Fascin真核表达载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达

目的：构建fascin基因的pcDNA3.1（＋）表达载体pcDNA3.1（＋）-fascin,将其转染肺癌A549细胞,观察其表达,并检测转染前后细胞内F-肌动蛋白（F-actin）的变化。方法：应用RT-PCR从Hela细胞中扩增fascin基因,酶切后和真核表达载体pcDNA3.1（＋）重组,获得重组表达载体pcDNA3.1（＋）-fascin。经酶切、电泳,DNA测序鉴定后,将其及对照空载体转染肺癌A549细胞,采用Western blotting检测fascin在A549细胞中的表达情况;免疫荧光染色后采用激光共聚焦显微镜观察fascin对F-actin的影响。结果：成功克隆fascin基因片段,并将其重组到pcDNA3.1（＋）载体中,经酶切及DNA测序鉴定正确。pcDNA3.1（＋）-fascin转染A549细胞,Western blotting鉴定转染后fascin在A549细胞中高表达。激光共聚焦显示fascin基因能够在A549细胞内促进F-actin形成丝状突出。结论：成功构建了pcDNA3.1（＋）-fascin真核表达载体,并将其转染肺癌A549细胞;激光共聚焦观察显示fascin能够促进A549细胞内F-actin形成丝状突出,可能是促进A549细胞转移的结构基础之一。     

NDRG2在非小细胞肺癌中的表达意义

目的：探讨NDRG2蛋白在tM,细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其在病理分类、分级、TNM分期中的差异性,为进一步研究NDRG2在NSCLC中的作用及其机制提供依据。方法：采用免疫组化EnVinsion法检测NDRG2蛋白在155例tP,I,细胞肺癌中的表达,统计学分析其病理分类、分级及临床TNM分期的差异性。结果：NDRG2阳性表达主要定位于胞质中和胞膜上,在癌和相应正常肺组织中总阳性率分别为63．23％、100％,两者相比差异性非常显著（P=0．0000）,其中肺鳞癌和腺癌阳性率分别为54．65％、73．91％,与正常组织比差异性均非常显著（P=0．0000）;鳞癌与腺癌间的阳性率和阳性强度差异性显著（P=0．0131）,鳞癌高、中、低分化阳性率分别为87．10％、41．3％和11．11％,经Kruskal—WallisH检验差异性显著（P=0．0000）,腺癌的高、中、低分化的阳性率分别是100．0％、88．89％和31．58％,经检验差异性非常显著（P=0．0000）;鳞癌、腺癌的TNM分期Ⅰ、Ⅱa、IIb、IIIa、Ⅲb的阳性率有逐渐降低的趋势,经检验其差异性显著,P值分别为0．0005、0．0342。结论：NDRG2在NSCLC中低于相应正常组织中的表达,表达的高低与病理分级高低成正比、与TNM分期高低成反比,很可能对NSCLC发生、发展产生重要影响。     

食管鳞癌中ABCG4和V-ATPase表达及其临床意义

[目的]探讨ABCG4、V-ATPase蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义。[方法]采用免疫组化、免疫荧光法检测ABCG4和V-ATPase在66例食管鳞癌中的表达,分析两者表达相关性。[结果]ABCG4、V-ATPase阳性率分别为65.15%、68.18%。ABCG4、V-ATPase的表达与性别、病理分级、TNM分期及淋巴结转移情况有关（P〈0.05）,均与年龄无关。在食管癌及各病理分级、各TNM分期中,ABCG4和V-ATPase的表达均有相关性（P均〈0.001,相关系数rs均〉0.7）。[结论]ABCG4、V-ATPase在食管鳞癌中高表达,可能与耐药、转移有关;两种蛋白表达存在相关性,可能有相互作用的功能。     

TGF-β上调Notch3诱导上皮间质转化在促进肺癌骨转移中的作用

目的:研究TGF-β上调Notch3表达诱导EMT在肺癌骨转移中的作用.方法:免疫荧光、蛋白印记和RT-PCR方法检测Notch3在TGF-β诱导下上皮、间质标记物以及上皮间质转化相关转录因子Twist、Snail和ZEB-1的表达变化;利用慢病毒包装Notch3正义表达载体和ZEB-1 siRNA载体分别上调Notch3和抑制ZEB-1的表达后,采用免疫荧光、蛋白印记方法检测抑制EMT转录因子ZEB-1的表达后,对上皮间质标记物的影响;进而通过体外迁移和侵袭试验观察抑制ZEB-1的表达后对Notch3高表达细胞系的迁移和侵袭能力的影响;最后体外ELISA法检测骨转移相关分子pTHrP和IL-6的表达,探讨Notch3通过诱导EMT在促进肺癌骨转移中的作用.结果:Notch3 siRNA抑制其表达后能够逆转TGF-β诱导的上皮标记物和间质标记物的表达变化,这一现象是通过影响EMT转录因子ZEB-1实现的.进而利用慢病毒包装系统,构建了Notch3过表达细胞株和ZEB-1 siRNA细胞株,免疫荧光和蛋白印记试验发现,Notch3过表达载体能够抑制上皮标记物的表达,上调间质标记物的表达,促进EMT的发生,而抑制ZEB-1的表达后能够逆转这一现象.最后,体外侵袭试验和ELISA试验发现,Notch3高表达能够增加肺癌细胞的侵袭能力以及pTHrP和IL-6的分泌,而抑制ZEB-1的表达后可明显降低其转移能力以及pTHrP和IL-6的分泌.结论:Notch3参与了TGF-β诱导肺癌细胞上皮间质转化过程,并在NSCLC骨转移中发挥作用.     

同种异体近交系小鼠原位气管移植模型的建立

目的:建立近交系小鼠同种异体原位气管移植模型.方法:供受体体质量配对后,C57BL/6 和BALB/c小鼠随机分为2组,每组各10对,A组为C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)组,B组BALB/c(供体) →BALB/c(受体)组,昆明种小鼠10对作为C组即KM(供体) →KM(受体)组. 利用颈前肌肉及周围组织被覆移植气管提供血供建立同种异体小鼠原位气管移植模型. 使用HE染色以及扫描电镜对同种异体小鼠原位气管移植模型进行评估,观察比较上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞等指标.结果:A, B组全部存活,C组存活6只. A, C组移植气管均发生一定程度的排斥反应,B组无排斥反应发生. A, B, C三组上皮积分分别为: 1.094±0.120分,2.872±0.059分及0.995±0.444分;无核软骨细胞数/骨细胞总数比值分别为:(27.22±1.09)%, (10.60±1.01)% 及(31.40±6.43)%;淋巴细胞计数分别(20.18±1.31)个/HPF,≤5个/HPF及(22.55±4.87)个/HPF. A, B组及C,B组各项指标相比均有统计学意义,而A,C组相比则差异无统计学意义;且C组各数值离散程度均大于A组.结论:成功建立了C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)小鼠原位气管移植模型. 近交系及封闭群模型均能反应移植气管的各种病理生理变化,但封闭群模型稳定性较近交系差.     

搏，还是不搏？——外科医生面临的困境

医疗费用高,“看病贵”和“看病难”是长期困扰中国医疗服务的痼疾,面对生命质量低下的重症贫困患者,是否应该手术施救？这样一个问题的答案应该是毫无疑问的。这是一个涉及医疗原则、医学伦理及社会医疗保障等多方面的难题。因此,完善医疗救助,加强医疗保障体系,增强政府、医疗机构及社会力最关注,对于缓解贫困患者的医疗施救问题具有重要作用。     

单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白对香烟烟雾提取物刺激A549细胞后产生效应的影响

目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激的小鼠肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响。方法将A549细胞分为过表达SIGIRR组和对照组。构建含有SIGIRR c DNA全长的真核表达载体pc DNA3.1(+),瞬时转染小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,使SIGIRR在A549细胞中过表达,采用半定量Western blot和RT-PCR法检测其表达。以CSE刺激对照组及过表达SIGIRR组中A549细胞后,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)水平,双荧光素酶报告系统检测环氧化酶2(COX-2)表达水平,化学发光法检测活性氧(ROS)释放水平的变化。结果转染SIGIRR表达载体的A549细胞其SIGIRR表达量显著上升。对照组经CSE刺激后,COX-2表达、ROS释放、IL-6释放水平均显著增高,而过表达SIGIRR组的A549细胞经CSE刺激后,COX-2表达较对照组降低,ROS释放较对照组降低,IL-6释放水平也明显低于对照组(P0.05)。结论 SIGIRR表达上调可以抑制CSE诱导的A549细胞产生ROS、COX-2及IL-6,提示SIGIRR表达上调可能对吸烟所致呼吸道炎症具有抑制作用。     

超声刀在剑突肋缘下前纵隔病变微创切除术中的临床应用

目的评价超声刀在剑突肋缘下前纵隔病变微创切除术中的临床应用价值。方法回顾性分析2015年6月至2017年6月第四军医大学唐都医院胸外科同一诊疗组行前纵隔病变微创切除术217例患者的临床资料。根据手术方式将患者分为两组,超声刀手术组162例,其中男95例、女67例,年龄22~72(46.2±18.7)岁,Ligasure组55例,其中男29例、女26例,年龄31~68(47.7±12.9)岁。统计分析两组患者的手术时间、术中出血量、术中中转率、术后住院时间、患者满意情况、患者疼痛情况及术后并发症等指标。结果所有手术均顺利完成,两组均无死亡、中转开胸病例,两组手术时间[(58.6±34.8)min vs.(72.8±32.6)min,P=0.01]、术中出血量[(36.2±18.7)ml vs.(41.9±12.9)ml,P=0.04]差异具有统计学意义。两组术后住院时间[(4.2±2.6)d vs.(4.5±1.9)d,P=0.36]、患者满意评分(8.6±1.2 vs.8.4±1.7,P=0.34)、术后第1 d疼痛评分(8.3±0.9 vs.8.5±0.6,P=0.13)、第3 d疼痛评分(6.4±1.5 vs.6.9±1.1,P=0.19)、第30 d疼痛评分(1.3±0.7 vs.1.4±0.9,P=0.40)及总体并发症发生率(5.6%vs.9.1%,P=0.35)差异无统计学意义。结论超声刀在剑突肋缘下前纵隔病变微创切除术中具有独特的优势,所有组织的分离、血管的凝断只靠超声刀来完成,在此过程中,掌握超声刀的使用技巧,发挥超声刀的功能非常重要。     

非小细胞肺癌组织ABCG4表达与耐药的相关性研究

目的:探讨ABC膜转运蛋白ABCG4在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与临床病理因素和化疗药物敏感性的相关性.方法:免疫组化EnVinsion法、免疫荧光法检测ABCG4在92例NSCLC组织中的表达,激光共聚焦显微镜观察其定位;MTT法检测相应癌组织对化疗药物的敏感性,分析其与ABCG4表达的相关性.结果:ABCG4阳性表达主要定位于胞膜和胞质,鳞癌阳性率为 67.3%(33/49),腺癌为81.4%(35/43),两者差异有统计学意义,P=0.001;鳞癌Ⅱ期阳性率为41.7%(10/24),Ⅱ～Ⅲ期为92.0%(23/25),差异有统计学意义,P=0.000;腺癌中高分化阳性率为76.7%(23/30),低分化为92.3%(12/13),差异有统计学意义,P=0.033.环磷酰胺、吉西他滨、多柔比星、紫杉醇和顺铂在NSCLC组织中药物敏感性试验结果与其相应组织ABCG4表达相关性检验,P均<0.05,rs均<-0.3,其中鳞癌中rs除紫杉醇外(-0.23)均<-0.3,而腺癌也均<-0.3.结论:ABCG4在NSCLC组织中高表达,表达的高低与病理分类、分级有关,并很可能与NSCLC化疗药物耐药有关.中华肿瘤防治杂志,2009,16(1):31-35     

人食管癌细胞系的建立及其转移相关基因PCNA的表达

目的:建立人食管癌细胞系,并对其肿瘤标志物(caycinoembryanic antigen,CEA)和转移相关基因增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达进行研究。方法:将人食管癌手术标本移植至裸鼠皮下,成瘤后取组织块体外原代培养,光镜和电镜观察细胞形态,测定细胞周期和染色体众数。取部分裸鼠皮下移植瘤接种至裸鼠食管,观察裸鼠体内肿瘤转移特征,采用免疫组化法测定肝转移灶PCNA基因的表达。结果:裸鼠皮下移植瘤组织16d,可形成明显的瘤结节,体外培养获得大量的肿瘤细胞,命名为YXA-1,其形态和超微结构符合鳞状细胞癌的形态学特征,染色体保持人类肿瘤染色体的特点,众数为70～76,细胞中肿瘤标志物CEA。食管癌标本原位移植裸鼠21d时,发生了广泛的肝内侵袭和转移,转移灶中PCNA表达为阳性。结论:人食管癌细胞系YXA-1维持了原发肿瘤的特征,而裸鼠其原位移植模型体现了肿瘤的转移特性,可用于肿瘤的转移研究。