NLRP1炎症体在糖尿病大鼠心肌组织内的表达

目的 观察高脂高糖饮食和糖尿病分组中核苷酸结合寡聚化结构域样受体1（NLRP1）炎症体在心肌组织中表达的情况,分析其在糖尿病心肌病中潜在的致病机制。方法 将实验大鼠分为3组：正常组、高糖高脂饮食组和糖尿病组。以链脲佐菌素（STZ）30 mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,造模成功8周后行血清学检测各组大鼠血清胆固醇、甘油三酯、空腹血糖及空腹胰岛素,并计算得出胰岛素抵抗指数（IRI）和胰岛素敏感性指数（ISI）;心脏彩超评估心脏结构及功能;免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测心肌组织NLRP1、ASC和caspase 1的蛋白及mRNA表达等情况。结果 与正常组相比,高糖高脂饮食组体质量、血 清胆固醇、甘油三酯增高,NLRP1 mRNA、caspase 1 mRNA及NLRP1蛋白表达增加(P<0.01),但空腹胰岛素、IRI、ISI、心脏彩超未见明显变化（P>0.05）,心肌组织ASC和caspase 1蛋白及血清IL-1β、IL-18水平无明显变化（P>0.05）,而糖尿病组中,大鼠血清胆固醇、甘油三酯、空腹血糖升高,空腹胰岛素、ISI和体质量降低（P<0.01）,左室舒张末期内径、左心室收缩末期内径增大,射血 分数、短轴缩短率及E/A比值下降并伴有NLRP1/ASC/caspase 1通路mRNA同步增加和NLRP1、caspase 1蛋白水平升高,但心肌组织中ASC蛋白表达无明显升高（P>0.05）。此外糖尿病组中IL-1β、IL-18也较正常组升高（P<0.05）;与高糖高脂饮食相比糖尿病组大鼠空腹血糖升高伴有空腹胰岛素,ISI和体质量降低（P<0.01）,心脏彩超提示左心室收缩末期内径,射血分数及E/A比值下降并伴有NLRP1、caspase 1蛋白表达增加和血清L-1β、IL-18升高（P<0.01）。结论 糖尿病可诱发心脏结构和功能异常及心肌炎症反应,其机制可能与NLRP1/ASC/caspase 1炎症体活化有关。     

二十二碳六烯酸对心房颤动大鼠心房肌细胞双孔钾通道TASK-1表达的影响

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)在大鼠心房颤动(房颤)模型中的作用及其对双孔钾离子通道TASK-1表达的影响.方法 SD雄性大鼠分为4组:(1)对照组:每天注射等体积生理盐水;(2)DHA组:每天注射等体积DHA;(3)房颤组:每天给予乙酰胆碱+氯化钙混合液建立房颤模型;(4)房颤DHA组:每天先给予DHA,半小时后建立房颤模型,方法同房颤组.分别观察各组大鼠房颤发生时间和检测心房有效不应期(ERP);应用Western blot测定大鼠心房肌中TASK-1蛋白表达及RT-PCR测定大鼠心房肌中TASK-1 mRNA表达.结果 房颤DHA组较房颤组大鼠心房颤动出现时间明显推迟,稳定时间提前,分别为第3天和第1天出现,第8天[(22±5.0)s]比第10天[(35±5.3)s]稳定;每天房颤持续时间显著缩短,与对照组相比,房颤组ERP明显缩短[从(77.3±6.0)s到(60.4±4.3)s],与DHA组相比,房颤DHA组ERP显著缩短[从(90.8±3.4)s到(82.4±5.7)s];与对照组相比,DHA组TASK-1 mRNA和蛋白表达降低,房颤组及房颤DHA组TASK-1 mRNA和蛋白表达水平升高;与房颤组相比,DHA组及房颤DHA组TASK-1 mRNA和蛋白表达降低.结论 DHA具有抗房颤作用,其机制可能与下调双孔钾离子通道TASK-1蛋白表达有关.     

