法根据已有序列设计TNF、IFN-γ、IL-1基因检测引物,建立荧光定量PCR检测方法。结果用建立的荧光定量PCR检测豚鼠TNF、IFN-γ、IL-1基因的溶解曲线峰值单一,扩增水平稳定。结论成功建立了检测豚鼠TNF、IFN-γ、IL-1基因的荧光定量PCR方法,为豚鼠先天免疫方面研究提供技术支持。     

尼帕病毒侵入宿主细胞机制的研究进展

尼帕病毒属于副粘病毒科病毒,可以引起人和猪等多种动物中枢神经系统、呼吸系统病变的急性、高度致死性传染性病毒性疾病,首次报道于1999年的马来群岛,再次暴发于东南亚,病死率高达40%,并且怀疑可以在人与人之间进行传播。本文综述了尼帕病毒侵入宿主细胞及其F蛋白介导的细胞融合机制的研究进展。     

2020年前中国很难根除狂犬病

中国狂犬病死亡人数居世界第二位世卫组织曾倡议到2020年消除人间狂犬病,中国狂犬病死亡人数居世界第二位。面对中国严峻的防控形势,到2020年前消除狂犬病,中国的任务很艰巨。荷兰、法国、意大利等国家的实