应力环境下破骨细胞碳酐酸酶Ⅱ的基因表达

目的 研究流体切应力条件下大鼠破骨细胞碳酐酸酶Ⅱ（CaⅡ）mRNA的表达变化,探讨应力环境下大鼠破骨细胞的功能活动情况。方法 采用1,25-（OH） 2D3/地塞米松诱导SD大鼠骨髓细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和扫描电镜鉴定破骨细胞,0.25%胰蛋白酶/0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）进行细胞纯化。对破骨细胞施加不同力值和作用时间的流体切应力,采用实时荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测CaⅡ mRNA的表达。结果 随着力值的增加和作用时间的延长,破骨细胞CaⅡ mRNA的表达量分别呈下降趋势（P＜0.05）。结论 在一定范围的流体切应力作用下,破骨细胞CaⅡ mRNA的表达受到抑制,表达水平与力值大小和加载时间分别存在负相关关系。     

幽门螺杆菌对胃癌细胞中钙调蛋白基因启动子区去甲基化的诱导作用

目的:探讨钙调蛋白(CaM)基因在胃癌组织中的表达及其启动子区甲基化水平与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染的关系.方法:用实时荧光定量PCR法分别检测30例胃癌组织、癌周组织及转移淋巴结组织中CaM基因的表达量,并分析其表达量与H.pylori感染的关系.体外建立H.pylori感染胃癌细胞的实验模型和H.pylori细胞毒素相关蛋白A(cagA)基因稳定转染胃癌细胞的实验模型,以未处理的胃癌细胞为对照,用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测实验模型细胞中CaM基因启动子区甲基化水平.结果:胃癌组织中CaM基因的表达量是癌周组织的2.08倍(P<0.05);H.pylori感染组中CaM基因的表达量是无H.pylori感染组的6.11倍(P<0.01),H.pylori及其毒素蛋白CagA可引起CaM基因启动子区-276位点发生去甲基化修饰.结论:H.pylori感染通过所分泌的毒力因子CagA诱导胃癌细胞中CaM基因启动子区去甲基化修饰,从而上调胃癌组织中CaM基因的表达.     

抗坏血酸对大鼠成骨细胞膜片 BMP-2 mRNA 表达的影响

目的:研究抗坏血酸对成骨细胞膜片BMP-2 mRNA表达的影响。方法:原代培养并鉴定大鼠成骨细胞,采用物理刮取法,体外构建成骨细胞膜片;成骨细胞接种后,分别加入15、50、85 mg/L抗坏血酸,连续培养1~2周,RT-q PCR检测成骨细胞膜片BMP-2 mRNA的表达。结果:获得的细胞符合成骨细胞形态学特征特性。可构建管状形态的成骨细胞膜片。组间比较,第1周和第2周成骨细胞膜片中BMP-2 mRNA表达量实验组均高于对照组,以50 mg/L组的表达量最高(第1周P<0.05;第2周P>0.05);组内比较,各组表达量第2周均高于第1周(P<0.05)。结论:抗坏血酸可促进成骨细胞膜片BMP-2mRNA表达。     

时钟基因Bmal1对鼻咽癌移植瘤放疗敏感性的影响

目的:探讨双向调控时钟基因Bmal1(brain and muscle arnt-like1)对鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长的影响及与放疗敏感性的关系。方法:采用慢病毒感染方法,构建Bmal1基因CNE1OE(过表达组)、CNE1OENC(过表达对照组)、CNE1sh3(低表达组)、CNE1shNC(低表达对照组)4株细胞,Western blot验证各组细胞Bmal1蛋白表达情况;4株细胞分别皮下注射相应的4组裸鼠,移植瘤生长后测量其体积;给予6-MeV电子线15 Gy照射裸鼠移植瘤,观察放疗后各组移植瘤体积变化情况。剥离移植瘤,RTPCR及Western blot分别检测Bmal1、P53、P21 mRNA及蛋白表达情况。结果:Western blot结果提示,与各自对照组对比,CNE1OE组Bmal1蛋白过表达,CNE1sh3组Bmal1蛋白低表达,表明细胞转染成功。成功构建裸鼠移植瘤模型,CNE1OE组裸鼠移植瘤体积明显小于CNE1OENC组,CNE1sh3组体积明显大于CNE1shNC组(P<0.05)。放疗后,CNE1OE、CNE1OENC、CNE1shNC组裸鼠移植瘤体积均缩小(P<0.05),其中CNE1OE组缩小最明显。CNE1sh3组放疗前后自身体积变化差异无统计学意义。Bmal1基因、P53及P21的mRNA及蛋白相对表达量在CNE1OE组明显高于CNE1OENC组(P<0.05),CNE1sh3组则明显低于CNE1shNC组(P<0.05)。结论:Bmal1基因过表达能抑制鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长,增强其放疗敏感性,可能与P53、P21蛋白上调相关;敲低则促进移植瘤生长,导致其辐射抗拒,可能与P53、P21蛋白下调相关。     