冠心病病人血清亲环素A与冠状动脉病变程度的关系

目的探讨血清亲环素A（cyclophilin A,CyPA）水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heart disease,CHD）病人冠状动脉病变程度的关系。方法选取经冠状动脉造影后确诊为CHD的病人121例,根据冠脉造影结果分为单支病变组、双支病变组、多支病变组,根据Gensini积分分为轻度（Gensini积分≤30分）病变组、中度（Gensini积分30~60分）病变组、重度（Gensini积分≥60分）病变组。检测并比较各组CyPA、金属基质蛋酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）和C反应蛋白（CRP）水平。结果随着冠状动脉病变支数增加,CHD病人的CyPA、MMP-9和CRP水平也随之升高（P < 0.05）;随着冠状动脉病变Gensini积分增长,CHD病人的CyPA、MMP-9和CRP水平也随之升高（P < 0.05）。CHD病人血清CyPA与MMP-9、CRP和Gensini冠脉病变积分正相关。结论CHD病人冠状动脉病变支数越多,冠脉病变Gensini积分越高,CyPA水平亦随之增高,CyPA在一定程度上能间接反映冠脉病变的严重程度,其机制可能是参与了炎症反应。     

心房颤动患者血清亲环素A、基质金属蛋白酶-2的表达水平及临床意义

目的：检测心房颤动患者血清中亲环素A（Cy-PA）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）在心房颤动中的临床意义。方法：选取窦性心律患者100例为对照组（非房颤组）。采用ELISA法检测各组患者血清中CyPA、MMP-2和TIMP-2水平,同时测量左心房前后径（LAD）。结果：观察组左心房前后径大于对照组（P〈0.01）,且与房颤持续时间密切相关。显示观察组患者血清中CyPA与MMP-2水平呈正相关,CyPA浓度与LAD呈正相关。结论：CyPA和MMP-2/TIMP-2的联合检测可能对判断心房颤动患者的病变程度及指导治疗具有一定作用。     

线粒体乙醛脱氢酶2通过下调CaN-NFAT3信号通路拮抗高糖引起的乳鼠心肌细胞损伤

目的探讨钙调神经磷酸酶（CaN）-活化的T细胞核因子（NFAT）3通路是否介导乙醛脱氢酶（ALDH）2对高糖处理的乳鼠 心室肌细胞的作用。方法无菌条件下取出生3 d内SD大鼠乳鼠心脏,心尖部剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶2混合酶消化成单个 细胞,经差速贴壁后并在培养液中加入5-Brdu进行培养,当其生长呈融合状态时对心室肌细胞进行处理。应用免疫荧光检测培 养的乳鼠心肌细胞内α-SA蛋白以此鉴定原代培养心室肌细胞纯度;实验涉及如下分组：5.5 mmol/L糖对照组（M）、30 mmol/L 高糖组（MH）、30 mmol/L 高糖加乙醛脱氢酶2 激动剂（Alda-1）组(MHA)、30 mmol/L 高糖加乙醛脱氢酶2 抑制剂（Daidzin）组 （MHD）、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）和NFAT3抑制剂（11R-VIVIT）组（MHAV）;荧光探针检测细胞内钙离 子浓度;ELISA测定细胞内CaN含量;Western blot检测ALDH2、CaN、NFAT3蛋白表达。结果与M组相比,MH组ALDH2蛋 白表达降低（P<0.05）,CaN蛋白表达增高（P<0.05）、NFAT3蛋白表达以及细胞内CaN含量、Ca2+浓度均增高（P<0.01）;与MH组 相比,MHA组Ca2+浓度降低（P<0.05）、细胞内CaN含量降低（P<0.01）、CaN蛋白和NFAT3蛋白表达降低（P<0.05）、ALDH2蛋白 表达增加（P<0.05）,MHD组Ca2+浓度升高（P<0.01）、细胞内CaN含量升高（P<0.05）;与MHA组相比,MHAV组的ALDH2蛋白 表达量无明显变化（P>0.05）,NFAT3蛋白表达量降低（P<0.05）。结论线粒体ALDH2对高糖诱导的乳鼠心肌细胞起保护作用, 其机制可能与ALDH2对Ca2+-CaN-NFAT3信号通路的负调节作用有关。     

