单纯疱疹病毒2型全长糖蛋白D抗原的原核表达及抗原性分析

目的:构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)全长糖蛋白D(gD)基因原核表达质粒,研究其编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达,并鉴定重组蛋白的gD抗原性。方法:提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,并转化大肠杆菌BL21。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白GST-gD,并进行免疫学鉴定。结果:获得了gDDNA。测序鉴定表明,该序列与Gen Bank中的序列一致,gD基因已正确插入到pGEX-4T-1中。重组融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD经IPTG诱导后能在大肠杆菌中高效表达,Western Blotting证实,该蛋白具有天然gD抗原性。结论:成功构建了融合蛋白表达载体pGEX-4T-gD,在大肠杆菌中获得了有效表达,并证实融合蛋白具有gD免疫原性。为进一步研究gD蛋白的免疫学特性,制备gD亚单位疫苗和单克隆抗体奠定了基础。     

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。     

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗肝硬化失代偿期的近期疗效观察

目的：观察阿德福韦酯联合拉米夫定治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期患者的近期疗效。方法：将20例HBV—DNA阳性肝硬化失代偿期患者随机分为二组：拉米夫定治疗组,阿德福韦酯、拉米夫定联合治疗组。治疗前后分别进行生化指标及HBV—DNA定量检测。结果：阿德福韦酯联合拉米夫定治疗组在肝脏生化指标改善及存活率方面均优于对照组,差异有显著性（P〈0．05）。结论：阿德福韦酯、拉米夫定联用可发挥优势互补作用,对乙肝肝硬化失代偿期患者的近期疗效更满意。     

鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶表型检测及其耐药特性

目的了解鲍曼不动杆菌的耐药特性及产碳青霉烯酶情况。方法应用K—B（Kirby—Bauer）法进行药物的敏感性试验,应用改良的Hodge实验进行碳青霉烯酶表型检测。结果本院分离的鲍曼不动杆菌除多黏菌素B还保持着相对较高的敏感性,其余常见抗菌药物的耐药率均已超过了68．0％。200株鲍曼不动杆菌中产碳青霉烯酶阳性菌株162株,阳性率为81．0％。结论本院分离的鲍曼不动杆菌耐药情况十分严重,且具有多重耐药性;改良的Hodge实验对鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶表型检测具有较高的临床应用可行性。     

白癜风患者CD+4 CD+25调节性T细胞水平检测

目的探讨CD4 CD2 5调节性T细胞在白癜风发病的作用。方法用流式细胞仪直接免疫荧光检测进展期白癜风患者、接受NB-UVB治疗后的白癜风患者及正常人外周血CD4 CD2 5调节性T细胞的百分率。结果进展期白癜风患者CD4 CD2 5调节性T细胞百分比低于正常人,经NB-UVB治疗后的白癜风患者CD4 CD2 5调节性T细胞百分比较进展期白癜风患者明显提高,差异有显著性,与正常对照组相比差异无显著性。结论CD4 CD2 5调节性T细胞可能在白癜风的发病中起一定的作用。     

预缺血处理通过增强nNOS磷酸化对缺血性脑损伤的保护作用

目的 观察预缺血处理对脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合酶(nNOS)磷酸化的影响及其具体的分子信号机制.方法 制备SD 大鼠大脑四动脉结扎模型及预缺血模型,采用免疫印迹、免疫沉淀等技术,检测各实验组中nNOS与突触后致密体95(PSD95)的结合体及nNOS(Ser847)磷酸化水平的变化.结果 预缺血组nNOS与PSD95的结合体及nNOS(Ser847)磷酸化水平较缺血/再灌注组明显升高(P<0.05).结论 预缺血通过增强nNOS与PSD95的结合从而促进nNOS(Ser847)的磷酸化发挥其对神经元的保护作用.     

神经外科轮转护士的情景模拟培训

目的探讨对神经外科轮转护士进行情景模拟培训的效果。方法将神经外科轮转护士按时间分成对照组38名,观察组38名,对照组应用常规分阶段进行培训,观察组在对照组基础上应用情景模拟培训,比较两组的理论考核成绩,能独立值班所需的时间,应急能力,值班时与医生配合能力,护理缺陷发生数及患者的满意度。结果观察组的应急能力、值班时与医生配合能力、患者满意度均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05),观察组能尽早的适应独立值班(P0.05),护理缺陷少于对照组(P0.05);而两组的理论考核成绩差异无统计学意义(P0.05)。结论情景模拟培训可以使神经外科轮转护士提前了解科室的专科特点,有利于理论联系实际,提高轮转护士的主动学习能力,改善轮转护士的应急能力,减少护理缺陷的发生,提高患者满意度,从而较快适应独立值班。     

屎肠球菌耐药特性及其对万古霉素MIC值的变迁

目的 了解屎肠球菌的临床感染特点和耐药特性,监测屎肠球菌对万古霉素MIC值的变迁,为指导临床用药,控制感染提供依据.方法 VITEK-60型全自动微生物分析仪检测屎肠球菌对临床常用抗菌药物的敏感性,E-test法检测160株屎肠球菌对万古霉素的MIC值.结果 2005-2008年屎肠球菌对青霉素、左氧氟沙星和高浓度庆大霉素的耐药率均＞50.0％,四环素的耐药率较低,历年均有万古霉素耐药菌株检出,4年间分离株对万古霉素MIC值均数分别为1.88、1.69、1.70、1.82 μg/ml,结果变化不大,对其中一株耐万古霉素屎肠球菌进行基因型检测,证实为vanA型.结论 屎肠球菌耐药情况严重,并有一定比例的万古霉素耐药菌株检出,但万古霉素敏感株历年的MIC值变化不明显.     

Ⅰ类整合酶与大肠埃希菌耐药关系的初步研究

目的 了解医院大肠埃希菌临床分离株的耐药性变迁及Ⅰ类整合酶在产与非产ESBLs大肠埃希菌中的分布状况,分析和评估Ⅰ类整合酶在该菌耐药中的作用.方法 按CLSI 2010年标准,用K-B法进行药敏试验,双纸片协同法检测产ESBLs株,PCR法扩增Ⅰ类整合酶基因;数据经x2检验进行统计学分析.结果 2006-2010年大肠埃希菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因等耐药性较低,对其他各类的药物表现出较高的耐药率,未检出亚胺培南耐药株;部分菌株对氨基糖苷类药物的耐药性有稍下降的趋势;150株大肠埃希菌中104株Ⅰ类整合酶扩增阳性,产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶的检出率为71.8％,非产ESBLs菌株中检出率为66.6％,差异无统计学意义;Ⅰ类整合酶阳性菌株和阴性株对氨基糖苷类抗菌药物耐药率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院大肠埃希菌5年中耐药性多呈轻度升高趋势,Ⅰ类整合酶与产ESBLs耐药无关,Ⅰ类整合酶阳性株对多种抗菌药物的耐药率大于整合酶阴性菌株,建议临床加强对大肠埃希菌耐药性的监测.