鼠伤寒沙门氏菌yejE基因缺失对沙门氏菌囊泡结构完整性的影响

目的 沙门氏菌囊泡（Salmonella-containing vacuole, SCV）是沙门氏菌进入宿主细胞后产生的一种类似于吞噬体的结构。SCV结构完整性一旦被破坏,其内包裹的沙门氏菌将进入细胞质并通过MHC-I途径激活宿主CD8 + T细胞免疫应答。有研究表明沙门氏菌yejE基因能够影响宿主CD8 + T细胞免疫应答,但具体机制尚不明确。本研究将观察并计算yejE基因缺失后鼠伤寒沙门氏菌的SCV逃逸率,探讨沙门氏菌yejE基因是否通过改变SCV的结构稳定性,影响宿主的CD8 + T细胞免疫应答。方法 （1）采用Red同源重组技术或P22噬菌体转导技术,在减毒沙门氏菌TT-16（ΔclpP TT-1）的基础上构建缺失了sifA、yejE基因或二者同时缺失的减毒沙门氏菌,随后导入质粒pGEX-6P-1-sf-GFP,获得一系列能够在IPTG诱导下表达绿色荧光蛋白的减毒沙门氏菌;（2）用构建好的菌株分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,于感染后2h和6h进行免疫荧光染色;（3）采用激光共聚焦显微镜观察并计算各菌株的SCV逃逸率。结果 感染后2h和6h,鼠伤寒沙门氏菌yejE和sifA单缺失株的逃逸率均显著高于亲本株,且sifA与yejE双基因缺失株的逃逸率与yejE或sifA单缺失株的SCV逃逸率相比无显著差异性。结论 鼠伤寒沙门氏菌yejE基因能通过改变SCV的结构完整性,影响宿主CD8 + T细胞免疫应答;此外,sifA与yejE基因可能通过相同的途径影响SCV的结构完整性。     

基于网络药理学探究王琦院士治疗精液不液化核心组方的作用机制及实验验证

目的：利用网络药理学和分子对接技术探究核心组方治疗精液不液化的作用机制。方法：利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和Uniprot数据库对王琦院士的核心组方药物进行成分和靶点的处理收集,再借助Gene Cards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)对疾病靶点进行收集,与药物靶点取“药物-疾病”交集,获得核心靶点,使用String数据库绘制核心靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。运用R语言平台进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,构建核心组方“成分-靶点-疾病”通路图。对关键成分与核心靶点进行分子对接,最后通过造模和药物对大鼠进行干预后,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠前列腺中细胞因子水平,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-17mRNA的表达量,对核心作用靶点及信号通路进行动物实验验证。结果：核心组方中有活性成分29个,对应靶点194个,与疾病靶点交集靶点24个,关键成分有槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇等,核心靶点涉及肿瘤坏死因子(TNF)、纤溶酶原激活物抑制因子(SERPINE1)、白细胞介素...     

62例心源性猝死的法医学鉴定分析

<正>猝死(sudden unexpected natural death)是由于机体潜在的疾病或重要器官急性功能障碍导致的意外的突然死亡。猝死者身体往往貌似"健康",预先没有任何征兆或仅有极轻微的几乎不会被想到可能致死的症状或体征,猝死常发生在日常生活、工作或睡眠中,出乎人们意料。由于意外和突然,一方面易引起对死因的质疑、误解,另一方面亦可能借其掩盖其犯罪行为,因此在法医病理学领域内对猝死     

5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃的制备

2,3-二氢苯并呋喃-5-乙酸与氯甲酸乙酯反应得混酐后,再经硼氢化钠还原制得5-羟乙基-2,3-二氢苯并呋喃,在三苯膦作用下经N-溴代琥珀酰亚胺溴代,制得达非那新中间体5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃,总收率约83%。     

从少阳论治椎动脉型颈椎病理论探析

椎动脉型颈椎病是骨科临床常见疾病。我们认为少阳与椎动脉型颈椎病病因病机关系密切。少阳之经络循行于本病的发病部位。少阳之生理,包括少阳主春生之气、少阳为枢、少阳主骨的功能正常,则气血通畅,筋骨协调;少阳及其脏腑功能失常则气血不畅,痰瘀内生,脑窍失于清明。基于以上理论则可从少阳论治椎动脉型颈椎病,临床可采用针刺、推拿、中药辨证治疗。     

原发性肝癌的综合介入治疗及其根治性疗效分析

目的 探讨原发性肝癌的综合介入治疗及其根治性的疗效.方法 回顾性分析2003年1月至2008年1月间本院接受住院综合介入治疗的538例原发性肝癌患者的临床资料和治疗方案.分析原发性肝癌的综合介入治疗及其根治性疗效.结果 20例(3.7%,20/538)首次评价中出现"进展",余518例曾获得过"有效"评价结果 ;其中416例(77.3%,416/538)最终出现"进展"评价结果 ,进展最快出现在首次治疗后4月,最慢出现在首次治疗后24月;102例(19.0%,102/538)则获得"显效"评价结果 ,其中53例最后获得"根治"评价结果 .这53例患者目前全部存活,随访时间最长为64个月,最短为16个月,中位生存期为36.5个月.结论 综合介入治疗是原发性肝癌的有效治疗手段,可使部分原发性肝癌患者获得根治.     

P22 VLPs载体多表位幽门螺杆菌疫苗的构建及表征分析

目的 利用生物信息学软件分析幽门螺杆菌主要抗原蛋白的T/B淋巴细胞表位,评估不同表位组合的抗原性与致敏性,预测优势表位组合与P22噬菌体病毒样颗粒（ VLPs）融合后的三级结构,构建基于P22 VLPs的多表位幽门螺杆菌疫苗。方法 利用IEDB数据库、NetMHCIIpan-3.2 和BepiPred 2.0在线工具对抗原蛋白的T/B淋巴细胞表位进行搜索和预测;利用VaxiJen v2.0、AllerTOP v2.0和ProtParam在线服务器分别对随机串联组成的不同表位组合进行抗原性、致敏性和理化性质进行分析;采用AlphaFold2、ProSA-web、RAMPAGE及ERRAT等软件对融合蛋白的三级结构进行预测、评估;构建P22 VLPs载体多表位幽门螺杆菌疫苗P22-C3,通过诱导表达及纯化获得疫苗实体;运用SDS-PAGE、透射电子显微镜和动态光散射技术对疫苗实体进行表征分析。结果 将筛选得到的高保守、非致敏优势抗原表位进行随机串联,获得了20个表位组合（C1-C20）,这20个表位组合均具有良好的抗原性和非致敏性。其中,表位组合C3不仅抗原评分高、理化性质稳定且预测的结构模型符合天然构象。将C3序列融合至P22 VLPs衣壳蛋白（Gp5）的C端,获得了基于P22 VLPs的幽门螺杆菌疫苗P22-C3。表征分析显示P22-C3较野生型的P22 VLPs,衣壳更厚,直径更大。结论 本研究通过多维生物信息学软件分析了不同Hp表位组合的理化特性和三维结构,成功构建了基于P22 VLPs的幽门螺杆菌疫苗,为疫苗后期的动物试验和I期临床试验奠定了基础。