积雪草苷对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制

目的 研究积雪草苷降血压和对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制。方法 将SD大鼠分为正常对照组、积雪草苷低剂量组(50 mg/kg)和积雪草苷高剂量组(100 mg/kg),6只/组,治疗组每日予以积雪草苷对应剂量灌胃处理,分别在给药前1 d、给药第8天和给药第15天测大鼠尾动脉收缩压,HE染色评估大鼠胸主动脉血管组织形态变化。取大鼠胸主动脉血管环,以舒张血管百分比为指标,考察不同浓度积雪草苷对基础状态血管环、去甲肾上腺素(NE,1×10^-6mol/L)及氯化钾(KCl,60 mmol/L)收缩的内皮保留或去内皮胸主动脉血管环的舒张作用;对内皮保留的血管环,分别以左旋硝基精氨酸甲酯(0.1 mmol/L)、吲哚美辛(1×10^-5mol/L)、锌原卟啉Ⅸ(10μmol/L)和6种钾离子通道阻滞剂：四乙基氯化铵(5 mmol/L)、格列苯脲(1×10^-5mol/L)、氯化钡(0.1 mmol/L)、Iberiotoxin(0.1μmol/L)、4-氨基吡啶(0.1 mmol/L)、TASK-1-IN-1(1×10^-5     

2型糖尿病病人血清MMP9和PI3K水平与心房颤动的相关性研究

目的探讨血清基质金属蛋白酶9(MMP9)和磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)水平变化与2型糖尿病病人(T2DM)心房颤动(AF)发生、发展的关系。方法收集200例心电图提示AF的T2DM病人, 其中阵发性房颤(PaAF)62例, 持续性房颤(PeAF)70例, 永久性房颤(PerAF)68例。并选择90例单纯性T2DM病人作为对照组。ELISA和Western blotting法分别测定血清中MMP9、PI3K水平及蛋白表达情况, 并分别与已测得的左心房内径(LAD)进行相关性分析。纳入MMP9、PI3K和LAD行Pearson相关分析和二元logistics回归分析, 得出影响AF的因素。结果与对照组相比, PaAF、PeAF与PerAF组MMP9表达水平升高(P < 0.01)、PI3K表达水平降低(P < 0.01)。与PaAF组相比, PeAF组与PerAF组MMP9表达水平升高(P < 0.01)、PI3K表达水平降低(P < 0.01)。与PeAF组相比, PerAF组MMP9表达水平升高(P < 0.01)、PI3K表达水平降低(P < 0.01)。Western blotting检测显示MMP9存在上调趋势, PI3K存在下调趋势。Pearson法对MMP9、PI3K与LAD进行相关性分析, 结果显示在所有实验组中MMP9水平与LAD呈正相关关系(r=0.842, P < 0.01);PI3K与LAD呈负相关关系(r=0.868, P < 0.01)。二元logistics回归分析显示MMP9、PI3K、LAD是AF的危险因素(P < 0.05)。结论T2DM合并AF病人血清中MMP9表达水平明显升高, PI3K表达水平明显降低, 且与LAD有一定的相关性, MMP9、PI3K的激活与表达与T2DM病人AF的发生可能有关。     

Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1钾通道在缺氧性肺血管收缩中的作用

目的和方法:雄性Wistar大鼠随机分为两组:常氧对照组和低氧组。用酶消化的方法获得单个大鼠肺内动脉平滑肌细胞(PASMC)。采用全细胞膜片钳技术,记录PASMC静息膜电位(Em)和电压门控性钾通道电流(IKv),通过细胞内灌流Kv1.2/Kv1.5/Kv2.1抗体混合液(1∶125),探讨Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1钾通道在缺氧性肺血管收缩(HPV)中的作用。结果:①低氧组膜电位明显去极化,由(-51.8±0.8) mV 去极到(-47.2± 0.7) mV,P<0.01,IKv与常氧组相比显著降低,在测试电压-30 mV时, IKv由(6.16±0.58) pA/pF 降为 (3.31±0.37) pA/pF (P<0.01)。②细胞内灌流Kv1.2/Kv1.5/Kv2.1抗体混合液可显著抑制常氧对照组PASMC 的IKv,使Em去极化,然而细胞内灌流Kir2.1/Kir2.3/Kir4.1(1∶125)抗体混合液对常氧对照组PASMC 的IKv和Em无显著影响。③细胞内灌流Kv1.2/Kv1.5/Kv2.1抗体混合液和Kir2.1/Kir2.3/Kir4.1抗体混合液对低氧组PASMC的IKv和Em均无显著影响。结论:Kv1.2、Kv1.5、Kv2.1可能是氧敏感型通道,并介导了低氧性肺血管收缩。     

案例教学法在全科医学专业内科学教学中的应用

目的 全科医学是一门新的综合的医学临床学科,以人为主体。全科医生是提供全科医疗服务的主体。全科医学教育主要是培养熟悉全科医疗诊疗模式、掌握全科医学基础知识及临床技能的人才。内科学是医学生必须掌握的专业知识领域,是全科医学教学不可缺少的部分。本文对案例教学法(case-based learning)在全科医学专业内科学教学中的应用进行初步探索,为以后的教学提供参考和借鉴。 方法 在全科医学内科学教学中引入案例教学法,具体实施过程中,以教师为指导者,精心选择真实案例。教师首先给学生讲授内科学理论知识,在学生对知识点熟悉和掌握的基础上引入案例,学生们围绕案例进行分组讨论,且每个同学都参与到讨论中去,从而通过这个过程锻炼学生的自身能力。教师再组织学生进行课堂讨论并进行指导,最终做出结论。学生的评价及课后成绩为该教学模式的考核体系。 结果 案例教学法可增加学生学习兴趣和学习热情,提高学生学习主动性和积极性,锻炼学生的语言和文字表达能力,增进团队协作互助,培养学生的临床思维能力及综合能力。 结论 案例教学法是一种适合普通高等医学院校全科医学内科学的教学方法,有利于培养合格的全科医生,可以在今后的教学中推广。      

线粒体ALDH2对高糖处理的乳鼠心肌成纤维细胞中自噬相关蛋白影响

目的探讨自噬是否介导乙醛脱氢酶（ALDH）2对高糖处理的乳鼠心肌成纤维细胞的作用。方法无菌条件下取出生3d内 SD大鼠乳鼠心脏,剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶2混合酶消化成单个细胞,经差速贴壁后并传代培养,当传至3代时进行处理。应 用免疫荧光检测培养的乳鼠心肌成纤维细胞内波形蛋白以此鉴定原代培养心肌成纤维细胞纯度;实验涉及如下分组：5.5 mmol/L 糖对照组（F）、30 mmol/L高糖组（FH）、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）组(FHA)、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2 抑制剂（Daidzin）组（FHD）、30 mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）和乙醛脱氢酶2抑制剂（Daidzin）（FHAD）;Western blot检测ALDH2、微管相关蛋白1轻链3B亚基（LC3B）、Beclin-1的蛋白表达;羟脯胺酸试剂盒测定细胞培养液中羟脯胺酸含量; CCK-8试剂盒测定心肌成纤维细胞增殖能力。结果与F组相比,FH组ALDH2蛋白表达降低,Beclin-1、LC3B蛋白表达降低,细 胞培养上清液内羟脯胺酸含量、细胞数目增高;与FH组相比,FHA组Beclin-1、LC3B蛋白表达、ALDH2蛋白表达增加,细胞数 目、细胞内羟脯胺酸含量降低,与此同时FHD组ALDH2蛋白及Beclin-1、LC3B表达降低,细胞数目、细胞内羟脯胺酸含量增高。 结论线粒体ALDH2抑制高糖诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖作用,其机制可能与ALDH2对自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B的 上调作用有关。