氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因在人胃癌组织中的表达

  目的  研究Hp(Helicobacter pylori, Hp)感染在胃癌发生发展中的作用。  方法  运用实时定量PCR法检测氯离子通道蛋白基因(Chloride ion channel protein, CICP)及β-肌动蛋白基因在50例人胃癌组织的表达, 并分析其表达与临床病理特征和胃癌组织中Hp感染状态的关系。  结果  两个基因在人胃癌组织及淋巴结组织的表达显著高于癌旁组织(P < 0.05)。氯离子通道蛋白基因的表达与胃癌患者pTNM分期及患者生存期相关(P < 0.05), 而β-肌动蛋白基因的表达与pTNM分期及淋巴结转移相关(P < 0.05);人胃癌组织中Hp的感染与氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因的表达上调相关(P < 0.05)。  结论  Hp的感染可以上调胃癌组织中氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因的表达, 检测这两个基因的表达对预测胃癌患者的预后有一定作用。      

爱迪注射液联合介入化疗加体外照射治疗原发性肝癌的临床研究

原发性肝癌在我国是常见的恶性肿瘤,治疗以手术为主．采用单纯的肝动脉插管化疗栓塞（TACE）是目前治疗肝癌的重要手段之一,但疗效仍欠佳｛‘、’］,单纯外照亦是一种可行的治疗方法,但效果也不满意。1996年2月至1997年12月间,我们以爱边注射液联合介入化疗加肝体外照射治疗原发性肝癌进行了临床对比研究,现将资料完整的32例报告如下：1．资料与方法1．1男性23例,女性9例,年龄对岁至73岁,中位年龄51岁。1．2所有病例均经CL或MRT、B超A：Flrp及肝穿检查证实为原发性肝癌（按lop年全国肝癌防治研究协会制定的标准）。1．3分型：…     

胃泌素/CCK-B受体环在多种肿瘤中的表达

目的：研究胃泌素（GAS）在多种肿瘤中的表达.方法：应用免疫组织化学检测由40例肿瘤组织组成（含87个点）的组织芯片中GAS的表达,同时检测临床相应的肿瘤组织和胃癌细胞SGC-7901、AGS、肺癌细胞A549、肝癌HepG2、乳腺癌细胞MCF-7中GAS和胃泌素受体（CCK-BR）的表达.结果：GAS主要表达于细胞质,组织芯片检测发现GAS在食管鳞状细胞癌、胃腺癌、结肠腺癌、肝细胞性肝癌、肺鳞状细胞癌、乳腺浸润性导管癌中表达;GAS在临床肿瘤标本胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌和胃癌细胞SGC-7901、AGS、肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2及乳腺癌细胞MCF-7中证实GAS阳性表达,同时发现CCK-BR也在胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌组织及SGC-7901、AGS、A549、HepG2、MCF-7细胞株中表达.结论：GAS和CCK-BR在消化道和非消化道肿瘤中表达,胃泌素/CCK-B受体环可能在胃癌、肺癌、肝癌及乳腺癌中起重要作用.     

幽门螺杆菌毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)主要毒力蛋白CagA对胃癌细胞线粒体自噬相关蛋白par-kin、p62、LC3表达的影响,为Hp致胃癌的研究提供理论基础。方法用cagA基因失活突变Hp菌株(1004HpAcagA)和野生型Hp/cagA+菌株(1004Hp)感染原代胃癌细胞,感染6 h收集细胞蛋白,用高表达cagA的真核表达载体pcDNA3.1/cagA脂质体转染胃癌细胞AGS,24 h收集细胞蛋白,用Western blot检测各组细胞线粒体自噬相关蛋白parkin.p62.LC3表达变化。结果parkin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在1004 HpAcagA感染组分别为0.97±0.23 J.71±0.23,1.03+0.14,1004 Hp感染组分别为1.61±0,32,2.26±0,08,1.32±0,04,1004 Hp感染组较1004 HpAcagA感染组升高了1.66倍、1.32倍、1.27倍,差异有统计学意义(F值分别为7.96,15.35,11.09,P<0.05);par-kin、p62、LC3蛋白表达检测灰度值在pcDNA3.1空载体转染组分别为1.15+0.14,0.75+0.23,0.74±0,19,pcDNA 3.1/cagA转染组分别为1.49±0,02,1.01+0.02、l.29±0.07,pcDNA3.1/cagA转染组较pcDNA3.1空载体转染组升高1.29倍、1.35倍、1.74倍,差异有统计学意义(F值分别为17.48,14.02,21.06,P<0.05)。Hp/cagA+感染和pcDNA 3.1/cagA转染取得一致结果,提示Hp cagA注入胃上皮细胞后影响细胞线粒体自噬相关蛋白的表达。结论HpCagA对线粒体自噬有一定的调控作用,其可能是Hp诱导胃癌发生发展的分子机制。     

胃癌组织及转移淋巴组织中胃泌素基因的表达

目的:分析胃癌患者癌组织及转移淋巴结组织中胃泌素基因的表达,进一步阐明胃泌素与胃癌发生、发展的相关机制,为胃癌的防治提供实验依据.方法:收集胃癌手术患者的癌组织、癌旁组织、淋巴结组织,提取及纯化总RNA,采用Taqman实时荧光定量PCR技术测定胃泌素mRNA的表达.结果:胃泌素mRNA表达在胃癌组织较癌旁组织降低,为...     

