不同来源胰腺干细胞分化为胰岛样细胞团比较研究

目的 比较不同来源的胰腺干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞团的可行性及效率.方法 分别取孕16天胎鼠胰腺(A组,5只)、糖尿病大鼠胰腺(B组,5只)、正常大鼠胰腺(C组,5只)经体外分离纯化获得巢蛋白(nestin)阳性胰腺干细胞,免疫荧光组化法比较各组干细胞中PDX-1的表达情况;添加各种诱导分化因子,观察胰岛样细胞团出现的时间并行双硫腙染色鉴定.结果 各组均可分离纯化出Nestin阳性胰腺于细胞,免疫荧光组化显示A组PDX-1阳性的细胞数(50%)多于B组(45%)及C组(42%),经诱导分化各组胰腺干细胞均可分化成胰岛样细胞团,并经双硫腙染色鉴定证实为分化胰岛,但各组细胞团形成时间不同,以A组分化为胰岛样细胞团所需时间较短(10±3)天,而B组及C组所需时间较长,分别为15±2天及16±3天,各组分化时间存在统计学差异(P＜0.05).结论 不同来源的胰腺干细胞均可分化为胰岛样细胞团,以胎鼠胰腺干细胞定向分化为胰岛样细胞团的效率最高.     

建立小鼠腹腔心脏移植模型的方法改进

背景：小鼠心脏移植模型目前有颈部移植和腹腔移植。由于颈部空间狭窄,颈总动脉相对细小,移植心脏易于周围组织粘连,限制移植心脏搏动,不利于移植物长期观察。腹主动脉相对较粗,易于吻合,且长期血管通常率高,能够对移植心脏长期观察进行慢性移植物血管病变研究。 目的：对小鼠腹部心脏移植的技术方法进行改进,为进行移植免疫学研究提供动物模型。 方法：采用供心主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉端侧吻合方法对小鼠进行腹部心脏移植,按随机数字表法将小鼠分为3组,同系移植组为同种同基因C57→C57,同种移植组为同种异基因Babl/c→C57,抗CD45RB mAb组为抗CD45RB mAb 200 μg腹腔注射Babl/c→C57。以供心搏动有力,且小鼠存活72 h以上视为移植成功。设移植后40 d为观察终点。 结果与结论：共实施手术36例次,受体存活30只,成功率为83.3%。其中受体准备时间为(15±2) min,供心摘取时间为(8±1) min,血管吻合时间为(33±2) min。抗CD45RB mAb腹腔注射组小鼠移植心脏存活时间较同种移植组明显延长(P=0.001)。提示所建立的小鼠心脏移植模型稳定可靠,可用于移植免疫学方面的研究。抗CD45RB mAb可明显延长移植心脏存活时间。     

胎鼠胰腺干细胞体内移植向胰岛样细胞团的分化

背景:由于干细胞的转分化受细胞外基质和基因程序的调控,因此在体外很难模拟体内干细胞巢的微环境而使干细胞定向分化,或许干细胞原位移植是可行方法之一.目的:探讨胎鼠胰腺干细胞在糖尿病鼠体内不同部位移植后分化为胰岛细胞团的可能性.设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2006-03/2007-04在深圳市人民医院中心实验室完成.材料:16 d龄SD胎鼠12只,10周龄200-250 g的SD雌鼠50只,均由广东省实验动物中心提供.方法:分离纯化胎鼠胰腺干细胞.经荧光原位杂交检测为雄性的第5代胎鼠胰腺干细胞用于体内移植.50只SD雌鼠取10只作为正常对照组,余40只通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模后分为4组:胰腺实质内移植组在胰腺实质内多点注射1×106个雄性胎鼠胰腺干细胞,肝内移植组行门静脉穿刺注射等量细胞悬液,肾包膜下移植组于左肾包膜下注射等量细胞悬液,模型对照组胰腺实质内多点注射相同体积的PBS液,10只,组,培养8周.主要观察指标:定期监测大鼠血糖及血浆胰岛素水平,观察胰腺、肝脏及肾脏组织病理学变化.结果:雄性胎鼠胰腺干细胞培养传3代后,巢蛋白阳性细胞率为74.1%.胰腺实质内移植组在移植后第3周血糖开始下降,血浆胰岛素水平逐渐升高;第5周血糖降至正常水平并维持,血浆胰岛素达到正常水平,病理学观察在胰腺内可见外源性胰岛样细胞团,胰岛素免疫组化染色呈阳性,巢蛋白免疫组化染色呈强阳性,荧光原位杂交检测Y染色体呈阳性.肝内移植组、肾包膜下移植组大鼠仍维持高血糖状态,相应组织内均未见外源性细胞团形成.结论:分离纯化的胎鼠胰腺干细胞存胰腺内原位移植后,于体内可转分化为胰岛样细胞团,并使血糖降至正常水平.     

老年病人行腹腔镜胆囊切除术经验（附30例报告）

我院腹腔镜外科于1995年10月～1996早6月成功施行腹腔镜胆囊切除术(Larparoscorpic cholecystectomy LC)310例,其中老年人30例,平均半龄65岁,均取得满意效果。病程5年以上者13例,B超和术中证实胆囊结石嵌顿、胆囊萎缩、胆囊充满型结石16例,22例有并存疾病。LC治愈29例,其中1例因胆囊萎缩与横结肠粘连紧密,中转开腹证实为胆囊横结肠痿。无并发症发生,24小时内肠蠕动恢复,24～48小时肛门排气,进半流质并下床活动。48小时内体温恢复正常,术后5～7天出院。我们认为术前进行充分准备,注意术中监测和处理,加强并发症的预防,对老年胆石症病人施行LC术是安全和适宜的。     

腹腔镜小儿腹股沟斜疝内环缝合并疝囊高位结扎术的建立与评价

腹腔镜治疗小儿腹股沟斜疝与开腹手术一样，主要操作步骤是疝囊高位结扎，由于腹腔镜可以同时探查双侧腹股沟，因此较开腹疝囊高位结扎更彻底，但腹腔镜小儿腹股沟斜疝术后复发率仍有0．5％～2．7％。为进一步降低小儿腹腔镜疝囊高位结扎术后复发率，我院从2003年1月起，建立并开展了腹腔镜小儿腹股沟斜疝内环缝合并疝囊高位结扎术，该术式在国内外尚未见报道，现对比腹腔镜小儿腹股沟斜疝疝囊高位结扎术报告如下。     

美国医学中心见闻及对筹建深圳市医学中心的启示

我国城市创办医学中心尚无先例。为借鉴发达国家医学中心的经验,高起点、高层次地构思深圳市医学中心的发展规划,深圳市政府、北京大学、香港科技大学有关领导和专家组成医学考察团,对美国加州大学旧金山医学中心(UCSF)、圣路易斯市华盛顿大学医学中心(WU)进行专题考察。笔者有幸成为考察团成员,对美国著名大学医学中心的体制、科研投入、产业发展和医学中心的未来发展趋势等饶有兴趣。十多天     

卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球在正常大鼠体内的靶向分布研究

 目的 观察卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖纳米球 (C-Fe@CN-CN) 经肝动脉注射结合磁场引导下,在正常大鼠体内的组织分布情况。 方法 SD 大鼠 80 只,随机均分为卡铂组（ A 组）和 C-Fe@CN-CN 结合磁场组（ B 组）。肝动脉插管后, A 组注入卡铂溶液; B 组注入 C-Fe@CN-CN 分散液,以肝左叶为靶区,施加磁场 30 min 。分别于相应时间点采集标本,测定组织中卡铂浓度,观察 C-Fe@CN-CN 在各组织沉积情况。另将 C-Fe@CN-CN 用 ⁹⁹ Tc 标记后,观察体内放射性核素分布情况。 结果 B 组靶区肝卡铂峰浓度 (<>c_max)38.47 μg·g^-1 ,为非靶区肝（ 14.79 μg·g^-1 ）的 2.6 倍,为 A 组肝（ 4.98 μg·g^-1 ）的 7.7 倍。 48 h 时 B 组靶区肝卡铂浓度 3.11 μg·g^-1 ,为非靶区肝（ 0.35 μg·g^-1 ）的 8.9 倍, A 组肝卡铂浓度已低于检测限。 B 组肾、脾和肺 <> c _max 分别为 29.94 , 1.54 和 1.76 μg·g^-1 , A 组分别为 37.78 , 2.14 和 2.34 μg·g^-1 , 2 组差异有显著性。组织切片显示, C-Fe@CN-CN 聚集于靶区肝细胞间和肝窦中,非靶区肝内少见 C-Fe@CN-CN 的聚集, 其他 脏器内未见聚集的 C-Fe@CN-CN 。核素扫描显示,放射性核素浓集于靶区肝, 其他 脏器分布很少。 结论 C-Fe@CN-CN 在体内具有良好的磁靶向性和缓释性,能选择性聚集于磁靶区的细胞间隙,平稳释放药物,成倍提高靶区药物浓度,延长维持时间,同时显著性降低 其他 器官的药物浓度。     

核酸条码标识法PSA检测试剂盒的研制及验证

目的：建立核酸条码标识法检测前列腺特异性抗原（PSA）的方法,临床血清标本验证灵敏度、特异性等指标,并与试剂盒ELISA及RIA检测结果比较。方法：采用自制免疫磁球和双标记纳米金探针,利用双抗体夹心法原理,将PSA的检测转化为对核酸条码片段的检测,制备核酸条码法PSA检测试剂盒,对45例前列腺癌患者,45例前列腺良性增生患者,15例其它肿瘤患者,30例正常人群血清标本进行验证。结果：临床血清标本灵敏度约92,特异性约为68,假阳性率32,检测平均回收率大于95,批内变异系数（CV）为6.24,重复性平行性良好。与ELISA及RIA进口试剂盒检测结果比较,三法的差异无显著性（P〉0.05）,相关性良好,吻合度强。结论：建立的核酸条码标识PSA检测方法,为超微量蛋白质检测提供一种新的方法。     

人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒的制备与评价

摘要 背景：对抗肿瘤药物靶向治疗和肿瘤细胞多药耐药产生的问题,载阿霉素海藻酸钠纳米粒经改性,偶联人转铁蛋白,生成的人转铁蛋白修饰载药纳米粒,可用于靶向肿瘤药物载体。 目的：制备人转铁蛋白修饰的载阿霉素海藻酸钠纳米粒并进行表征鉴定,检测其表面蛋白活性。 方法：采用优化的微乳化-离子交联方法制备包覆阿霉素的海藻酸钠复合纳米粒,以水溶性碳二亚胺为交联剂,将载阿霉素海藻酸钠纳米粒与人转铁蛋白连接,制备出人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒。透射电镜观察纳米粒的外观大小、形态;高效液相色谱法分析纳米粒的包封率和载药量;流式细胞仪检测其表面人转铁蛋白的活性。 结果与结论：人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒呈球形,平均粒径为170 nm。阿霉素的加入量可影响纳米粒的包封率,当阿霉素的加入量为纳米粒的10%时,包封率和包裹量均最佳。每毫克载药纳米粒可与约65 μg人转铁蛋白连接。人转铁蛋白修饰的载药纳米粒在流式细胞仪上除去非特异性吸附后还有67.3%荧光显示,说明人转铁蛋白修饰的载药纳米粒大部分都偶联上了人转铁蛋白抗体并能保持抗体活性,从而为载药纳米粒特异性靶向肿瘤细胞提供了足够的靶向动力。微乳化-离子交联方法制备方法简便可靠,制得的人转铁蛋白修饰载阿霉素海藻酸钠纳米粒有望成为具有潜在价值的一种特异性靶向药物载体。 关键词：海藻酸钠;阿霉素;人转铁蛋白;纳米粒;靶向;生物材料与纳米技术 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.014     

间充质干细胞联合胰岛移植对受体鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)与胰岛共移植时,探讨MSCs如何通过T淋巴细胞亚群发挥免疫抑制作用。方法 Balb/c小鼠骨髓MSCs,与C57LB/6小鼠脾脏分离的T淋巴细胞和Balb/c小鼠脾淋巴细胞共培养,监测对T淋巴细胞增殖能力和细胞周期影响。与C57LB/6小鼠来源的T淋巴细胞共培养,流式细胞术分析T淋巴细胞亚群的变化。用Balb/c小鼠的骨髓MSCs和胰岛联合移植到C57BL/6糖尿病模型鼠,流式细胞术分析受体鼠T淋巴细胞亚群的变化。结果 MSCs可明显抑制T淋巴细胞增殖能力,使T细胞滞留在G0/G1期。使Th1/Th2和Tc1/Tc2比值向Th2和Tc2倾斜,对初始和记忆T细胞具有明显的抑制作用。MSCs联合胰岛移植可使免疫排斥反应减轻。结论 MSCs可抑制T淋巴细胞的增殖,Th1/Th2和Tc1/Tc2比值向Th2和Tc2倾斜,下调初始和记忆T细胞,以发挥免疫抑制作用。