腺病毒载体介导CagA基因表达对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响北大核心CSCD

目的研究过表达CagA对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响。方法构建CagA重组腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP(pAdeno-CagA),转染HEK293细胞,包装腺病毒,以感染复数(Multiplicity of infection, MOI) 50感染原代胃癌细胞72 h,并用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东亚株GZ7(CagA^+)以MOI 50感染原代胃癌细胞24 h,通过Western blot检测CagA和已糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶1/2(PKM1/2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)糖酵解代谢酶的蛋白表达,采用流式细胞术检测胃癌细胞周期分布。结果成功构建了CagA重组腺病毒载体pAdeno-CagA,用pAdeno-CagA腺病毒和Hp GZ7感染原代胃癌细胞后糖酵解代谢酶HK2、ENO1、GLUT1的表达与空载组或Hp非感染组比较均显著下调(P<0.05)。与空载组比较,pAdeno-CagA感染胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h,其G2/M期细胞百分比显著增加(P<0.05),感染72 h的空载组和CagA腺病毒组G2/M期的比值分别为16.90%和65.93%。结论 Hp通过CagA使原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达下调,可能与DNA损伤使细胞阻滞在G2/M期有关。     

幽门螺杆菌毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)主要毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白par-kin、p62、LC3表达的影响,为Hp致胃癌的研究提供理论基础。方法用cagA基因失活突变Hp菌株(1004HpAcagA)和野生型Hp/cagA+菌株(1004Hp)感染原代胃癌细胞,感染6 h收集细胞蛋白,用高表达cagA的真核表达载体pcDNA3.1/cagA脂质体转染胃癌细胞AGS,24 h收集细胞蛋白,用Western blot检测各组细胞线粒体自噬相关蛋白parkin.p62.LC3表达变化。结果parkin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在1004 HpAcagA感染组分别为0.97±0.23 J.71±0.23,1.03+0.14,1004 Hp感染组分别为1.61±0,32,2.26±0,08,1.32±0,04,1004 Hp感染组较1004 HpAcagA感染组升高了1.66倍、1.32倍、1.27倍,差异有统计学意义(F值分别为7.96,15.35,11.09,P<0.05);par-kin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在pcDNA3.1空载体转染组分别为1.15+0.14,0.75+0.23,0.74±0,19,pcDNA 3.1/cagA转染组分别为1.49±0,02,1.01+0.02、l.29±0.07,pcDNA3.1/cagA转染组较pcDNA3.1空载体转染组升高1.29倍、1.35倍、1.74倍,差异有统计学意义(F值分别为17.48,14.02,21.06,P<0.05)。Hp/cagA+感染和pcDNA 3.1/cagA转染取得一致结果,提示Hp cagA注入胃上皮细胞后影响细胞线粒体自噬相关蛋白的表达。结论HpCagA对线粒体自噬有一定的调控作用,其可能是Hp诱导胃癌发生发展的分子机制。     

CD133+与CD133-人原代胃癌细胞的差异表达基因及核心基因的筛选

目的 通过生物信息学方法筛选出CD133+与CD133-人原代胃癌细胞的差异表达基因(DEGs),寻找可能参与胃癌发生的关键基因.方法 根据人CD133+和CD133-人原代胃癌细胞的转录组数据,以|log2FC|≥1,P<0.05为标准筛选DEGs;用Metascape对DEGs进行基因本体论(GO)富集及京都基因和...     

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响.方法 取前期分离的H.pylori东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建...     

前列腺特异抗原的随龄变化

为了探讨血清前列腺特异抗原（ＰＳＡ）的随龄变化，用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ检测了１００例前列腺正常的男性血清ＰＳＡ的浓度，结果显示，年龄与血清ＰＳＡ显著相关（Ｐ〈０．０１），随着年龄的增加，ＰＳＡ浓度逐渐增加（Ｐ〈０．０５）。不同年龄段的第９５％百分位数分别为；〈５０岁者为３．８μｇ／Ｌ，５０￣５９岁者为４．４μｇ／Ｌ，６０￣６９岁者为６．８μｇ／Ｌ，≥７０岁者为７．７μｇ／Ｌ。因此，不同年龄段应采用不