幽门螺杆菌NCTC11637、NCTC11639毒素相关基因A的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

目的克隆幽门螺杆菌毒素相关基因A(cytotoxin-associated gene A,CagA)全长序列并进行序列分析,构建表达CagA的真核表达载体,研究CagA调控胃泌素基因的表达。方法PCR扩增出CagA基因全长片段后构建克隆载体pMD18-T/CagA7和pMD18-T/CagA9,测序结果登录GenBank,登录号分别为GQ161098(NCTC11637)和GQ161099(NCTC11639),用测序后筛选的PstI和BamHI内切酶将原核载体上的CagA基因酶切后连接到pcDNA3.1/ZEO(-)真核表达载体上,构建真核表达载体pcDNA3.1ZEO(-)/CagA7和pcDNA3.1ZEO(-)/CagA9,并经双酶切和CagA PCR扩增鉴定,最后转染胃癌细胞,检测胃癌细胞中胃泌素基因的表达。结果序列比对结果显示NCTC11637和NCTC11637 CagA的同源性为88.77%,NCTC11637与已收录的NCTC11637(AB015416)同源性为99.22%,序列分析显示两者均有两个Ca-gA酪氨酸磷酸化位点,转染细胞后CagA上调胃泌素基因的表达。结论成功克隆了CagA全长基因,并构建了含CagA全长基因的真核表达载体,在胃癌细胞内上调了胃泌素基因的表达。     

DKK1 对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的：探讨沉默厚体1（DKK1）基因对胃癌AGS细胞增殖、周期和凋亡的影响及其作用机制。方法：构建DickkopfsiRNA（DKK1-siRNA）稳定转染细胞株,提取稳定转染细胞的RNA及总蛋白,qPCR和WB实验分别检测DKK1 mRNA及蛋白的表达水平。实验分为空白对照（Control）组、阴性对照（shNC）组及沉默DKK1（DKK1-shRNA）组,CCK-8 实验检测各组培养0、24、48、72、96、120、144 h 后AGS细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡水平。检索HPA数据库,分析DKK1 与胃癌临床病理的关系。结果：成功建立了稳定沉默DKK1 基因的胃癌细胞株AGS,证实DKK1-shRNA组细胞中DKK1 mRNA及蛋白表达水平分别比Control 组和shNC组降低到72%和47%（均P<0.05）。细胞增殖曲线显示,与Control 和shNC组比较,DKK1-shRNA组细胞培养72 h 后其增殖显著降低（P<0.05）。与shNC组比较,DKKl-shRNA组S期细胞从32.06%降低到25.87%,G2/M期细胞由8.49%上升到21.26%,细胞凋亡率从10.34%上升到20.65%,差异均有统计学意义（均P<0.05）。HPA数据库的分析显示,胃癌组织中DKK1 mRNA水平显著高于胃正常组织,DKK1 mRNA的高表达与胃癌患者生存率呈负相关（均P<0.05）。结论：沉默DKK1基因可抑制胃癌AGS细胞的增殖,阻滞细胞于G2/M期并促进细胞凋亡;DKK1在胃癌中发挥促癌作用。     

CDH1受幽门螺杆菌感染调控及其在胃癌组织中表达分析

目的 探究幽门螺杆菌(Hp)对E-钙黏蛋白(CDH1)表达的影响及CDH1在胃癌(GC)组织中的表达情况,为进一步探索CDH1在Hp引起胃癌中的作用提供理论基础.方法 用Hp灌胃蒙古沙鼠,3、12、24个月后分别取其胃组织,进行免疫组化染色检测CDH1的表达;Hp感染胃上皮细胞AGS,24 h后收集样本,Western...     

阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖和凋亡及其信号通路的影响

目的 探讨阻断胃泌素受体对胃癌细胞增殖、凋亡及其相关通路中关键蛋白表达的影响.方法 试验组使用终浓度为5mmol/L的丙谷胺(胃泌素受体阻断剂)处理胃癌细胞SGC-7901和AGS6d,以不加丙谷胺培养的胃癌细胞SGC-7901和AGS为对照组.四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测各组细胞的生长并绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测各组细胞的细胞周期,Annexin V-FITC/PI 双染法检测各组细胞的凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测典型Wnt/β-catenin通路、核因子κB、磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、核转录因子RelA、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、糖原合酶激酶3β mRNAs的表达;免疫蛋白印迹检测β-catenin蛋白质的表达.结果 用丙谷胺处理后,试验组细胞的生长速度低于对照组细胞,细胞周期中S期细胞百分数也低于对照组细胞,而G0/G1期细胞百分数高于对照组细胞(P<0.05);试验组的细胞凋亡数高于对照组(P<0.05); RT-qPCR结果显示:丙谷胺处理后,胃癌细胞中β-catenin的 mRNA表达量降低(P<0.05).Western blot结果显示丙谷胺处理后,β-catenin蛋白质的表达量降低(P<0.05).结论 阻断胃泌素受体能下调胃癌细胞中β-catenin的表达,抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡.